(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210993127.2 (22)申请日 2022.08.18 (71)申请人 杭州师范大学 地址 311121 浙江省杭州市余杭区余杭塘 路2318号 (72)发明人 李洋　尹守春　何田　 (74)专利代理 机构 杭州君度专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 33240 专利代理师 朱亚冠 (51)Int.Cl. A61K 9/51(2006.01) A61K 47/46(2006.01) A61K 9/107(2006.01) A61K 47/10(2006.01) A61K 41/00(2020.01)A61K 31/4188(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 癌细胞膜修饰的仿生纳米粒子及其制备和 应用 (57)摘要 本发明公开癌细胞膜修饰的仿生纳米粒子 及其制备和应用。 选取两 亲性聚合物F127包裹光 热剂吲哚菁绿(ICG)和免疫抑制剂NL G919制成生 物相容性的纳米颗粒(FIN)。 再通过共挤出的方 法将癌细胞膜包裹FIN制备成仿生纳米复合物 (CFNI)。 本发明采用F127包裹ICG和NLG919的胶 束内核FIN， 促进免疫抑制剂NLG919与疏水吲哚 菁绿(ICG)发挥协同作用， 可以在近红外激光照 射下， 产生热量杀伤癌细胞诱导癌细胞免疫原性 死亡， 释放出损伤相关分子模式， 从而增强 NLG919介导的免疫 疗法， 实现抗肿瘤的效果。 权利要求书1页 说明书6页 附图6页 CN 115252581 A 2022.11.01 CN 115252581 A 1.一种癌细胞膜包裹的仿生纳米粒子的合成工艺， 其特 征在于包括以下步骤： 步骤S1： 制备 疏水吲哚菁绿ICG： 将吲哚菁绿ICG和碘化四丁胺分散在适量二氯甲烷中， 室温下搅拌至溶液由浑浊变成 澄清， 得到疏 水吲哚菁绿ICG； 步骤S2： 制备纳米颗粒 FIN： 冰浴下， 两亲性聚合物F127在外力超声的作用下自组装形成胶束， 进而将疏水吲哚菁 绿ICG和免疫抑制剂NLG919包裹， 从而得到F127包裹ICG和NLG919的胶束内核FIN； 其中疏水 吲哚菁绿ICG和免疫抑制剂N LG919的质量比为1:1； 步骤S3： FI N纯化后与癌细胞膜共挤出 得到仿生纳米复合物CFI N。 2.根据权利要求1所述方法， 其特征在于步骤S1所述吲哚菁绿ICG和碘化四丁胺的质量 比为1:5～10 。 3.根据权利要求1所述方法， 其特征在于步骤S2所述疏水吲哚菁绿ICG、 免疫抑制剂 NLG919、 两亲性聚合物F127的质量比为1： 1： 5～10 。 4.根据权利要求3所述方法， 其特征在于步骤S2所述疏水吲哚菁绿ICG、 免疫抑制剂 NLG919、 两亲性聚合物F127的质量比为1： 1： 7.5 。 5.根据权利要求1所述方法， 其特征在于步骤S3所述癌细胞与FIN的质量比为1:( 8～ 15)。 6.根据权利要求1所述方法， 其特征在于步骤S2所述的两亲性聚合物F127为 x＝100， y＝60。 7.根据权利 要求1所述方法， 其特征在于步骤S3所述的纯化具体为将FIN溶液移入MWCO   8000‑10000Da的透析袋中， 放置于去离子水中透析24h， 除去未包载的游离药物、 转疏水所 产生的盐以及DMSO溶剂， 冷冻干燥。 8.