SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1919—2016 代替SN/T1874—2007、SN/T1919—2007 猪细小病毒病检疫技术规范 Quarantine protocol for porcine parvovirus infection 行业标准信息服务平台 2016-06-28发布 2017-02-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1919—2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T1874—2007《猪细小病毒病聚合酶链反应操作规程》和SN/T1919—2007《猪细 小病毒病红细胞凝集抑制试验操作规程》。 本标准与SN/T1874—2007和SN/T1919—2007相比，主要技术差异如下： 一增加了临床诊断和病毒分离方法； 一增加了酶联免疫吸附试验； 一增加了胶体金试验； 增加了荧光聚合酶链式反应。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国广西出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：鱼海琼、蔡先全、程益、罗长保、赵吟、田纯见、盘宝进、邓艳、柏建山 本标准所代替标准历次版本发布情况为： SN/T1874—2007; -SN/T1919—2007。 行业标准信息服务平台 1 SN/T1919—2016 猪细小病毒病检疫技术规范 1范围 本标准规定了猪细小病毒病临床诊断、病毒分离、血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、胶体金试验 聚合酶链式反应、荧光聚合酶链式反应的技术要求。 本标准适用于猪细小病毒病的诊断、进出口检疫及流行病学调查等。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的引用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T18088出入境动物检疫采样 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PPV：猪细小病毒（PorcineParvovirus） PBS：磷酸盐缓冲溶液（PhosphateBufferSaline） HA：血凝试验(Hemagglutination) HI:血凝抑制试验（Hemagglutination Inhibition) HAU:血凝单位(Hemagglutination Unit) OD值：光密度值（OpticalDensity） ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzyme-linkedlmmunosorbentAssay) PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction) 荧光-PCR：荧光聚合酶链式反应（Real-time-PCR） 准信息服务平台 4试剂 4.1 猪细小病毒抗原、核酸、阳性血清、阴性血清。 4.2 敏感细胞系：PK-15或ST细胞。 4.3 细胞生长液、维持液、胰酶、Hanks液 4.4 青霉素、链霉素。 4.5 磷酸盐缓冲溶液。 4.6 红细胞悬液。 4.7 RNA酶。 4.8 DNA抽提试剂盒。 4.9 蛋白酶K。 4.10 TaqDNA聚合酶。 4.11 100 bp DNA Marker。 1 SN/T 1919—2016 4.12dNTP混合物及相应10X缓冲液。 5设备与材料 5.1CO,培养箱。 5.2酶标仪。 5.396孔V型板。 5.4生物安全柜。 5.5显微镜。 5.6微量移液器。 5.7 高速冷冻离心机。 5.8 PCR仪。 5.9 水平凝胶电泳槽。 5.10电泳仪。 5.11 凝胶成像系统。 5.12 荧光定量PCR仪。 6 临床诊断 6.1 疫病概况 猪细小病毒病是由PPV引起的一种猪繁殖障碍病，该病主要表现为胚胎和胎儿的感染和死亡，特 别是初产母猪发生死胎、畸形胎和木乃伊胎，但母猪本身无明显的症状。其病原特征、流行病学情况参 见A.1。 6.2病理变化 猪细小病毒病可以引起母猪子宫内膜、胎盘病理变化。感染的胎儿表现不同程度的发育障碍和生 长不良，检异常变化参见A.2。 6.3与其他易混淆疾病的鉴别 猪细小病毒病通常需要和猪繁殖与呼吸综合征、猪衣原体病、猪伪狂犬病感染猪群进行鉴别诊断， 主要区别参见A.3。 6.4结果判定 根据该病的临床症状、病理变化和流行病学作出初步诊断，进一步确诊应根据GB/T18088采集样 品进行实验室检测。 实验室检测 7.1 病毒分离 7.1.1 细胞培养 用细胞瓶或细胞板培养PK-15细胞或ST细胞单层，可采用原代细胞培养或传代细胞培养，培养过 程参见B.1、B.2.推荐使用传代细胞 2