ICS67.050 CCSX28 团体标准 T/GDBK006-2023 2023-10-20发布 2023-10-20实施 广东省焙烤食品糖制品产业协会发布焙烤食品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的测 定高效液相色谱/质谱法 Detectionmethodofγ-aminobutyricacid-glyoxal-formaldehydeadductinbaked food——Highperformanceliquidchromatography/massspectrometry 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/GDBK006—2023 I前  言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广东省焙烤食品糖制品产业协会和中山市食品学会共同提出。 本文件由广东省焙烤食品糖制品产业协会归口。 本文件起草单位：中山市食品学会、咀香园健康食品（中山）有限公司、中山洪力健康食品产业研 究院有限公司、广东省焙烤食品糖制品产业协会、暨南大学、中山市日威食品有限公司、利诚检测认证 集团股份有限公司、中山市强晟水产养殖有限公司、中山海关技术中心、广东省科学院测试分析研究所 （中国广州分析测试中心）、华南农业大学、廉江市检验检测中心、广东药科大学、广东省中山市坦洲 镇农业服务中心、广州广电计量检测股份有限公司、中山市技师学院、中山市第一职业技术学校、中山 市食品药品检验所、中山联测检测技术有限公司、达能（中国）食品饮料有限公司、中山市神湾镇大石 头盘菠萝专业合作社、中山永恒检测科技有限公司、创味舌尖冻干食品科技（中山）有限公司、中山市 火炬高技术产业开发区食品药品监督所、中山火炬职业技术学院、广东省焙烤食品产业技术创新联盟。 本文件起草人：胡志高、林国强、郑萍、吕品、欧隽滢、罗紫明、孙宝林、唐丽、唐光华、唐雪娟、 欧仕益、陈伦韬、黄思韵、陈琼华、谭应职、张发妙、黄焯枝、陈晓丽、叶文杰、陈丽红、莫康扬、李 蓉、陈月玲、吴小勇、朱华兴、叶文杰、李向丽、张延杰、刘金川、董二飞、范雪琳、张瑶、谈欣乐、 普昕瑞、吴洁伊、黄乐炫。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/GDBK006-2023 1焙烤食品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的测定 高效液相色谱/质谱法 1范围 本文件描述了食品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的高效液相色谱/质谱测定方法的的原理、试 剂和材料、仪器设备、样品制备、试验步骤、试验数据处理、精密度和试验报告。 本文件适用于焙烤食品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的定性定量测定。对含有γ-氨基丁酸- 乙二醛-甲醛加合物产品的含量检测可参照使用。 本文件检出限为4.2µg/kg，定量限为13.9µg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与 再现性的基本方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样用正己烷脱脂后，用20%甲醇/水溶液提取，提取液经减压蒸干后复溶，试样溶液用高效液相色 谱/质谱联用仪的多反应监测（MRM）模式测定，外标法定量。 5试剂和材料 5.1试剂 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 5.1.1甲醇（色谱纯）。 5.1.2正己烷（分析纯）。 5.1.3甲酸（色谱纯）。 5.1.4甲醛（分析纯）。 5.1.5乙二醛(glyoxal,GO，分析纯)。 5.1.6γ-氨基丁酸（分析纯）。 全国团体标准信息平台 T/GDBK006-2023 25.2试剂配制 5.2.1甲醇/水溶液（20%）：移取50mL甲醇（5.1.1）于250mL容量瓶中，用水定容至刻度。 5.2.2甲酸/水溶液（0.1%）：移取0.25mL甲酸（5.1.3）于250mL容量瓶中，用水定容至刻度。 5.3标准品 γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物标准品（C11H16N2O4,CAS号：805228-41-5）：纯度大于98.0%。 5.4标准溶液的配置 根据需要，用水配置γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的浓度为10mg/L的溶液，用水稀释得到一 系列浓度的标准溶液（100µg/L、500µg/L、1000µg/L、2000µg/L、3000µg/L、4000µg/L）。 6仪器设备 6.1液相色谱仪/三重四极杆质谱联用仪，配有电喷雾离子源（ESI）。 6.2粉碎机(细度30～100目）。 6.3分析天平，感量为0.0001克。 6.4分析天平，感量为0.00001克。 6.5高速离心机（12000转/分，14000×g)。 6.6涡旋器（300rpm～3000rpm）。 6.7常规实验室玻璃器皿。 7试验步骤 7.1样品的制备 称取3g粉碎后的样品（过60目筛）于50mL离心管中，加入10mL正己烷没过样品，涡旋5min 后于10000rpm下离心10min，重复3次以完全去除油脂，置于通风橱中将残余的正己烷挥干。向离 心管中加入15mL20%甲醇/水溶液，涡旋5min后于10000rpm下离心10min，收集上清液，该过程 重复2次。将上清液减压蒸干，加20%甲醇/水溶解，定容至5mL。用0.22μm尼龙滤膜过滤，用 HPLC-MS/MS的多反应监测模式(MRM)测定样品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛含量。 7.2色谱测定 7.2.1高效液相色谱参考条件 a）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（C18）Aq柱，填料粒径5.0µm，柱长250mm，内径4.6µm， 或其他等效色谱柱； b）流动相：A相为含0.1%甲酸/水溶液，B相为甲醇，梯度洗脱程度：0～2min，5%B～95%B； 2～8min，95%B～95%B；8min～10min，95%B～5%B；10min～18min，5%B。 c）流量：0.4mL/min； d）柱温：40℃。 e）进样量：0.5μL。 7.2.2质谱参考条件 a）电离方式：阳离子电喷雾电离（ESI+）； 全国团体标准信息平台 T/GDBK006-2023 3b）离子扫描模式：多反应监测模式（MRM）； c）毛细管电压：4000V d）解簇电压：50V e）干燥气温度：300℃ f）干燥气流量：10L/min g）雾化气压力：50Psi h）监测离子范围：m/z50~800。 i）定性、定量离子见表1： 表1γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的优化电压参数 加合物种类 离子对 碰撞电压（eV） γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛241/155a 241/69 241/87-16 -22 -22 a为定量离子 7.2.3标准曲线的绘制 取5.4中的γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物标准溶液（100µg/L、500µg/L、1000µg/L、2000µg/L、 3000µg/L、4000µg/L），按照色谱参考条件（7.2.1）进行测定，以标准系列中加合物的质量浓度为 横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 7.2.4样品的测定 取样品溶液和标准溶液各0.5µL注入液相色谱进行分析，以其标准溶液目标峰的保留时间进行定 性，根据峰面积计算样品中待测物质的含量。加合物的总离子流图和质谱图见附录A。 7.2.5空白实验 除不称取样品外，均按照上述测定条件和步骤进行。 8试验数据处理 样品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的含量，按照公式（1）计算： …………………………………………（1） 式中： х——样品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的含量，微克/千克（µg/kg）； C——样品中加合物的浓度，微克/升（µg/L）； V——被测样品的总体积，毫升（mL）； D——样品稀释倍数； M——称取样品的质量，克（g）。 计算结果以重复性条件下获得的3次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 9精密度 全国团体标准信息平台 T/GDBK006-2023 49.1一般规定 本文件的精密度按照GB/T6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。 9.2重复性 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 9.3再现性 在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 10试验报告 试验报告至少应给出以下几个方面的内容： ——试验对象； ——所使用的标准； ——所使用的方法； ——结果； ——观察到的异常现象； ——试验日期。 全国团体标准信息平台