根据权利要求1所述方法， 其特征在于所述癌细胞膜采用4T1  CM癌细胞膜， 是通过 4T1细胞离心收集细胞， 留细胞沉淀； 然后加入低渗裂解缓冲液重悬； 冰浴孵育10min后， 置 于液氮和37℃反复冻融； 将混合物在4℃下以700g离心， 收集上清液， 再14000g， 4℃离心30 分钟， 弃上清； 加入少量含有PMSF的PBS， 重悬。 9.一种癌细胞膜包裹的仿生纳米粒子， 采用权利要求1 ‑8任一项所述方法制备。 10.权利要求9所述一种癌细胞膜包裹的仿生纳米粒子在制备肿瘤的免疫协同光热治 疗制剂上的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115252581 A 2癌细胞膜修饰的仿生纳米粒子及其制备和应用 技术领域 [0001]本发明属于药物制剂领域， 涉及一种癌细胞膜修饰的仿生纳米粒子及 其制备和应 用。 背景技术 [0002]恶性肿瘤作为现代医学领域的一大难题， 造成了仅次于心血管疾病 的极高死亡 率， 对全世界人民造成巨大 的威胁。 目前， 传统的肿瘤治疗方法主要有手术切除、 化学疗法 以及放射疗法。 这些疗法对早期肿瘤均显示出积极的治疗效果， 但对晚期转移的肿瘤疗效 十分有限。 近年来， 利用免疫系统对抗和清除肿瘤细胞的肿瘤 免疫治疗已成为令人兴奋的 医学突破， 为肿瘤治疗带来新的希望。 免疫疗法是一种刺激机体免疫系统， 激活自身免疫细 胞， 特异性识别和消灭恶性肿瘤细胞的治疗方法， 主要包括嵌合抗原受体T(CAR ‑T)细胞疗 法、 免疫检查点阻断疗法和肿瘤疫苗疗法等手段， 可以通过增强免疫反应或逆转免疫抑制 来抑制肿瘤的生长和 转移。 但是， 仅依靠单一的免疫检查点阻断难以产生显著的抗肿瘤 免 疫， 通常将免疫治疗与其他传统治疗手段联用可以有效杀伤肿瘤细胞， 增强肿瘤的免疫原 性， 提高肿瘤的综合治疗效果。 光热疗法(Photothermalt herapy， PTT)是把特定波长的激光 照射肿瘤部位， 光热剂将光能转化为热量来对实体瘤进行局部热消融的一种新手段。 具有 无创、 时空可控性、 对正常组织毒性低等优点。 许多研究证明了PTT结合免疫疗法具有惊人 的抗癌作用。 [0003]2011年， Che ‑MingJHu使用了一种自上而下的将纳米粒子功能化仿生方法， 首先通 过低渗处理得到天然红细胞膜(RBC)， 并挤压涂覆在带负电荷的聚合物纳米颗粒(NPs)上， 制成可生物降解的聚合物纳米粒子。 用这种 方法能将RBC表面的膜脂和相关的膜蛋白完整 地保留， 使其在小鼠体内有一个更好地循环半衰期。 现在细胞膜涂层技术已经扩展到包括 有核细胞膜包裹的颗粒， 细胞膜可以通过蔗糖梯度或差速离心法从核和线 粒体成分中分离 出来， 这种方法对细胞膜的污染非常小。 再使用共挤压 法、 超声法和微流控电穿孔法将细胞 膜涂覆在纳米粒子表面。 细胞膜修饰策略可以使得NPs具有高度可控的生物学功能， 提高 NPs的肿瘤靶向能力， 而不同的细胞膜来源可 赋予NPs多样的肿瘤治疗作用。 发明内容 [0004]本发明的第一个目的是针对现有技术的不足， 提出一种癌细胞膜包裹的仿生纳 米 粒子的合成工艺。 [0005]步骤S1： 制备 疏水吲哚菁绿(ICG)： [0006]将吲哚菁绿ICG和碘化四丁胺分散在适量二氯甲烷中， 室温下搅拌至溶液由浑浊 变成澄清， 得到疏 水吲哚菁绿(ICG)。 [0007]作为优选， 所述吲哚菁绿ICG和碘 化四丁胺的质量比为1:5～10； [0008]步骤S2： 制备纳米颗粒(FI N)： [0009]冰浴下， 两亲性聚合物F127在外力超声的作用下自组装形成胶束， 进而将疏水吲说　明　书 1/6 页 3 CN 115252581 A 3