ICS 65.020.20 CCS B 61 DB42 湖北省 地方标准 DB42/T 2296—2024 东方百合鳞茎组培快繁技术规程 Code of practice for rapid propagation of oriental lily bulbs through tissue culture 2024 - 09 - 22发布 2024 - 11 - 22实施 湖北省市场监督管理局 发布 DB42/T 2296 —2024 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. III 1 范围 ................................ ................................ ................. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .......1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............... 1 5 培养基 ................................ ................................ ............... 2 6 鳞茎处理和丛生芽诱导 ................................ ................................ .2 7 试管鳞茎诱导和获得 ................................ ................................ ...2 8 试管鳞茎的移栽 ................................ ................................ .......3 9 病虫害防治 ................................ ................................ ........... 3 10 籽球采收与贮藏 ................................ ................................ ......4 11 档案管理 ................................ ................................ ............ 5 12 标准实施与评价 ................................ ................................ ......5 附录A（资料性） 湖北省地方标准实施信息及意见反馈表 ................................ .....6 DB42/T 2296 —2024 III 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由华中农业大学提出。 本文件由湖北省农业农村厅归口。 本文件起草单位：华中农业大学；安琪酵母股份有限公司；湖北春之染农业科技有限公司。 本文件主要起草人：产祝龙 、何燕红、程灵韵、王艳平、向林、罗靖、胡骏鹏、梁思威、黄联平。 本文件实施应用中的疑问， 可咨询 湖北省农业农村厅 ， 电话：027-87665821 ， 邮箱：[email protected] ； 对本文件的有关修改意见建议请；反馈至华中农业大学，电话： 027-87282010 ，邮箱： [email protected] ；或者湖北省市场监督管理局，联系电话： 027-87811019 ，邮箱： [email protected] 。 DB42/T 2296 —2024 1 东方百合鳞茎组培快繁技术规程 1 范围 本文件规定了东方百合鳞茎组培快繁技术的培养基、 鳞茎的处理和丛生芽诱导 、试管鳞茎诱导和获 得、试管鳞茎的移栽 、病虫害防治 、籽球采收与贮藏、档案管理和标准实施及评价等环节的技术要求 。 本文件适用于东方百合 系列品种 的鳞茎快繁及籽球生产 ，同时适用于湖北地区设施栽培的百合品 种。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 8321 （所有部分） 农药合理使用准则 GB/T 18247.6 主要花卉产品等级 第6部分：花卉种球 GB/T 28681 百合、马蹄莲、 唐菖蒲种球采后处理技术规程 NY/T 1276 农药安全使用规范总则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 鳞茎 bulb 圆盘状的短缩地下茎及其上着生的鳞叶 。由许多肥厚的肉质鳞片包围而成。 鳞片 scale 着生在鳞茎盘上的肉质变态叶。 籽球 bulblet 用于生产商品球、规格较小的鳞茎，可以通过组织培养、鳞片扦插或包埋、鳞茎再生等途径培育 。 植物生长调节剂 plant growth regulators 人工合成的具有和天然 植物激素 相似生长发育 调节作用的 有机化合物 。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 6-BA：6–苄基腺嘌呤（ 6-benzylaminopurine ） Lx：勒克斯（ Lux） DB42/T 2296 —2024 2 NAA：萘乙酸（ 1-naphthlcetic acid ） 5 培养基 基本培养基 选用MS培养基（ 30 g/L蔗糖，7 g/L琼脂）为基础培养基， pH值5.6～5.8。 植物生长调节剂母液制备 6-BA用0.1 mol/L的盐酸溶解。NAA用95%乙醇溶解。再用灭菌蒸馏水定容至所需要的浓度， 其中 6-BA 浓度为0.5 mg/L～1 mg/L，NAA浓度为0.1 mg/L～0.5 mg/L。 培养基的制备 配制时，先将培养基基本成分、糖和琼脂按照需要量加入锥形瓶中，定容后用 0.1 mol/L KOH 调节 pH值至5.6～5.8，用封口膜（盖）封口，放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌。灭菌工作压力 宜为1.1 kg/cm （0.105 MPa），温度 宜为121℃，灭菌时间 宜为20 min。培养基冷却到 50℃左右时，在超净工作台中再 加入植物生长调节剂，分装于灭菌的 100 ml～300 ml规格组培瓶中，冷却至室温备用。 6 鳞茎处理和丛生芽诱导 鳞茎选择 按照GB/T 18247.6 选择健康、无破损，鳞片光滑、抱合紧密、无病斑、无病虫害的百合 鳞茎。 外植体消毒 将鳞茎在流水下用毛刷清洗，剥去外层鳞片，每个种球选取无损伤中层鳞片 5片～6片。将选出的鳞 片用水冲洗干净。将纱布用橡皮筋固定在瓶口，用流水冲洗鳞片 2 h，期间摇晃震动 3次～5次。在超净台 中消毒鳞片，用 75%酒精消毒 45 s，用1.2%次氯酸钠 消毒20 min，再用无菌水漂洗 3次～4次。 丛生芽诱导培养 将消毒好的鳞片在无菌滤纸上吸干多余水分，用锋利 的无菌消毒 刀片切成约 1 cm×l cm小方块。凹 面朝上放置于含 1.0 mg/L～2.0 mg/L 6-BA以及0.1 mg/L～0.5 mg/L NAA 的MS培养基上。温度为 22℃～ 25℃，光周期为12 h光照/12 h黑暗，光照强度为 1600 Lx～2000 Lx。培养30 d～40 d获得丛生芽。 7 试管鳞茎诱导和获得 试管鳞茎诱导再生 将增殖的丛生芽切下， 带部分鳞片， 接种到鳞茎诱导培养基。 MS培养基的蔗糖浓度为 60 g/L～90 g/L。 添加0.2 mg/L～0.5 mg/L 6-BA以及0.1 mg/L～0.5 mg/L NAA 。 培养条件： 12 h光照/12 h黑暗，光照强度为 2000 Lx～3000 Lx，温度18℃～22℃。30 d～40 d后分 化生长出试管鳞茎。 试管鳞茎生根 DB42/T 2296 —2024 3 将直径d≥0.2 cm的东方百合试管鳞茎转入生根培养基中继续培养， 培养基成分为 1/2 MS，添加0.2 mg/L～0.5 mg/L NAA ，pH5.8。培养条件同 7.1。 试管鳞茎低温处理 当试管鳞茎直径