ICS 67 B 04 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5165—2020 牛乳成分快速检测技术规范 2020 - 03 - 25 发布 河北省市场监督管理局 2020 - 04 - 25 实施 发 布 DB13/T 5165—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。 本标准由河北省农业农村厅提出。 本标准由河北省畜牧良种工作总站起草。 本标准主要起草人：倪俊卿、马亚宾、蒋桂娥、刘廷玉、杨晨东、赵利梅、刘慧芳、李春芳、刘 鑫雅、王娟、韩杰、张轶芬、周增坡、玉昊、刘晓豪。 I DB13/T 5165—2020 牛乳成分快速检测技术规范 1 范围 本标准规定了被检乳样的采样要求、仪器设备的校准、乳样快速检测的操作步骤和要求。 本标准适用于荷斯坦牛、娟珊牛、乳用西门塔尔牛、水牛、褐牛的乳成分测定。检测结果适用于 牧场指导生产和数据筛查，不适用于质量监督和第三方数据的判定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标 准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 NY/T 1450 中国荷斯坦牛生产性能测定技术规范 NY/T 2659 牛乳脂肪、蛋白、乳糖、总固体的快速测定 红外光谱法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 中红外光谱法 通过检测牛乳样品在中红外区2500 nm～25000 nm的吸收光谱，利用数学方程式计算牛乳成分含量 的方法。 3.2 控制样 牛乳成分含量已知的乳样，用在不同批次乳成分的测定过程中，以检查和控制实验室测试或化验 分析质量。 4 乳样采集和运输 4.1 乳样采集前准备 奶牛生产性能测定中心实验室准备采样瓶、箱子、托盘等辅助设备，定时发送给牛场，与牛场确 定采样和运输时间，牧场将清洗好的采样器或校准好的流量计按要求存放，保证准时采样。 4.2 乳样采集方法、对象及间隔时间 按照NY/T 1450中的4.2执行。 4.3 乳样防腐剂的使用 1 DB13/T 5165—2020 采样瓶中加入溴硝醇每个0.03 g，作为防腐剂，取样后摇晃均匀，保证奶样不变质。 5 乳样检测 5.1 检测指标 乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、尿素氮、总固体、非脂乳固体、不饱和脂肪酸、饱和脂肪酸、丙酮、 血酮、短链脂肪酸、中链脂肪酸、长链脂肪酸。 5.2 检测人员要求 检测人员必须经过专业培训，持证上岗。 5.3 仪器要求 中红外光谱牛乳成分分析仪（联机/自动一体机），状态标识正常，符合国际标准。 5.4 仪器核查 5.4.1 稳定性核查 每天样品检测前和检测结束各核查一次，预热1个控制样，连续测定5次，在检测过程中，一个批 次测试之后或者出现问题数据时要进行控制样检测。控制样乳脂肪率和乳蛋白率允许差值±0.05，如 果偏离此范围，需要进行零点重置。控制样的制作见附录A。 5.4.2 重复性核查 2～4周核查一次，3个控制样，每个样品连续测定3次，剔除第一个检测结果后，（最高值—最低 值）‹0.05 %，则认为合格。重复性核查表见附录B。 5.4.3 均值效率核查 均值效率是对牛乳中悬浮脂肪颗粒均质化处理的过程。结果判定：（原始值A1-废液值A2）<（废 液值A2*1.43 %），即可通过。均质效率核查的具体操作步骤见附录C。 5.4.4 残留核查 每2～4周一次，取去离子水和生鲜乳，各分成10瓶，按设备要求进行测定，残留值（CO）≦1 %为 合格。残留核查表见附录D。 5.4.5 标样校准 开机至仪器状态稳定，清洗、调零后执行标准化操作。 5.4.5.1 标样检测 将全国畜牧总站奶牛生产性能测定标准物质制备实验室提供的12个浓度梯度的标准样品预热后， 充分混匀，按顺序检测。每个样品检测2次，计算2次检测结果的平均值作为结果，与标准物质实验室 公布的测定值进行比对。其次，将测定结果在检测仪的校准界面按顺序输入脂肪、蛋白、乳糖的标准 值，并保存。在预测模型中分别对脂肪和蛋白的截距/斜率进行调整，观察准确性和相关性。 5.4.5.2 校准结果判定 2 DB13/T 5165—2020 12个标准样检测完后，观察准确度（abs）值是否在该成分的1 %以内，误差值大于1 %的，认为不 合格，从样品集合中删除，删除个数不能超过样品集的15 %。其次，观察相关性（R2）是否接近1，R2 应不小于0.9990。 5.4.5.3 校准有效性确认 选择校准指标，查看斜率、截距数值是否已经改变，判断是否校正完成。 5.5 乳成分检测前核查 对被检样品进行标志、顺序、样品状态、样品有效性进行核查 。 5.6 乳成分检测 检测采用下列步骤： a) 将被检乳样按顺序依次放在 42 ℃的水浴锅中预热至（40±1）℃，预热 15 min,最长不超过 20 min； b) 登记被检牧场的名称、被检乳样的份数、乳样状态、检测人的信息。