(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210904979.X (22)申请日 2022.07.29 (71)申请人 上海交通大 学 地址 200240 上海市闵行区东川路80 0号 (72)发明人 敬璞　温心遥　 (74)专利代理 机构 上海旭诚知识产权代理有限 公司 312 20 专利代理师 郑立 (51)Int.Cl. A23L 33/105(2016.01) A23L 2/52(2006.01) A23J 1/00(2006.01) A61K 9/14(2006.01) A61K 31/409(2006.01) A61K 47/42(2017.01)A61P 7/06(2006.01) A61P 31/10(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/04(2006.01) A61P 39/02(2006.01) A61P 39/06(2006.01) (54)发明名称 一种制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方 法及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种制备纳米尺度叶绿素蛋 白复合体的方法及其应用， 涉及农产品加工技术 领域。 其制备方法包括以下步骤： (1)使用提取液 从绿色植物 叶片中制备富含色素结合蛋白的粗 提物； (2)将粗提物置于制备液中， 超声破碎、 离 心， 制得纳米尺度叶绿素蛋白复合体。 本发明提 供了一种光稳定性极佳的富含纳米尺度叶绿素 蛋白复合体， 该纳米尺度叶绿素蛋白复合体在果 汁、 饮料、 糕点等食品、 保健品和药品领域具有良 好的应用前 景。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 115251387 A 2022.11.01 CN 115251387 A 1.一种制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)使用提取 液从绿色植物叶片中制备富含色素 结合蛋白的粗 提物； (2)将粗提物置于制备液中， 超声破碎、 离心， 制得纳米尺度叶绿素蛋白复合体。 2.如权利要求1所述的制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方法， 其特征在于： 步骤(1) 中， 所述绿色植物叶片为菠菜叶、 苜蓿草叶、 芹菜叶、 羽衣甘蓝、 荨麻叶和芦苇叶的一种。 3.如权利要求1所述的制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方法， 其特征在于： 步骤(1) 中， 粗提物的制备 方法具体包括如下步骤： S11： 将绿色植物叶片洗净并粉碎， 然后向其中加入提取液， 并加入酶解液酶解一段时 间后， 超声破碎、 过 滤、 离心， 取 上清液； S12： 将S1 1中制备得到的上清液继续离心一段时间后， 取沉淀， 即得粗 提物。 4.如权利要求3所述的制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方法， 其特征在于： 步骤S11 中， 所述提取液为含有蔗糖1 ‑2M和氯化钙10 ‑50mM的无菌水溶液， 且绿色植物叶片与提取液 的料液比为1:5 ‑20(g/v)。 5.如权利要求3所述的制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方法， 其特征在于： 步骤S11 中， 酶解液为纤维素酶和半纤维素酶的混合酶解液， 所述纤维素酶的用量为1 ‑3％， 所述半 纤维素酶的用量 为2‑5％， 酶解时间2 ‑6h。 6.如权利要求3所述的制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方法， 其特征在于： 步骤S11 中， 超声破碎时的超声频率 为15‑25kHz， 功率密度为2 ‑100w/L， 时间为1 ‑30min。 7.如权利要求1所述的制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方法， 其特征在于： 步骤2中， 所述制备液为含有山梨糖醇0.1 ‑1M和D‑抗坏血酸钠1 ‑5mM的无菌水溶液， 且粗提物与制备 液的料液比为1： 1 ‑10(g/v)。 8.如权利要求1所述的制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方法， 其特征在于： 步骤2中， 超声破碎时的超声频率 为25‑40kHz， 功率密度为5 0‑600w/L， 时间为1 ‑20min。 9.如权利要求1 ‑8任一项所述的制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方法制备得到的纳 米尺度叶绿素蛋白复合体在制备食品、 保健品或药品中的应用。 10.如权利要求9所述的应用， 其特征在于： 所述的应用是以提升天然叶绿素光稳定性 为目的， 而制成的含纳米尺度叶绿素蛋白复合体的溶 液或粉末。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115251387 A 2一种制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方 法及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及农产品加工技术领域， 具体涉及一种制备纳 米尺度叶绿素蛋白复合体 的方法及其应用。 背景技术 [0002]叶绿素是一种 天然产生的绿色色素， 可以从水果和蔬菜中方便地获得。 这些绿色 化合物在食品中的存在给消费者带来了新鲜的观感， 食品和制药行业允许使用叶绿素作为 天然着色剂添加剂。 同时， 叶绿素的生物活性也被广泛研究： 例如刺激免疫系统、 抗衰老特 性、 血液和肝脏解毒、 从体内清除真菌、 降低 癌症和贫血的发病率。 [0003]然而， 叶绿素在酸、 酶、 尤其是光的存在下是不稳定的， 其降解反应包括脱镁、 差向 异构化、 热解、 羟基化和氧化或光氧化， 这些反应会导致完全变色或颜色变化。 体内叶绿素 的降解包括去除植物醇和通过叶绿素酶形成叶绿素a， 然后去除镁原子， 最后通过加氧酶和 还原酶降解为主要无色的分解代谢产物。 目前， 已有很多的尝试和研究来减缓叶绿素 的光 降解， 例如通过用Fe3+或Cu2+离子替换叶绿素四吡咯中心的Mg2+离子来制备铁叶绿素钠和铜 叶绿素钠， 并且这些化合物比叶绿素具有更好的加工稳定性， 尽管这两种合成色素在许多 国家被允许作为食品着色剂， 但由于健康意识的增强， 消费者更喜欢天然叶绿素而不是合 成叶绿素。 许多研究也提出了叶绿素和脂质体和甘油等包覆聚合物的封装方法。 然而， 包埋 方法的高劳动力和高昂的财务成本给商业 化带来了问题。 [0004]植物细胞中的叶绿体含有高浓度的叶绿素， 所有叶绿体至少有三个膜系统： 外叶 绿体膜、 内叶绿体膜和类囊体系统。 在嵌入类囊体膜的光系统中， 含有一类集光复合物 (LHC)， 它由蛋白质和叶绿素分子组成， 蛋白质作为主干结构将叶绿素固定其中， 以确保高 效转换和利用光能； 每个LHC蛋白单体能够结合 14个叶绿素分子， 由于叶绿素被包装在叶绿 体内的蛋白质和磷脂膜中， 通常认为这种天然结构可以改善叶绿素的光稳定性并防止其变 色。 然而如何批量制备富含该 结构的复合体， 仍待 进一步研究。 [0005]因此， 本领域的技术人员致力于开发一种制备纳 米尺度叶绿素蛋白复合体的方法 及其应用。 发明内容 [0006]有鉴于现有技术的上述缺陷， 本发明所要解决的技术问题是提供制备纳 米尺度叶 绿素蛋白复合体的方法， 处理方法简单、 不涉及化学改性， 所得纯天然产品光稳定性好， 适 合于饮料、 果 汁和糕点 等食品、 保健品或药品相关行业。 [0007]为解决上述目的， 本发明提供如下技 术方案： [0008]一种制备纳米尺度叶绿素蛋白复合体的方法， 包括以下步骤： [0009](1)使用提取 液从绿色植物叶片中制备富含色素 结合蛋白的粗 提物； [0010](2)将粗提物置于制备液中， 超声破碎、 离心， 制得纳米尺度叶绿素蛋白复合体。 [0011]其中， 本发明的步骤(1)中， 所述绿色植物叶片为菠菜叶、 苜蓿草叶、 芹菜叶、 羽衣说　明　书 1/4 页 3 CN 115251387 A 3