ICS 87.010 G 51 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3689—2020 水性涂料中 5 种异噻唑啉酮类生物杀伤剂 含量的测定 高效液相色谱法 Determination of 5 isothiazolinones in waterborne coatings - High performance liquid chromatography 文稿版次选择 2020 - 08 - 03 发布 安徽省市场监督管理局 2020 - 09 - 03 实施 发 布 DB34/T 3689—2020 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省产品质量监督检验研究院提出。 本标准由安徽省家具及装饰装修材料标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省产品质量监督检验研究院、安徽菱湖漆股份有限公司、利辛县永红建筑防 水涂料厂、安徽质量认证培训中心、东至县市场监管稽查大队、铜陵市农业农村局。 本标准主要起草人：郭佳佳、丁燕、童宁、潘剑婷、汤群、吴军、高蓓、陈香云、乔丹丹、殷兵、 王相召、吴祚贵、郑健、祝红蕾、陆乐、卫志东、王苏宁、曹洪雷、杨洪永、王平、吴自成。 I DB34/T 3689—2020 水性涂料中 5 种异噻唑啉酮类生物杀伤剂含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了水性涂料中 5 种异噻唑啉酮类生物杀伤剂含量的测定。 本标准适用于水性涂料中 5 种异噻唑啉酮类生物杀伤剂含量和残留量的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3186 色漆、清漆和色漆与清漆用原材料 取样 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 以甲醇为提取溶剂，用超声提取和离心分离相结合的方法提取样品中的异噻唑啉酮类生物杀伤剂， 用液相色谱仪检测，外标法定量，阳性样品用液相色谱-质谱联用仪确证。 4 试剂和材料 4.1 4.2 4.3 4.4 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，用水为 GB/T 6682 中一级水。 甲醇：色谱纯。 乙酸铵：色谱纯。 甲酸：色谱纯。 标准品：纯度均≥99％，5 种异噻唑啉酮类生物杀伤剂化合物详细信息见表 1。 表1 序 中文名称 号 1 2 2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮 5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉 -3-酮 5 种异噻唑啉酮类生物杀伤剂化合物信息 英文名称 英文 简称 CAS号 分子式 2-Methyl-4-isothiazolin-3-one MI 2682-20-4 C4H5NOS 5-Chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one CMI 26172-55-4 C4H4ClNOS 3 1,2-苯并异噻唑啉-3-酮 1,2-Benzisothiazolin-3-one BIT 2634-33-5 C7H5NOS 4 2-辛基-4-异噻唑啉-3-酮 2-Octyl-4-isothiazolin-3-one OIT 26530-20-1 C11H19NOS DCOIT 64359-81-5 C11H17Cl2NOS 5 4，5-二氯-N-辛基-4-异噻唑 啉-3-酮 4,5-Dichloro-N-octyl-3(2H)-isothiazolone 1 DB34/T 3689—2020 4.5 标准溶液配制 4.5.1 标准储备溶液：分别称取 5 种标准品 0.01 g(精确至 0.01 mg)，用甲醇溶解后，定容至 100 mL， 配制成 100 mg/L 的标准储备溶液，于 4℃的冰箱中避光保存，有效期 2 个月。 4.5.2 混合标准工作溶液：用微量注射器分别吸取 0.05 mL、0.2 mL、1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、10.0 mL 的混合标准储备溶液(4.5.1)置于 6 个 10 mL 棕色容量瓶中，用甲醇稀释、定容，充分摇匀，获得浓 度分别为 0.5 mg/L、2 mg/L、10 mg/L、30 mg/L、50 mg/L、100 mg/L 的混合标准工作溶液。标准溶 液现用现配。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 6 高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器。 超声波清洗仪。 离心机：转速 ≥6000 r/min。 分析天平：精度为 0.01 mg 和 0.01 g。 有机系滤膜：孔径 0.22 μm。 恒温恒湿箱：温度(23±2) ℃，相对湿度(50±5) ％RH。 分析步骤 6.1 样品前处理 6.1.1 取样 按 GB/T 3186 中取样方法操作。 