ICS 65.020.30 CCS B 43 41 河南省 地 方 标 准 DB41/T 2708—2024 牛精液、卵细胞与胚胎生物安全评价 技术规程 2024 - 07 - 26发布 2024 - 10 - 25实施 河南省市场监督管理局 发布 DB41/T 2708 —2024 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 操作流程 ................................ ................................ ........... 2 5 样品与信息采集 ................................ ................................ ..... 2 6 样品保存与运输 ................................ ................................ ..... 2 7 样品生物安全评价 ................................ ................................ ... 3 8 样品编码与储存 ................................ ................................ ..... 3 9 样品销毁 ................................ ................................ ........... 4 10 档案管理 ................................ ................................ .......... 4 附录A（规范性） 样品信息登记表 ................................ ....................... 5 DB41/T 2708 —2024 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担专利识别的责任。 本文件由 河南省农业农村厅 提出。 本文件由 河南省畜牧业标准化委员会（ HN/TC 34）归口。 本文件起草单位：河南省种业发展中心、华中农业大学、河南省奶牛生产性能测定中心、河南省农 业科学院、河南省奶牛生产性能测定有限公司。 本文件主要起草人：张震、闫磊、郭爱珍、闫跃飞、汪聪勇、林红新、耿繁军、薛永康、周峰、任 小丽、皇超英、李静茹、刘欢、高娜、谷淑华、刘晓曼、王向佩、侯玉芳、孙贝贝、白雪利。 DB41/T 2708 —2024 1 牛精液、卵细胞与胚胎生物安全评价 技术规程 1 范围 本文件规定了牛精液、卵 细胞与胚胎生物安全评价操作流程、样品 与信息采集、保存与运输、生物 安全评价、编码与储存、样品销毁和档案管理等内容。 本文件适用于牛精液、卵细胞与胚胎的生物安全评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 2828.2 计数抽样检验程序 2695第2部分：按极限质量 LQ检索的孤立批检验抽样方案 GB 4143 牛冷冻精液 GB/T 5458 液氮生物容器 GB/T 18636 蓝舌病诊断技术 GB/T 18637 牛病毒性腹泻 /粘膜病诊断技术规范 GB/T 18645 动物结核病诊断技术 GB/T 18646 动物布鲁氏菌病诊断技术 GB/T 18935 口蹄疫诊断技术 GB/T 27981 牛传染性鼻气管炎病毒实时荧光 PCR检测方法 GB/T 39602 牛结节性皮肤病诊断技术 NY/T 562 动物衣原体病诊断技术 NY/T 1234 牛冷冻精液生产技术规程 NY/T 1900 畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范 NY/T 2695 牛遗传缺陷基因筛查技术规程 SN/T 1315 牛地方流行性白血病检疫技术规范 中华人民共和国农业农村部 ．病死畜禽和病害畜禽产品无害化处理管理办法 ．2022 中华人民共和国农业农村部 ．跨省调运乳用种用家畜产地检疫规程 ．2023 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 生物安全评价 对生物制品、引种和生物资源交流的潜在生物安全风险进行科学、客观、公正评价的方法。 DB41/T 2708 —2024 2 3.2 冷冻保护剂 在冷冻保存精液、卵细胞或胚 胎时，加入甘油、二甲基亚砜等保护其抵抗低温或超低温损害的化合 物。 3.3 细胞保护液 可以迅速渗透到精液、卵细胞、胚胎或其他生物样品中，起到稳定作用并保护其完整的一种特殊样 品储存液 。 4 操作流程 操作流程按照样品来源、信息采集、样品采集（包括采集人员、采集方式、采集方法等）、样品保 存与运输、样品生物安全评价、样品编码与储存 （包括储存方法、 储存管理等） 、样品销毁等依次进行， 样品生物安全评价不合格样品将直接销毁 。 5 样品与信息采集 样品来源 5.1 牛精液、卵细胞与胚胎样品来源于政府抽查项目或者样品所有者主动送检。样品采集前，样品所有 者享有知情权，采样机构对评价过程有保密义务。 信息采集 5.2 采集样品应进行样品 信息登记，登记的内容应至少包括：采集编号、样品类型、物种信息、采集地 信息、储存条件和采集人员信息。样品信息登记按照附录 A填写，并录入主管部门指定的数据平台。 样品采集 5.3 5.3.1 采集人员 采集人员身体健康，定期体检，布鲁氏菌病、结核病宜为阴性，应接受不限于生物安全培训的专门 的技术培训，熟悉牛的生理特点和行为习性，熟练掌握样品采集、保存和运输的技术要领。 5.3.2 采集方式 采集方式包括生产、使用单位送检以及到受检单位随机取样和全部取样。受检单位随机取样数量按 照GB/T 2828.2 要求执行。 5.3.3 采集方法 样品取样按照 5.3.2采集数量随机或全部抽取样品，活体样品采集按照 NY/T 1900 的规定执行；产品 取样则在受检单位贮存容器中进行，其生产过程应按照 NY/T 1234 、NY/T 1900 的规定执行。每种样品需 要采集3管，精液剂量 宜每管2 mL～3 mL、卵细胞剂量 宜每管2～3枚、胚胎剂量 宜每管1～2枚。 6 样品保存与运输 DB41/T 2708 —2024 3 样品保存 6.1 样品可采用冷冻保存或低温保存的保存方式。冷冻保存：样品采集后，放入冷冻保护剂，然后进行 程序降温，最后在液氮中暂存。冷藏保存：样品采集完成后，放入细胞保护液中， 4 ℃冷藏暂存。在受 检单位贮存容器中抽取的样品，按照原有保存方式保存。 样品运输 6.2 样品运输按照《 跨省调运乳用种用家畜产地检疫规程 》的规定 进行。样品应在采集完成后 12 h内送 至实验室。运输过程中，应防止样品倾斜、横倒、碰撞或剧烈震荡，确保样品浸泡在细胞保护液中。 7 样品生物安全评价 样品前处理 7.1 样品到实验室后，同批次样品取出 1管进行生物安全评价。样品置于 40 ℃水浴中回温 50 s，然后均 等分为2份，1份用来做细菌总数检测， 1份用来提取核酸检测遗传缺陷基因和可能携带病原。样品核酸 提取完成后，置于 -20 ℃保存备用。 细菌总数检测 7.2 样品细菌总数检测按照 GB 4143的要求。 遗传缺陷基因检测 7.3 使用提取的核酸，按照 NY/T 2695 对牛精液、 卵细胞与胚胎进行牛白细胞黏附缺陷症、 瓜氨酸血症、 牛脊柱畸形综合征、牛尿氨酸合酶缺乏症、牛凝血因子Ⅺ缺乏症、牛并趾征、牛蜘蛛腿综合征等遗传缺 陷基因进行筛查。 可能携带病原检测 7.4 使用提取的核酸进行病原检测，蓝舌病病毒按照 GB/T 18636 执行；牛病毒性腹泻 /粘膜病病毒按照 GB/T 18637 执行