ICS11. 220 CCS B 41 DB65 新疆维吾尔自治区地方标准 DB 65/T 4668—2023 马传染性贫血病毒抗体荧光层析检测方法 Fluorescence chromatography detection method for equine infectious anemia virus antibody 地方标准信息服务平台 2023-07-20 发布 2023-09-20实施 新疆维吾尔自治区市场监督管理局 发布 地方标准信息服务平台 DB65/T4668—2023 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由新疆维吾尔自治区动物疾病预防控制中心提出。 本文件由新疆维吾尔自治区畜牧兽医局归口。 本文件起草单位：新疆维吾尔自治区动物疾病预防控制中心、中国动物疫病预防控制中心、禾旭（郑 州)生物技术有限公司。 本文件主要起草人：薛文、孙雨、王文、刘亚涛、古丽曼·木哈买提拜、秦菊、努尔麦麦提·阿穆提、 孙航、任娟、苏晓慧、马晓艳、王睿男、居马别克·夏拉巴依、薛新梅、冯冰、陈玲、沙娜瓦尔·塔希、 李舵、美热木古丽·巴依待拉提、乌那尔汗·吉斯汗、李雷斌、李秀梅、刘近、任雪建、吕园园、杨转、 新那、玛依拉·艾尼瓦、郭海燕、王庆娇。 本文件实施应用中的疑问，请咨询新疆维吾尔自治区畜牧兽医局、新疆维吾尔自治区动物疾病预防 控制中心、中国动物疫病预防控制中心、禾旭(郑州)生物技术有限公司。 对本文件的修改意见和建议，请反馈至新疆维吾尔自治区畜牧兽医局（乌鲁木齐市天山区新华南路 408号）、新疆维吾尔自治区动物疾病预防控制中心（新疆乌鲁木齐市高新技术产业开发区蓝天路268号）、 中国动物疫病预防控制中心(北京市大兴区生物医药基地天贵大街17号）、禾旭(郑州)生物技术有限公 司(河南自贸试验区郑州片区(经开)第十五大街烘云路交汇处佳林国际4号楼1101室）、新疆维吾尔自治 区市场监督管理局(新疆乌鲁木齐市天山区新华南路167号）。 新疆维吾尔自治区畜牧兽医局联系电话：0991-8568089；传真：0991-8527722；邮编：830004 新疆维吾尔自治区动物疾病预防控制中心联系电话：0991-4626082；传真：0991-4641491；邮编： 830011 中国动物疫病预防控制中心联系电话：010-59198917；传真：010-59198899；邮编：102618 禾旭（郑州）生物技术有限公司联系电话：0371-55130330；传真：0371-55137800；邮编：450000 新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话：0991-2818750；传真：0991-2311250；邮编：830004 地方标准信息服务平台 地方标准信息服务平台 DB65/T4668—2023 马传染性贫血病毒抗体荧光层析检测方法 1 范围 本文件规定了马传染性贫血病毒抗体荧光层析检测方法。 本文件适用于马属动物血清中马传染性贫血病毒抗体的快速检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB19489 实验室生物安全通用要求 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 马传染性贫血 equine infectious anemia anemia,EIA 简称马传贫，是由马传贫病毒引起的马属动物以反复发作、贫血和持续病毒血症为特征的传染性疾 病。 3. 2 荧光层析检测方法 fluorescence chromatography detection method 以荧光纳米微球作为示踪物，标记抗原或抗体与待测物进行免疫反应，经荧光免疫分析仪测定最终 你准信息服务平台 产物的荧光强度，从而得出待测物浓度的检测方法。 3. 3 T/C值 检测线发光值与质控线发光值之比。 4原理 采用双抗原夹心检测马属动物血清样本中的马传染性贫血病毒抗体。当血清样本中抗体与荧光纳 米微球标记的马传染性贫血抗原接触反应后形成抗原-抗体复合物，继续与硝酸纤维素(NC)膜上检测线 (Text，简称T)包被的马传染性贫血特异性抗原反应形成抗原-抗体-抗原复合物反应，其余物质继续向 1 DB65/T4668—2023 前层析在质控线(Control，简称c)被马传染性贫血兔多抗捕获形成复合物，最后用荧光免疫分析仪读取 检测卡上的荧光信号。 5仪器与试剂 5.1仪器 5.1.1便携式荧光免疫分析仪，检测波长为365/610nm。 5.1.2单道移液器及相应吸头：0.5μL～10μL；10μL～100μL。 5.1.3分析天平：精度0.0001g。 5.1.4离心机：转速300g~8000g。 5.1.5冰箱：2℃8℃，-20℃。 5.2试剂 5.2.1实验用水：符合GB/T6682中一级水的规格。 5.2.2样品稀释液：见附录A。 5.2.3马传染性贫血病毒抗体荧光层析法检测试剂卡：见附录B。也可使用商品化马传染性贫血病毒 抗体荧光层析法检测试剂卡。 6样品采集与处理 6.1 样品的采集 应按照NY/T541中的规定进行采集，并做好安全防护。采集静脉血时，每匹马属动物使用一个一次 性采血器，采集3mL～5mL血液。 6.2样品的处理 血液样品以3000g离心8min～10min，取上层血清用于检测。血清应清亮，无溶血，血清量大于 500 μL。 6.3样品的贮存 血清样品在2℃～8℃冷藏保存，如需长期保存应置-20℃或-80℃ 7操作步骤 7.1 仪器的准备 式荧光免疫分析仪连接成功。 7.2待检血清的稀释 用微量毛细采样管取10uL血清样本加入到已备好的样本稀释液90μL管中混匀，稀释后的样品需 在1h内完成检测。 7.3取检测卡 2 DB65/T4668—2023 在室温下从铝箔包装中取出检测试剂卡，置于平整、洁净的台面上。 7.4加样及孵育 移液器将已稀释好的样本，垂直而缓慢地滴加80μL到加样孔内，室温下放置10min～15min。 7.5检测读值 读数前先将产品配套ID卡插入便携式荧光免疫分析仪，之后将检测卡加样口朝里放入便携式荧光 免疫分析仪检测，5min内完成读值。 8结果判定 8.1i 试验成立条件 8.1.1 阴性 用马传染性贫血标准阴性血清检测，T/C值<0.1时，试验成立。 8.1.2阳性 用标准马传染性贫血阳性血清检测，T/C值≥0.1时，试验成立。 8.2结果判定标准 8.2.1当阴性对照和阳性对照的检测结果均成立，检测结果有效。当阴性或阳性对照的检测结果不成 立，表明操作过程不正确或检测试剂卡已损坏、失效。 8.2.2当T/C值<0.1时，判为马传染性贫血病毒抗体阴性。当T/C值≥0.1时，判为马传染性贫血 病毒抗体阳性。 9: 生物安全措施 进行马传染性贫血病毒抗体实验室检测时，如血清处理等，应按照GB19489的规定进行。 地方标准信息服务平台