ICS65.150 CCSB51 3710 威海市地方标准 DB3710/T236—2024 牙鲆耐高温专门化品系选育技术规范 Technicalspecificationsforthebreedingofhigh-temperature resistantspeciallines inoliveflounder 2024-12-03发布 2025-01-03实施 威海市市场监督管理局  发布DB3710/T236—2024 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由威海市海洋发展局提出、归口并组织实施和评估。 本文件起草单位：中国科学院海洋研究所、威海圣航水产科技有限公司、威海市海洋发展研究院。 本文件主要起草人：尤锋、吴志昊、王丽娟、岳新璐、鞠传水、姬广磊、毕炜家、宋博、石明、唐 敏、宋宗诚、刘心田。DB3710/T236—2024 1牙鲆耐高温专门化品系选育技术规范 1范围 本文件规定了牙鲆耐高温专门化品系选育的术语和定义、选育方法、选育效果评估、遗传分析和选 育档案的技术要求。 本文件适用于牙鲆耐高温专门化品系的选育。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T35903—2018牙鲆亲鱼和苗种 SC/T2021—2006牙鲆养殖技术规范 SC/T2099—2019牙鲆人工繁育技术规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 育种基础群体basicbreedingpopulation 用于人工选育的经驯化的自然海区的野生群体。 3.2 专门化品系specializedline 按照育种目标进行分化选择具备某突出性状优点的品系。 3.3 雌核发育二倍体诱导gynogeneticdiploidinduction 将紫外灭活的精子与成熟卵子授精后经温度休克处理使染色体组加倍，得到能够正常发育的雌核发 育二倍体。 3.4 伪雄鱼pseudo-male 遗传性别是雌性，生理性别是雄性，能产生正常精子使卵受精的鱼。 3.5DB3710/T236—2024 2观测杂合度observedheterozygosity 同一基因位点上杂合个体数与总个体数的比值，多个基因位点观测杂合度的平均值则为群体的观测 杂合度。 3.6 遗传稳定性geneticstability 群体目标性状的变异幅度，多用变异系数表征。 4选育方法 4.1育种基础群体构建与初步筛选 4.1.1育种基础群体构建 育种基础群体质量应符合GB/T35903—2018中3.2的规定。且雌雄比例约为2:1，数量不低于300尾， 观测杂合度不低于0.7，并对每尾个体进行标记。 4.1.2耐高温亲本初步筛选 按照SC/T2021中3.1.4的规定进行亲鱼培育，在26℃～28℃下培育2个月。选择特定生长率不低于 0.008的个体作为候选亲鱼，雌雄比例按2:1，数量不低于120尾。按公式（1）计算特定生长率。 SGR=ln末−ln初 ×100%·······················(1) 式中： SGR——特定生长率； W末——养殖结束时鱼的体重，单位为克（g）； W初——养殖起始时鱼的体重，单位为克（g）； T——养殖天数，单位为天（d）。 4.2F0代群体选育 4.2.1候选亲鱼的人工繁育 4.2.1.1亲鱼挑选 从促熟的候选亲鱼中挑选不低于90尾个体，以混合交配方式进行繁育。雌雄鱼比例为2:1，雌雄鱼 均应在2龄以上，体重分别不低于2.0kg、1.5kg为宜。 4.2.1.2培育促熟及人工繁育 应按照SC/T2099—2019中第4章的规定执行。 4.2.1.3苗种培育及养成 应按照SC/T2021—2006中第4章和第6章的规定执行。 4.2.2人工选留DB3710/T236—2024 3在养殖周期内，根据体长或体重两个生长性状，选择生长速度快的个体进行选留，共选留2次～4 次，合计选择率为5%～10%。 4.2.3耐高温性状筛选 4.2.3.1筛选时间 在苗种期（4月龄～8月龄）和成鱼期（10月龄～14月龄），分别进行1次耐高温性状筛选。 4.2.3.2筛选方法 将养殖水温以1℃/h速率逐渐升温至31.0℃后，再以0.2℃/h速率逐渐升温，待水温升至总体死亡率 达到约50%～80%时，以2℃/h速率逐渐降温至16℃～23℃。苗种期和成鱼期选择率共计为5%～10%。 将存活的选育个体继续培育，待进一步选留。 4.2.4F0代群体构建 筛选耐高温且生长较好的个体，其中雌鱼不低于300尾，雄鱼不低于100尾，构建F0代群体。 4.3一代雌核发育家系构建与选育 4.3.1一代雌核发育家系构建 4.3.1.1亲鱼挑选 从促熟的候选亲鱼中挑选不低于90尾个体。雌雄鱼比例为2:1，雌雄鱼均应在2龄以上，体重分别不 低于2.0kg、1.5kg为宜。 4.3.1.2培育促熟及精卵采集 F0代群体应按照SC/T2099—2019中4.3和4.4的规定进行培育促熟，人工挤压成熟亲鱼腹部采集卵和 精液。 4.3.1.3人工授精 将精子用预冷至4℃的林格氏液按体积比1:50稀释后，用剂量为36000erg/mm2的紫外线照射，使其遗 传物质灭活后，加入等体积14℃～16℃海水激活，与卵子授精。精子灭活至人工授精全过程需避光。 4.3.1.4雌核发育二倍体诱导 授精后5min，将受精卵置于0℃～2℃海水中45min，随后在2min～3min内升温至14℃～16℃，收集 上浮卵置于孵化网箱中充气孵化，获得减数分裂雌核发育二倍体。 4.3.1.5建立雌核发育家系 筛选高成活率和低畸形率的家系继续培育，家系数量不低于20个。 4.3.1.6家系培育及养成要求DB3710/T236—2024 4应符合SC/T2021—2006中第4章和第6章的规定。各家系培育条件均保持一致。 4.3.2人工选留 每个雌核发育家系均按照本文件4.2.2的规定执行。 4.3.3耐高温性状筛选 4.3.3.1筛选时间 按照本文件4.2.3.1的规定执行。 4.3.3.2筛选方法 4.3.3.2.1耐高温上限温度筛选 每个家系随机取不低于30尾个体，标记后混养。水温以1℃/h速率升温至31.0℃，再以0.2℃/h速率 升温，记录每尾鱼的致死温度，计算各家系的平均耐高温上限温度。 4.3.3.2.2高温成活率筛选 每个家系随机取不低于90尾个体，标记后混养。水温以1℃/h速率升温至31.0℃，再以0.2℃/h速率 升温至（31.5±0.5）℃，保持24h，统计每个家系的成活率。 4.3.4F1代耐高温子群构建 以耐高温上限温度排名前20%～30%且高温成活率排名前20%～30%的家系，构成F1代耐高温子 群。 4.4二代雌核发育家系构建与选育 4.4.1二代雌核发育家系构建 以获得的F1代耐高温家系选留个体为亲本，其构建方法按照本文件4.3.1的规定执行。 4.4.2伪雄鱼诱导 每个家系选取5000尾～10000尾鱼苗，在性腺分化敏感期（1月龄～3月龄，全长1.5cm～10.0cm） 于水温28℃进行培育，获得伪雄鱼。 4.4.3人工选留 每个二代雌核发育家系均按照本文件4.3.2的规定执行。 4.4.4耐高温性状筛选 按照本文件4.3.3的规定执行。 4.4.5耐高温专门化品系构建 按照本文件4.3.4的规定判定耐高温家系，构成F2代耐高温子群，即耐高温专门化品系。 5选育效果评估 5.1耐高温性能评估指标