(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210852176.4 (22)申请日 2022.07.19 (71)申请人 合肥天港免疫药物有限公司 地址 230001 安徽省合肥市经济技 术开发 区芙蓉路268号合肥创新创业园1#C二 楼2001 (72)发明人 曹国帅　成赢　李洋洋　武玉伟　 (74)专利代理 机构 北京清亦华知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11201 专利代理师 李雪静 (51)Int.Cl. C07K 14/46(2006.01) C12N 15/13(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/02(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 33/574(2006.01) (54)发明名称 双特异性 抗体及其应用 (57)摘要 本发明提出了一种双特异 性抗体及其应用， 该抗体包括： 第一抗原结合区， 所述第一抗原结 合区具有CD27分子结合活性； 和第二抗原结合 区， 所述第二抗原结合区具有CD33分子结合活 性。 本发明所制备的双特异性抗体能同时靶向 CD27和CD33， 从而介导T细胞对肿瘤细胞的杀伤， 具有较强的肿瘤抑制能力。 权利要求书3页 说明书19页 附图4页 CN 115368448 A 2022.11.22 CN 115368448 A 1.一种重组抗体， 其特 征在于， 包括： 第一抗原结合区， 所述第一 抗原结合区具有CD27分子结合活性； 和 第二抗原结合区， 所述第二 抗原结合区具有CD3 3分子结合活性。 2.根据权利要求1所述的重组抗体， 其特征在于， 所述第 一抗原结合区包括CD27单链抗 体， 所述CD27单链抗体包括CD27抗体重链可变区和CD27抗体轻链可变区， 所述CD27抗体重 链可变区的C端与所述CD27抗体轻链可变区的N端相连； 或所述CD27抗体轻链可变区的C端 与所述CD27抗体重链可变区的N端相连； 任选地， 所述CD27抗体重链可变区包括： SEQ  ID NO:1‑3任一项所示的重链CDR； 任选地， 所述CD27抗体轻链可变区包括： SEQ  ID NO:4‑6任一项所示的轻链CDR； 任选地， 所述CD27抗体重链可变区包括分别如SEQ  ID NO： 1、 SEQ  ID NO： 2、 SEQ  ID NO： 3所示的CDR 1、 CDR2、 CDR3序列； 任选地， 所述CD27抗体轻链可变区包括分别如SEQ  ID NO： 4、 SEQ  ID NO： 5、 SEQ  ID NO： 6所示的CDR 1、 CDR2、 CDR3序列； 任选地， 所述CD27抗体重链可变区包括： SEQ  ID NO:30所示的氨基酸序列； 任选地， 所述CD27抗体轻链可变区包括： SEQ  ID NO:31所示的氨基酸序列。 3.根据权利要求2所述的重组抗体， 其特征在于， 所述CD27单链抗体进一步包括连接肽 1， 其中， 所述连接肽1的N端与所述CD27抗体重链可变区的C端相连， 所述连接肽1的C端与所 述CD27抗体轻链可变区的N端相连； 或所述连接肽1的N端与所述CD27抗体轻链可变区的C端 相连， 所述连接肽1的C端与所述CD27抗体重链可变区的N端相连； 任选地， 所述连接肽1包括SEQ  ID NO： 16所示的氨基酸序列； 任选地， 所述CD27 单链抗体包括SEQ  ID NO:13所示的氨基酸序列。 4.根据权利要求2所述的重组抗体， 其特征在于， 所述第 一抗原结合区进一步包括第 一 重链恒定区， 其中， 所述CD27 单链抗体的C端与所述第一重链恒定区的N端相连； 任选地， 所述第一重链恒定区包括第一铰链区和第一Fc肽段； 任选地， 所述第一Fc肽段包括第一CH2区和第一CH3区， 所述第一CH2区的C端与所述第 一CH3区的N端相连； 任选地， 所述第一铰链区的C端与所述第一Fc肽段的N端相连； 任选地， 所述第一铰链区为人源、 灵 长目源或鼠源 野生型IgG1的铰链区片段； 任选地， 所述第一C H2区为人源、 灵 长目源或鼠源 野生型IgG1的C H2区片段； 任选地， 所述第一CH3区相比于人源野生型IgG1的CH3区片段， 具有T366W和/或S354C突 变； 任选地， 所述第一抗原结合区进一步包括连接肽2， 所述连接肽2的N端与所述CD27单链 抗体的C端相连， 所述连接肽2的C端与所述第一重链恒定区的N端相连； 任选地， 所述连接肽2包括SEQ  ID NO： 17所示的氨基酸序列； 任选地， 所述第一重链恒定区包括SEQ  ID NO:18所示的氨基酸序列。 