(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211224204.4 (22)申请日 2022.10.09 (71)申请人 辽宁省肿瘤医院 地址 110041 辽宁省沈阳市大东区小河沿 路44号 (72)发明人 赵岩　王跃　张明　 (74)专利代理 机构 上海泰博知识产权代理有限 公司 31451 专利代理师 魏峯 (51)Int.Cl. C07K 7/06(2006.01) C07K 1/107(2006.01) A61K 31/4745(2006.01) A61K 31/713(2006.01) A61K 47/64(2017.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种双响应型的嵌段共聚物及其制备方法 和应用 (57)摘要 本发明涉及一种双响应型的嵌段共聚物及 其制备方法和应用， 所述 嵌段共聚物 为侧链通过 二硫键连接喜树碱CPT的三嵌段共聚物FA ‑PEG‑ GPLGVRG‑Plys。 本发明在生理环境中具有良好的 生物相容性以及在肿瘤微环境(MMP2和还原环 境)中表现出选择性的药物快速释放和生物毒性 激活， 能够在体内增强免疫应答水平和提高抗肿 瘤疗效， 在肿瘤的化药和RNAi联用以调 动化学免 疫治疗方面具有良好的应用前 景。 权利要求书1页 说明书19页 附图18页 CN 115477687 A 2022.12.16 CN 115477687 A 1.一种双响应型的嵌段共聚物， 其特征在于： 所述嵌段共聚物为侧链通过二硫键连接 喜树碱CPT的三嵌段共聚物FA ‑PEG‑GPLGVRG‑Plys， 记作FA ‑PEG‑GPLGVRG‑Plys(ss‑CPT)。 2.一种双响应型的嵌段共聚物的制备 方法， 包括如下步骤： (1)通过叠氮和炔烃之间的点击反应合成叶酸 ‑聚乙二醇 ‑肽段‑氨基FA‑PEG‑GPLGVRG‑ NH2分子； (2)以FA‑PEG‑GPLGVRG‑NH2为引发剂， 利用氨基引发的NCA开环聚合反应将Lys(TFA) ‑ NCA聚合到P EG主链上， 再通过水解反应去掉赖氨 酸侧链上的氨基保护基团TFA， 得到亲水性 的叶酸‑聚乙二醇 ‑肽段‑聚赖氨酸FA ‑PEG‑GPLGVRG‑Plys； (3)通过氨基甲酸酯键将CPT ‑ss‑OH前药分子共价连接到FA ‑PEG‑GPLGVRG‑PLys侧链 上， 得到双响应型的嵌段共聚物FA ‑PEG‑GPLGVRG‑Plys(ss‑CPT)。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于： 步骤(1)中FA ‑PEG‑N3和alkynyl ‑ GPLGVRG‑NH2的质量比为2:1。 4.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于： 步骤(2)中FA ‑PEG‑GPLGVRG‑NH2和Lys (TFA)‑NCA的质量比为1:1。 5.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于： 步骤(3)中FA ‑PEG‑GPLGVRG‑PLys和 CPT‑ss‑OH的质量比为3:1。 6.一种如权利要求1所述的双响应型的嵌段共聚物在制备抗肿瘤药物中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于： 所述双响应型的嵌段共聚物与siRNA之间 通过静电作用和疏水作用在水溶液中共组装成载有siRNA的纳米前药复合物FNP(ss ‑CPT& siRNA)。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115477687 A 2一种双响应型的嵌段 共聚物及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明属于生物材料领域， 特别涉及一种双响应型的嵌段共聚物及其制备方法和 应用。 背景技术 [0002]CD47是一种膜受体蛋白， 属于免疫球蛋白超家族， 可以与信号调节蛋白α(SIRPα ) 相互作用， 抑制巨噬细胞的吞噬作用。 CD47参与了一系 列的细胞 活动， 包括凋亡、 增殖、 黏着 与迁移， 而且还在免疫和血管新生响应中发挥着 重要作用。 CD47在人体细胞中广泛表达， 并 且在多种不同的癌细胞中是 过表达的。 因此CD47 具有作为某些癌症的治疗 靶点的潜力。 [0003]研究发现， 通过阻断CD47/SIRPα 免疫检查点， 能够促进巨噬细胞迁移到肿瘤组织 处， 导致肿瘤相关的巨噬细胞在功能上从肿瘤促进M2样表型转变为杀伤肿瘤的M1样表型， 激活对肿瘤的免疫应答， 可以促进肿瘤相关巨噬细胞 杀伤肿瘤。 [0004]使用抗CD47的单克隆抗体与CD47结合， 从而阻断癌细胞 的CD47和信号调节蛋白α (SIRPα )的相互作用的方法， 来抑制肿瘤的生长和转移在治疗骨髓瘤、 平滑肌肉瘤、 淋巴瘤 和乳腺癌中取得了一定的效果， 但是由于CD47在人体细胞内的广泛表达， 使用不具有靶向 性的抗体， 会引发一系列的安全问题， 从而限制了抗体的进一 步的临床推广。 [0005]PD‑1(程序化死亡分子 1)是免疫细胞T细胞表面的一种受体蛋白， 它会与肿瘤细胞 表面表达的一种蛋白PD ‑L1(细胞程式死亡 ‑配体1)发生作用。 PD ‑L1蛋白(细胞程式死亡 ‑配 体1)正是PD ‑1的配体， 与免疫系统的抑制有关， 可以传导抑制性的信 号。 PD‑1和PD‑L1一旦 结合便会向T细胞传递一种负向调控信号， 诱导T细胞进入静息状态， 降低T细胞的增生， 让 其无法识别癌细胞， 并且使T细胞自身增殖减少或凋亡， 有效解除机体的免疫反应， 因此癌 细胞可以肆无忌惮地生长了。 使用抗体阻断疗法(抗PD ‑1和PDL‑1抗体， 如opdivo、 keytruda、 tec entriq和MPDL320A)在癌症治疗方面都取得了令 人满意的结果。 然而， 这些抗 体是非特异 性的， 也可以与正常组织细胞上表达的PD ‑1或PDL‑1结合， 导致一定程度的副作 用， 如自身免疫性疾病等。 [0006]虽然， 现在针对肿瘤免疫疗法有一些抗体药物已经推上了临床， 而且与小分子药 物相比， 抗体药物可作用的靶点蛋白种类更多， 且可通过蛋白质工程技术提升其亲和性降 低毒性等。 但是抗体类药物拥有分子结构更加复杂、 生产成本更高、 通常需通过注射给药等 劣势， 并且抗体药物通常只能与细胞膜表面或细胞外的蛋白质发挥作用， 使得其应用受到 一定限制。 于此对比之下， 核酸类药物就具有很好的优势。 [0007]核酸类药物可基于碱基 互补原理对表达相关蛋白质的基因进行调节， 而非与靶点 蛋白质进行结合， 且通过合适的递送系统可使其进入细胞内发挥作用， 因此核酸药物可避 免传统小分子化药和抗体类药物面临的不可成药靶点的 限制问题， 而且对胞内外和细胞膜 蛋白均可发挥调节作用。 同时， 多数核酸类药物的作用基础是碱基互补配对原则， 只需知道 靶基因的碱基序列， 核酸药物的序列设计就十分容易， 化学修饰和递送系统的设计与序列 的设计是相对独立的； 相比之下， 小分子和抗体药物的发现和优化过程中， 对活性、 PK/PD等说　明　书 1/19 页 3 CN 115477687 A 3