ICS 65 020 20 CCS B 61 41 河南省 地方 标准 DB41/T 2655—2024 桃胚培养及移栽技术规程 2024 - 03 - 12发布 2024 - 06 - 11实施 河南省市场监督管理局 发布 DB41/T 2655 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由河南省林业局提出并归口。 本文件起草单位：河南农业大学。 本文件主要起草人：连晓东、冯建灿、张海朋、王小贝、谭彬、程钧、王伟、叶霞、张郎郎、李志 谦、李继东。 DB41/T 2655 —2024 1 桃胚培养及移栽技术规程 1 范围 本文件规定了桃胚培养及移栽的术语和定义、桃胚培养、 炼苗和大田移栽 等技术。 本文件适用于桃胚培养及移栽技术管理的全过程 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 DB41/T 1815-2019 桃简约栽培技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 胚培养 对由于营养或生理原因造成败育、发育不完善或需要后熟、从而导致播种后难以获得成苗或在发育 早期就败育或退化的种胚进行的早期离体培养 。 3.2 胚培苗 通过胚培养技术获得的 幼苗。 4 胚培养 4.1 培养容器与接种器械的灭菌 种胚接种容器推荐使用直径为 3 cm，高度为 18 cm的平底玻璃试管，接种器械为手术刀和 长柄镊子。 用洗洁精溶液洗刷试管和接种器械， 再用清水冲洗 3～5遍，放入烘箱烘干 后，用纱布或纸等包好 接种器 械；将滤纸（ 11 cm规格）放入合适培养皿中，然后用纸包裹 ；将所有用品用具 在高压蒸汽灭菌锅中 ， 121 ℃温度下灭菌20 min。 4.2 培养基的配制与灭菌 4.2.1 培养基选择 以WPM培养基为桃种胚接种培养基 ，培养基成分表见附录 A。 DB41/T 2655 —2024 2 4.2.2 母液配制 所需化学试剂使用去离子水配制。根据附录 A中培养基配方成分，配制大量元素母液 A（20倍）、大 量元素钙盐母液 B（20倍）、微量元素母液 C（100倍）、铁盐母液 D（100倍）、有机成分母液 E（100倍）。 培养基母液试剂瓶分别贴上标签，标注母液名称、配制倍数和日期，置于冰箱冷藏保存。铁盐（母液 D） 保存在棕色试剂瓶中。 4.2.3 培养基配制 依据培养基配方和需要培养基 体积，计算各种母液需用量和其它成分用量，见附录 B。按照计算结 果，称取琼脂和蔗糖用量，加入蒸馏水中，蒸馏水的量以培养基配制体积的 1/3～1/2为宜，不断搅拌， 熬至沸腾；然后加入相应母液，加蒸馏水定容，充分搅拌均匀；用 1.0 mol·L-1盐酸或1.0 mol·L-1氢氧化 钠，调节pH值至5.8；将培养基分装到平底试管中，深度占试管高度的 1/3左右，用 透气封口膜（过滤孔 径0.3 um）封口；将培养基放入高压灭菌锅中 ，121 ℃，灭菌20 min。灭菌后培养基在干净、阴凉的室 内常温存放，保存时间不宜超过 2周。 4.3 种胚获取与消毒 从硬熟期的 桃果实中取出桃核，将桃核上果肉去除干净，清水洗净备用。 将桃核放入 有效氯浓度 5%次氯酸钠溶液消毒 20 min；破核，用无菌镊子小心夹出种胚，放入灭菌的 三角瓶中 ；在超净工作台上 ，用75%酒精浸泡种胚 30 s，无菌水冲洗 2～3遍， 然后用 0.1%的升汞消毒 5 min 或有效氯浓度为 5%次氯酸钠溶液消毒 10 min，用无菌水冲洗 3～5次。 4.4 种胚接种 将灭菌过的 种胚放在无菌滤纸上，用手术刀和镊子将种皮去除，然后接种到 WPM培养基上，约 1/3～ 1/4核仁长度（胚根朝下） 深入培养基， 每瓶接种 1个。 用封口膜封口。 在培养瓶上标示 代号和接种日期。 4.5 低温处理及培养 接种完毕， 置于黑暗环境 下，根据种子不同需冷量， 4 ℃处理60 d～90 d，以完成种胚休眠。之后 转移至培养室中，培养温度为 23 ℃～27 ℃，光照强度 2 000 lx～3 000 lx，光周期为 16 h光照，8 h 黑暗。 种胚萌发后 15 d～20 d，根部长到约 3 cm～5 cm， 5～6片叶时，可进行移栽。 5 炼苗 5.1 胚培苗移栽 前准备 去掉胚培苗 培养瓶顶部封口膜，在培养室内锻炼 3 d～4 d。 配制基质。 按草炭土 ∶珍珠岩∶蛭石（体积比） 为1∶1∶1比例配制，配制好的混合基质装入营养 钵中（推荐使用直径 10 cm，高度9 cm尺寸营养钵），并压紧实，移栽前用 0.5 g·L-1的多菌灵 （50%可 湿性粉剂） 溶液浸透。 5.2 移栽 取出胚培苗， 用流水洗净根部 培养基， 移栽至营养钵中， 喷施0.1 g·L-1多菌灵液（50%可湿性粉剂） 防病。放置在温室或大棚， 保证空气湿度在 90%以上，温度在25 ℃左右。7 d～10 d后逐渐通风，直至 完全去除 棚膜。 DB41/T 2655 —2024 3 移栽后，胚培苗在温室或大棚中易发生立枯病，可每 隔5 d～7 d喷1次0.1 g·L-1多菌灵液 （50%可 湿性粉剂） ；每20 d～30 d，喷施1次碧护20 000倍液（0.136%总有效成份 ），以强壮幼苗 。农药的使 用符合GB/T 8321（所有部分） 的规定。 移栽后根据 幼苗生长情况，可适当补充营养液。 6 大田移栽 当外界环境 最低温度达到 5 ℃以上，胚培苗地上部达到 15 cm以上时，可将 胚培苗从移栽容器中倒 出，带基质定植于田间。 移栽后田间管理按照DB 41/T 1815确定的桃简约化栽培技术 。 DB41/T 2655 —2024 4 附录 A （资料性） 胚培养所需 WPM培养基的主要成分表 表A.1给出了胚培养所需 WPM培养基的主要成分表 。 表A.1 胚培养所需 WPM培养基的主要成分 表 名称 化学试剂 剂量 mg·L-1 母液加入药品量 g·L-1 大量元素（母液 A，20倍） K2SO4 990.00 19.800 HN4NO3 400.00 8.000 MgSO 4 •7H2O 370.00 7.400 KH2PO4 170.00 3.400 钙盐（母液 B，20倍） Ca(NO 3)2•4H2O 556.00 11.120 微量元素（母液 C，100倍） MnSO 4•4H2O 22.50 2.250 ZnSO 4 •7H2O 8.60 0.860 H3BO3 6.20 0.620 Na2MoO4•2H2O 0.25 0.025 CuSO 4•5H2O 0.25 0.025 铁盐（母液 D，100倍） FeSO 4•7H2O 27.80 2.780 Na2EDTA 37.30 3.730 有机成分（母液 E，100倍） 甘氨酸 2.00 0.200 VB1 1.00 0.100 VB6 0.50 0.050 VB5 0.50 0.050 肌醇 100.00 10.000