6.1.2 样品和试液的制备 6.1.2.1 含量测试 称取约 2.5 g 样品（精确至 0.01 g），记录样品质量 m，加入甲醇溶解后，于 25 mL 容量瓶中 定容，记录定容体积 V，超声 30 min 后，静置 10 min，取上层清液于 10 mL 离心管中，以 6000 r/min 的速度离心 3 min，取出后用孔径为 0.22 μm 的滤膜过滤，取滤液待测。 6.1.2.2 残留量测试 乳胶漆在聚酯膜上用 100 μm 线棒涂布器制涂一道，水性木器漆约取 15 g 左右在铝板上刷涂，真 石漆在无石棉水泥板上刮涂约 2 mm。制样完成后样板在温度（23±2）℃，湿度（50±5）％RH 环境条 件下放置 7 天，取出用刀片刮取试板上样品粉末，称取约 1.5 g 样品（精确至 0.01 g），记录样品 质量 m。加入甲醇溶解，于 25 mL 容量瓶中定容，记录定容体积 V，超声 30 min 后，静置10 min， 取上层清液于 10 mL 离心管中，以 6000 r/min 的速度离心 3 min，取出后用孔径为 0.22 μm 的滤膜 过滤，取滤液待测。 注：当测试液中异噻唑啉酮的含量超出标准工作曲线范围，可以适当稀释后上机分析，并记录稀释倍数 K。 6.2 空白试验 除不加试样外，均按照上述分析步骤进行。 2 DB34/T 3689—2020 6.3 高效液相参考色谱条件 色谱柱：C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），或柱效相当的色谱柱。 流动相：A 相：0.02 mol/L 乙酸铵水溶液；B 相：甲醇。梯度洗脱：见表 2。 a) b) 表2 时间 流动相A 流动相B /min /％ /％ 0～4.00 75 25 4.00～12.00 75～10 25～90 12.00～16.00 10 90 16.00～17.00 10～75 90～25 17.00～19.00 75 25 检测波长：MI/CMI/OIT：275 nm；BIT：318 nm；DCOIT：282 nm。 柱温：35℃。 进样量：10 μL。 流速：1.0 mL/min。 c) d) e) f) 6.4 液相色谱梯度洗脱程序 测定 6.4.1 将所得测试液(6.1.2)在上述色谱条件（6.3）下进行测定，记录色谱图，根据保留时间定性， 峰面积定量。色谱图参见附录 A。 6.4.2 测试液中待测组分的响应值应在标准曲线线性范围内，通过标准工作曲线得出测试液中每种异 噻唑啉酮的浓度 Ci，空白样液的浓度为 C0。 6.4.3 测试液里如有检出，则需要进一步使用液相色谱-质谱联用仪进行定性确证，实验条件参见附录 B。 7 结果 7.1 计算 7.1.1 样品中各组分含量 Xi 按式(1)计算： Xi  (C i  C 0 ) × V × K ................................ (1) m 式中： Xi ——样品中各组分含量，mg/kg； Ci ——由标准曲线求得样品溶液中异噻唑啉酮的浓度，mg/L； C0 ——空白试验中异噻唑啉酮的浓度，mg/L； m ——样品质量，g； V ——样品定容体积，mL； K ——稀释倍数。 注：计算结果以 2 个样品的算术平均值表示，保留小数点后一位。 3 DB34/T 3689—2020 7.1.2 样品中异噻唑啉酮含量总和 X 按式(2)计算： n X   Xi i 1 .................................... (2) 式中： Xi ——样品中每种异噻唑啉酮的含量，mg/kg。 平行测定两次，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10％。 7.2 检出限 MI、OIT 和 DCOIT 的检出限均为 1 mg/kg，CMI 和 BIT 的检出限均为 2 mg/kg。 7.3 回收率 5 种异噻唑啉酮类生物杀伤剂的方法回收率均在 80.0％～105.0％。 4 DB34/T 3689—2020 AA 附 录 A （资料性附录） 色谱图 5 种异噻唑啉酮类生物杀伤剂混合标样液相色谱图见图A.1。 图A.1 5 种异噻唑啉酮类生物杀伤剂混合标样的高效液相色谱图 5 DB34/T 3689—2020 BB 附 录 B （资料性附录） 实验条件 B.1 样品溶液的制备 同本标准中 6.1。 B.2 工作溶液的配制 B.2.1 标准储备溶液：分别称取含 5 种异噻唑啉酮标准品 0.01 g(精确至 0.01 mg)，用甲醇溶解后， 定容至 100 mL，配制成 100 mg/L 的标准储备液，溶液于 4℃的冰箱中避光保存，有效期 2 个月。 B.2.2 标准工作混合溶液：用甲醇稀释标准储备溶液，得 0.1 mg/L 的标准工作混合溶液。标准溶液 现用现配。 B.3 液相色谱-质谱联用仪参考操作条件 流动相： ——A 相：水（5 mmol/L 乙酸铵溶液，甲酸体积分数 0.1％）； ——B 相：甲醇（5 mmol/L 乙酸铵溶液，甲酸体积分数 0.1％)。 梯度洗脱：见表B.1。 1) 表B.1 液相色谱-质谱联用仪梯度洗脱程序 时间 流动相A 流动相B /min /％ /％ 0～13.00 70～0 30～100 13.00～19.00 0 100 19.00～23.00 70 30 色谱柱：ZORBAX SB-C18，2.1 mm×50 mm，1.8 μm，或柱效相当的色谱柱。 3) 柱温：35℃。 4) 进样量：1 μL。 5) 流速：0.3 mL/min。 6) 雾化气：氮气，纯度≥95％。 7)