日常奶样测定记录表见 附录 E； c) 在仪器菜单栏中输入被检牧场的名称、检测份数，建立相应的检测批次； d) 将被检乳样上下颠倒 9 次、水平摇荡 6 次，按顺序放入仪器轨道，开始检测乳样。 5.6.1 异常检测数据处理 在乳成分检测过程中，若连续出现异常数据（6.2 %>Fat或Fat<1.4 %，5 %<Par或Par<2.0 %），则 进行仪器间比对，检测结果之差<0.05，认为采样有问题；检测结果之差≥0.05,对仪器进行性能核查 和校准。 5.7 检测数据输出 用U盘或其他存储设备端口输出检测数据，黏贴在模板中，通过软件出具检测报告。模板见附录F。 3 DB13/T 5165—2020 AA 附 录 A （资料性附录） 控制样的制备 A.1 制作步骤 A.1.1 采集当天的新鲜牛乳，也可以将检测完剩余的多个乳样混合在一起。 A.1.2 用3～5层纱布过滤后搅拌均匀, 加入溴硝醇0.06 g/100ml牛乳。 A.1.3 水浴加热至（40±1）℃，在加热过程中轻柔搅拌使脂肪充分融化并混合均匀，然后快速分装 至40ml样品瓶中。 A.1.4 冷却后，4 ℃冷藏保存。 A.1.5 将制备的控制样按均匀间隔抽取小样，数量不低于10 %，进行均匀性检测，检测的平均值作为 该批控制样的标准值（真值） 。 A.1.6 记录控制样制备信息：制备时间、样品来源、检测数值、计算出的平均值和制备人员。 A.2 注意事项 A.2.1 控制样制备的多少根据仪器的使用频率而定，保存时间最多不能超过一周。 A.2.2 使用剩余的奶样制作控制样时，要保证奶样无腐坏现象。 4 DB13/T 5165—2020 BB 附 录 B （资料性附录） 重复性核查工作表 表B.1 重复性核查工作表 实验室名称： 仪器编号： 仪器操作员： 日期： 样品编号 乳脂率（%） 乳蛋白率（%） 乳糖率（%） Cv≤ 0.05 % Cv≤ 0.05 % Cv≤ 0.05 % 1 1 1 2 2 2 3 3 3 平均值（Mean） 标准偏差（Dev） 变异系数（Cv） 判定标准 5 DB13/T 5165—2020 CC 附 录 C （资料性附录） 均质效率核查步骤 C.1 核查步骤 a) b) c) d) e) f) g) 将生鲜乳后检测完剩余的奶样混匀预热至（40±1）℃，放置在仪器吸液管下； 手动测定 4 次，清空废液，将废液管断开； 手动检测 20 个样品，在废液管处收集乳样； 重新连接废液管，将收集的乳样手动检测 6 次； 将最先检测的 20 个样品中最后 5 个脂肪数据和收集乳样测定 6 次中最后 5 个脂肪数据输入仪 器均质效率表中； 对比原始样品检测最后 5 次结果的平均值与收集测定最后 5 次结果的平均值，绝对误差值不 可超过误差许可值； 测定完毕后，在进样口分别放入清洗液和水，对管路彻底清洗。 C.2 核查判定 C.2.1 原始值A1 - 废液值A2 < 废液值A2*1.43 %，则可通过。 6 DB13/T 5165—2020 表C.1 均值效率工作表 实验室名称： 仪器编号： 仪器操作员： 日 生鲜乳原始测定值 生鲜乳废液测定值 期： 1 2 3 1 2 3 4 4 5 5 平均值一（A1） 平均值二（A2） A1-A2 确认误差是否正确 许可误差值 IN or OUT （见下表） 脂肪含量 误差许可值 2.50 2.60 2.70 2.80 2.90 3.00 3.10 3.20 3.30 3.40 3.50 3.60 3.70 3.80 3.90 4.00 4.10 4.20 4.30 4.40 4.50 4.60 0.035 0.037 0.038 0.040 0.041 0.042 0.044 0.045 0.047 0.048 0.050 0.051 0.052 0.054 0.055 0.057 0.058 0.060 0.061 0.062 0.064 0.065 8 2 6 0 5 9 3 8 2 6 1 5 9 3 8 2 6 1 5 9 4 8 4.70 0.067 2 4.80. 0.068 5 4.90 0.070 1 5.00 0.071 5 7 DB13/T 5165—2020 DD 附 录 D （资料性附录） 残留核查工作表 表D.1 残留核查工作表 实验室名称： 仪器编号： 仪器操作员： 日 样品 乳脂率 期： 乳蛋白率 W1 W2 M1 M2 W3 W4 M3 M4 W5 W6 M6 M7 W7 W8 M7 M8 W9 W10 M9 M10 Old CO New CO 判定标准 ： 8 New CO≤1 % 乳糖率 DB13/T 5165—2020 EE 附 录 E （资料性附录） 日常奶样测定记录表 表E.1 日常奶样测定记录表 仪器编号： 月 日 责任人： 序号 牛场 测定 名称 数量 年 样品情况记录（个） 采样 量少 有杂物 腐败 变质 采样物品回收记录（个） 其它 采样箱 采样框 采样瓶 9 DB13/T 5165—2020 FF 附 录 F （资料性附录） 检测结果模板 表F.1 检测结果模板 牛只测定明细表 测定场编号： 场内管理号 采样日期： 乳脂率 蛋白率 乳糖率 总固体 _________________________________ 10 体细胞数 尿素氮