5.根据权利要求1所述的重组抗体， 其特征在于， 第 二抗原结合 区包括第 一肽链和第 二 肽链， 所述第一肽链包括： CD3 3抗体重链可变区； 任选地， 所述CD3 3抗体重链可变区包括： SEQ  ID NO:7‑9任一项所示的重链CDR； 任选地， 所述CD27抗体重链可变区包括分别如SEQ  ID NO： 7、 SEQ  ID NO： 8、 SEQ  ID NO：权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115368448 A 29所示的CDR 1、 CDR2、 CDR3序列； 任选地， 所述CD3 3抗体重链可变区包括： SEQ  ID NO:14所示的氨基酸序列； 任选地， 所述第一肽链进一步包括第二重链恒定区， 其中， 所述CD33抗体重链可变区的 C端与所述第二重链恒定区的N端相连； 任选地， 所述第二重链恒定区包括： C H1区、 第二铰链区和第二Fc肽段； 任选地， 所述CH1区的C端与所述第二铰链区的N端相连， 所述第二铰链区的C端与所述 第二Fc肽段的N端相连； 任选地， 所述第二Fc肽段包括： 第二CH2和第二CH3区， 其中， 所述第二CH2区的C端与所 述第二CH3区的N端相连； 任选地， 所述C H1区为人源、 灵 长目源或鼠源 野生型IgG1的C H1区； 任选地， 所述第二铰链区为人源、 灵 长目源或鼠源 野生型IgG1的铰链区片段； 任选地， 所述第二C H2区为人源、 灵 长目源或鼠源 野生型IgG1的C H2区片段； 任选地， 所述第二C H3区为人源、 灵 长目源或鼠源 野生型IgG1的C H3区片段； 任选地， 所述第二CH3区相比于人源野生型IgG1的CH3区片段， 具有T366S、 L368A、 Y407V、 Y349C突变中的至少之一； 任选地， 所述第二重链恒定区包括SEQ  ID NO:19所示的氨基酸序列。 6.根据权利要求1所述的重组抗体， 其特征在于， 所述第二肽链包括： CD33抗体轻链可 变区； 任选地， 所述CD3 3抗体轻链可变区包括： SEQ  ID NO:10‑12任一项所示的重链CDR； 任选地， 所述CD33抗体轻链可变区包括分别如SEQ  ID NO： 10、 SEQ  ID NO： 11、 SEQ  ID  NO： 12所示的CDR 1、 CDR2、 CDR3序列； 任选地， 所述CD3 3抗体轻链可变区包括： SEQ  ID NO:15所示的氨基酸序列； 任选地， 所述第二肽链进一步包括轻链恒定区， 其中， 所述CD33抗体轻链可变区的C端 与所述轻链恒定区的N端相连； 任选地， 所述轻链恒定区为人源、 灵 长目源或鼠源 野生型轻链恒定区； 任选地， 所述 抗体轻链恒定区为人源的Kap pa轻链恒定区； 任选地， 所述轻链恒定区为人源 野生型IgG1的轻链恒定区； 任选地， 所述轻链恒定区包括SEQ  ID NO:32所示的氨基酸序列。 7.根据权利要求1 ‑6任一项所述的重组抗体， 其特征在于， 所述第一抗原结合区和第二 抗原结合区通过k nob‑into‑hole结构进行 连接； 任选地， 所述knob ‑into‑hole结构 是由所述第一CH3区的T366W和/或S354C突变和所述 第二CH3区的T366S、 L368A、 Y407V、 Y 349C至少之一的突变形成的； 任选地， 所述第一肽链与所述第二肽链通过键间二硫键连接； 任选地， 所述重组抗体包括SEQ  ID NO:20‑22所示的氨基酸序列。 8.一种核酸分子， 其特 征在于， 所述核酸编码权利要求1～7任一项所述的重组抗体。 9.根据权利要求8所述的核酸， 其特征在于， 所述核酸分子具有SEQ  ID NO： 23‑25所示 的核苷酸序列。 10.一种表达载体， 其特 征在于， 携带权利要求8或9所述的核酸分子 。 11.一种制备权利要求1 ‑7任一项所述的重组抗体的方法， 其特 征在于， 包括：权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115368448 A 3