ICS 65.020.20 CCS B 05 41 河南省 地方标准 DB 41/T 2607—2024 蓝莓组培快繁技术规程 2024 - 02 - 01发布 2024 - 05 - 01实施 河南省市场监督管理局 发布 DB 41/T 2607 —2024 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 培养基的选择与改良 ................................ ................................ . 1 5 外植体的选择与接种 ................................ ................................ . 2 6 苗木培养 ................................ ................................ ........... 2 7 炼苗与移栽 ................................ ................................ ......... 3 附录A（资料性） 改良WPM培养基配方 ................................ ................... 4 DB 41/T 2607 —2024 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由河南省林业局提出并归口。 本文件起草单位：平顶山市农业科学院 鲁山县瑞祥种植农民专业合作社 平顶山市农业农村局 平 顶山市林业局 内黄县林业发展中心 。 本文件主要起草人：周威、曹秀敏、梁建、张佳伟、姬书惠、余祖运、许俊国、岳高飞、曹青军、 栗苗苗、张九林、李蕴莹、王新兰、郭克歌、冯晓艺、蒋钦群、肖婉露、法丹丹 。DB 41/T 2607 —2024 1 蓝莓组培快繁技术规程 1 范围 本文件规定了蓝莓苗组培快繁过程中培养基 的选择与改良 、外植体 的选择及接种、苗木培养、炼苗 与移栽等。 本文件适用于河南省蓝莓组培种苗的繁育。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 培养基的选择与改良 WPM培养基的改良 将WPM培养中的 K2SO4、CaCL 2、FeSO 4、Na2EDTA改成 KNO3（190 mg/L）、Ca(NO 3)2.4H2O（684 mg/L）、 C10H13FeN2NaO8（73.4 mg/L ）。 改良WPM培养基的母液配制 将改良WPM培养基的化学成份按附 录A所示的五大类分别用蒸馏水溶解后，配制成质量比为 1:20、 1:100、1:200、1:200、1:200的母液，装入广口瓶，母液配制宜使用蒸馏水或去离子水。 分别贴上标签、 标注名称、配制倍数和日期，置于 2 ℃～4 ℃冰箱保存，铁盐应存放在棕色容器中。 激素的母液配制 将实验所需的玉米素 (zeatin，ZT)、萘乙酸((1-naphtahaleneacetin acid ，NAA)、吲哚丁酸 (indole-3-butyric，IBA)用1 mol/L的HCl或95％酒精溶解，再用蒸馏水稀释后分别配制成 100 mg/L 的 母液，装入棕色广口瓶中，置于 2 ℃～4 ℃冰箱保存。 配制培养基 4.4.1 溶解琼脂、糖 按所需容量的 70％加蒸馏水，再加入 0.65％的琼脂，加热搅拌融化琼脂。琼脂融化后，加入 3％蔗 糖，稍加热使其溶解。 4.4.2 添加母液 糖溶解后，按培养基的配方及所需数量，依次加入改良 WPM培养基母液和激素母液，并充分搅拌。 DB 41/T 2607 —2024 2 4.4.3 定容、调 pH值 搅拌均匀后，加蒸馏水定容至所需体积。再充分搅拌，用 0.1 mol/L 的盐酸或 0.1 mol/L 的氢氧化钠 调节pH至5.2±0.1。 芽诱导培养基：改良 WPM＋ZT 5.0 mg/L ＋蔗糖30 g/L+琼脂粉6.5 g/L。 