ICS 65.020.20 CCS B35 43 湖南省地方 标准 DB 43/T 3128—2024 饲用富铁酿酒酵母菌液体发酵技术规程 Code of practice for liquid production of Iron-Enriched Saccharomyces cerevisiae for feeding 2024 - 12 - 31发布 2025 - 03 - 31实施 湖南省市场监督管理局 发布 DB 43/T 3128— 2024 I 目次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 发酵工艺 ........................................................................... 1 5 质量检测 ........................................................................... 3 6 档案管理 ........................................................................... 3 附录A（资料性） 饲用富铁酿酒酵母菌液体发酵生产档案 ................................... 4 DB 43/T 3128— 2024 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南省农业农村厅提出。 本文件由湖南农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：湖南省微生物研究 所、常德科雄饲料有限公司。 本文件主要起草人：邬理洋、曾艳、刘宇波、周冰玉、胡浩、汪彬、王春平、周小玲、李晔、黄利 红、陈娴、李翘羽、舒燕、唐少军、郭照辉。DB 43/T 3128— 2024 1 饲用富铁酿酒酵母菌液体发酵技术规程 1 范围 本文件规定了饲用富铁酿酒酵母菌（iron -enriched Saccharomyces cerevisiae ）液体发酵工艺、质量检 测和档案管理等要求。 本文件适用于饲用富铁酿酒酵母菌液体发酵生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件； 不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4789.15 食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 GB/T 13091 饲料中沙门氏菌检验方法 GB/T 13092 饲料中霉菌检验方法 GB/T 13885 饲料中钙、铜、铁、镁、锰、钾、钠和锌含量的测定 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 发酵工艺 工艺流程 工艺流程见图 1。 图1 饲用富铁酿酒酵母菌液体发酵工艺流程 DB 43/T 3128— 2024 2 菌种保藏与活化 4.2.1 菌种保藏 采用30 %甘油管将菌种保藏在 -80 ℃超低温冰箱。 4.2.2 菌种活化 发酵前取出甘油管，自然升温至常温，无菌条件下用接种环挑取少量菌液到麦芽汁琼脂平板划线， 28 ℃培养。 24 h后，挑取生长旺盛的单菌落至麦芽汁琼脂平板重新划线培养，重复 2次～3次以活化酿酒酵母 菌种。 活化好的菌种接种到麦芽汁琼脂斜面培养管中，培养 24 h后冷藏备用。 麦芽汁琼脂配方为麦芽浸粉 20 g、蛋白胨 1 g、葡萄糖 20 g、琼脂 15 g、水 1000 mL、pH自然。 液体菌种制备 4.3.1 液体培养基配方 麦芽浸粉 20 g、蛋白胨 1 g、葡萄糖 20 g、氯霉素 0.1 g、水 1000 mL、pH自然。 4.3.2 装瓶灭菌 液体培养基装液量为三角瓶容量的 30 %～40 %，聚丙烯膜或瓶塞封口。在 121 ℃～126 ℃，0.14 MPa～0.16 MPa 的压力下，保持 30 min。 4.3.3 接种培养 将灭菌后的培养基冷却至 28 ℃以下，无菌条件下从酿酒酵母斜面培养管中挑取 2环～3环菌种， 接种于三角瓶培养基中。 三角瓶置于恒温摇床，在 28 ℃～30 ℃、180 r/min ～220 r/min 条件下振荡培养 24 h。 发酵罐液体菌种制作 4.4.1 发酵罐检修 非连续生产使用的发酵罐，在使用前应检修与清洗，确认设备的电气、机械和控制系统正常。配套 的空气系统、蒸汽系统均应检修正常。 4.4.2 发酵罐清洗与空消 清洗发酵罐及管道后，罐内注入清水，用 NaOH调节pH至9.0，浸泡2 h后通蒸汽煮沸。冷却后用 自来水清洗干净，确保内壁无任何污垢。 发酵罐清洗干净后进行空消。蒸汽进罐升温至 121 ℃，控制压力 0.14 MPa ～0.16 MPa、温度 121 ℃～ 126 ℃， 30 min后关闭所有蒸汽，打开循环冷却水降温至 28 ℃备用。 4.4.3 培养基配方 蔗糖50 g、尿素 4 g、酵母膏 24 g、KH 2PO4 2.5 g、MgSO 4·7H 2O 0.5 g、FeSO 4·7H 2O 4.5 g，水 1000 mL，pH 4.8。 4.4.4 投料与定容