ICS 07.080 CCS Z 06 37 山东省 地方标准 DB37/T 4711—2024 海洋动物资源线粒体 DNA遗传多样性监测 技术规程 Code of practice for monitoring mitochondrial DNA genetic diversity of marine animal resources 2024 - 04 - 11发布 2024 - 05 - 11实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 4711 —2024 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 监测程序 ................................ ................................ ........... 1 5 监测方案设计 ................................ ................................ ....... 2 6 样品采集、保存与运输 ................................ ............................... 2 采样地点 ................................ ................................ ....... 2 6.1 采样数量及方法 ................................ ................................ . 2 6.2 采样记录 ................................ ................................ ....... 3 6.3 样品保存与运输 ................................ ................................ . 3 6.4 7 样品检测 ................................ ................................ ........... 3 方法原理 ................................ ................................ ....... 3 7.1 DNA提取 ................................ ................................ ........ 3 7.2 DNA质量检测 ................................ ................................ .... 3 7.3 引物选择 ................................ ................................ ....... 3 7.4 DNA扩增 ................................ ................................ ........ 4 7.5 PCR产物回收、纯化与序列测定 ................................ .................... 4 7.6 8 质量控制 ................................ ................................ ........... 4 9 数据分析 ................................ ................................ ........... 4 10 监测报告 ................................ ................................ .......... 4 附录A（资料性） 样品采集记录 ................................ ......................... 5 附录B（资料性） 设备与试剂 ................................ ........................... 6 B.1 仪器设备与耗材 ................................ ................................ . 6 B.2 试剂及其配制 ................................ ................................ ... 6 附录C（资料性） 酚-氯仿法提取 DNA ................................ .................... 7 附录D（资料性） 琼脂糖凝胶电泳 ................................ ....................... 8 附录E（资料性） PCR扩增反应体系 ................................ ..................... 9 附录F（资料性） 检测记录 ................................ ............................ 10 参考文献 ................................ ................................ ............. 11 DB37/T 4711 —2024 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东省海洋局提出并组织实施。 本文件由山东省海洋标准化技术委员会归口。 DB37/T 4711 —2024 1 海洋动物资源线粒体 DNA遗传多样性监测技术规程 1 范围 本文件确立了海洋动物资源线粒体 DNA遗传多样性监测程序，规定了监测方案设计、样品采集、保 存与运输、样品检测、质量控制、监测报告等技术要求，描述了数据分析方法。 本文件适用于海洋动物资源的遗传多样性监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 12763.6 海洋调查规范 第6部分：海洋生物调查 GB/T 18654.2 养殖鱼类种质 检验 第2部分：抽样方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 遗传多样性 genetic diversity 种内不同群体之间或一个群体内不同个体的遗传变异总和。 4 监测程序 海洋动物资源线粒体 DNA遗传多样性监测程序包括监测方案设计、样品采集、保存与运输、样品检 测、质量控制、数据分析、监测报告，程序见图 1。 DB37/T 4711 —2024 2 图1 监测程序图 5 监测方案设计 明确监测海域、监测周期、监测时间、样品采集、保存和运输、样品检测方法、监测指标、质量控 制、数据分析、监测报告等。其中，对调查海域某种野生海洋动物资源的遗传多样性 监测，宜每 5年～ 10年开展1次；对人工增殖物种宜每年开展 1次。 6 样品采集、保存与运输 采样地点 6.1 采样地点可根据调查需求选择： a) 现场调查采样：按 GB/T 12763.6 规定执行。对海洋底栖动物、潮间带动物进行定点采样，对 移动迅速的底栖动物可设地笼诱捕。对游泳能力强的鱼类、甲壳类等进行拖网采样； b) 非现场调查采样： 从调查海域捕捞作业船、 渔港或市场直接采集来自目标海域的新鲜渔获物， 采样方法按 GB/T 18654.2 规定执行。 采样数量及方法 6.2 按形态学分类后，每个调查海域应采集同一物种 3