增殖培养基：改良 WPM＋ZT 1.0 mg/L ＋IBA 0.1 mg/L ＋蔗糖30 g/L + 琼脂粉6.5 g/L。 生根培养基： 1/2改良 WPM＋IBA 0.1 mg/L ＋蔗糖25 g/L，琼脂粉 6.5 g/L。 以上三种培养基， pH值均为5.2±0.1。 5 外植体的选择与接种 外植体的选择 5.1.1 取材时间和部位 取材应于春、秋两季蓝莓生长的旺盛时期，在晴朗的上午或午后没有露水时取材，避免低温阴雨天 气取材。 从具有品种典型性状的健康植株上选择长势旺盛、 生长健壮、 带有 3～5个完整叶片的新生枝条， 装入洁净的塑料袋封口带回实验室， 2 ℃～4 ℃冰箱保湿存放，所取材料 2 d内使用完毕。 5.1.2 外植体预处理 用剪刀将嫩枝上的叶片剪下，用洗涤剂刷洗后，经自来水冲洗 30 min～40 min，无菌滤纸吸干水分 备用。 外植体的消毒与接种 在用酒精消毒过的超净工作台面上，将清洗后的叶片一起先放入 75％乙醇溶液中振荡浸润 30 s～40 s，无菌水冲洗 4次，无菌滤纸吸干水分后，用 0.1％的升汞消毒 6 min～8 min，再用无菌水冲洗 5次～6 次，无菌滤纸吸干水分备用。 将已消毒的幼嫩叶片置于无菌滤纸上， 把叶片切成 1 cm见方的小块， 接种到灭菌过的诱导培养基中， 每瓶接种 3～4个材料，向下稍微按压，让切口充分接触培养基。 6 苗木培养 芽诱导培养及方法 将外植体叶片接种到灭菌过的芽诱导培养基中培养，培养温度为 25 ℃±2 ℃，光照强度 60 μ mol·m-2·s-1～100μmol·m-2·s-1、光照时间 12 h/d～16 h/d，初代诱导培养时间一般为 3周～5周。 为最大限度保持母本特性 ,宜以直接诱导不定芽为主。 增殖培养及方法 诱导培养 3周～5周后，产生大量丛生芽。继续培养，当苗高 5 cm～6 cm时剪取丛生苗，截成 2.0 cm～ 3.0 cm长的茎段，接种在增殖培养基中培养，培养温度为 25 ℃±2 ℃、光照强度 60μmol·m-2·s-1～ 100 μmol·m-2·s-1、光照时间 12 h/d～16 h/d。培养时间一般为 4周～6周。继代增殖代数宜控制在 10～15代，增值系数 2.5～4.0。 生根培养及方法 DB 41/T 2607 —2024 3 增殖培养 3周～4周后， 苗子长到 4 cm～5 cm高时， 剪取健壮一致的丛生苗接种到生根培养基上培养， 培养温度为 25 ℃±2 ℃、光照强度度 60 μmol・m-2 ·s-1～100 μmol・m-2 ·s-1、光照时间 12 h/d～16 h/d。 经3周～4周培养，苗子长到 6 cm～8 cm高，基部长出 3～5条1 cm～2 cm长的根时，即可进行炼苗移栽。 7 炼苗与移栽 组培苗炼苗 炼苗时，选取具有该品种特征特性、生长健壮、叶色正常、根、茎、叶俱全的完整植株进行炼苗。 首先将培养瓶放置在有散射光（ 60 μmol・m-2 ·s-1～100 μmol・m-2 ·s-1）的大棚或温室中，温度控 制在25 ℃±2 ℃，封口培养 5 d～7 d后，再开口培养 3 d～4 d。 炼苗前10 d ，检修大棚或温室， 覆盖棚膜， 并在裙膜下面放风口的位置固定 40～50目白色防虫网， 同时准备和棚膜大小相同的 2针遮阳网，密闭棚室，用百菌清烟剂熏棚消毒。 组培苗移栽 7.2.1 基质选择与配制 基质一般由泥碳土、珍珠岩、蛭石按 3：1：1 的比例混合而成，或用粗粒蛭石与沙以 3:1的比例混 合，装入 50孔黑色PS标准穴盘，并稍压紧，用 0.5 g/L的多菌灵（ 80％可湿性粉剂）溶液喷透备用。 7.2.2 移栽 将洗干净的组培苗栽入事先装好基质的穴盘中，轻轻覆盖根部、稍作按压，幼苗不倒即可。待整个 穴盘栽满后用 600倍的百菌清或多菌灵喷雾或作定根水浇灌，最后将穴盘苗分品种、移栽日期，在苗床 上整齐摆放，盖薄膜保湿培养。 DB 41/T 2607 —2024 4 A A 附录 A （资料性） 改良WPM培养基配方 改良WPM培养基配方参照表 A.1。 表A.1 改良WPM培养基配方 名称 成分 含量(m