ICS B4665.120 T/SDAQI 团 体 标 准 T/SDAQI039—2021 饲料中抗氧化剂丁基羟基茴香醚(BHA)、二 丁基羟基甲苯(BHT)的测定气相色谱法 Determinationofbutylatedhydroxylanisole(BHA)、dibutylatedhydroxyltoluene (BHT)infeeds—Gaschromatography 2021-10-25实施 山东质量检验协会  发布2021-09-25发布 全国团体标准信息平台 T/SDAQI039—2021 I版权说明 本文件系由山东质量检验协会（简称“协会”）组织创制的团体标准文本（含制定过程中的草案）， 协会拥有本文件的著作权，受《中华人民共和国著作权法》保护。除法律所允许的情形或事先得到协会 书面许可外，任何组织和个人不得以任何理由进行复制、销售、传播本文件，或抄袭、歪曲本文件等侵 权行为，否则，行为人应承担相应的民事、行政责任，构成犯罪的，将依法追究其刑事责任。其他文件 引用本文件，不属侵权行为。 凡利用本文件进行或支持贸易、认证等商业活动，应事先购买正式文本或得到协会书面授权。购买 本文件或获得授权，请与协会联系。 欢迎社会各界举报侵权盗版行为，协会将依法严格保护举报人信息。 联系人：范红梅 联系电话：0531-8970198615668365153 联系邮箱：keyanjishuzhongxin@163.com 协会对本版权声明拥有最终解释权。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI039—2021 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东质量检验协会提出并归口。 本文件起草单位：山东省产品质量检验研究院、青岛市食品药品检验研究院、滨州市食品药品检验 检测中心。 本文件主要起草人：周莉莉、康兆广、赵海峰、侯广月、李丽、韩家忠、王一村、王苹苹、武笑颖、 张鑫、赵娟、袁雪、姜鑫、栾文惠、李梓源、李延臻、李秀超、潘舰。 本文件的所有权和解释权归山东质量检验协会。 如果您在本文件使用中发现错误或技术内容有不当之处，请及时与协会秘书处联系，将意见发送到 keyanjishuzhongxin@163.com。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI039—2021 1饲料中抗氧化剂丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)的测 定气相色谱法 1范围 本文件规定了饲料中丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)的测定。 本文件适用于配合饲料、复合预混合饲料、浓缩饲料、鱼粉、骨粉、蛋白饲料等饲料中BHA、BHT 的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样中的抗氧化剂用有机溶剂提取、净化后，用气相色谱仪检测，采用保留时间定性，外标法定量。 必要时，用气相色谱质谱联用仪进行确证。 5试剂 除非另有规定，本方法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水。 5.1正己烷。 5.2环己烷。 5.3乙酸乙酯。 5.4乙腈。 5.5氯化钠：分析纯。 5.6BHA标准品：纯度≥99.0 % 5.7BHT标准品：纯度≥99.3 %。 5.8BHA、BHT标准储备液：准确称取BHA、BHT标准品各50 mg(精确至0.1mg)，用乙酸乙酯和环己烷 混合溶液（1:1）定容至50 mL，配制成1 000 mg/L的储备液，于4 ℃冰箱中避光保存。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI039—2021 25.9BHA、BHT标准使用液：吸取标准储备液0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL于一组10 mL容 量瓶中，用乙酸乙酯和环己烷混合溶液（1:1）定容，此标准系列的浓度为10mg/L、20mg/L、50mg/L、 100 mg/L、200 mg/L，现用现配。 6仪器和设备 6.1气相色谱仪，配有氢火焰离子化检测器（FID）。 6.2凝胶渗透色谱仪(GPC)或其他等效净化设备。 6.3电子天平：感量为0.1 mg和0.01 mg。 6.4旋转蒸发仪。 6.5涡旋混合器。 6.6组织粉碎机。 7试样制备 固体或半固体样品粉碎混匀，然后用四分法取样，或根据试样情况取有代表性试样，密封保存。 8试验步骤 8.1提取 称取饲料2.0 g(准确至0.1 mg)，于50 mL离心管中，加入5 mL乙腈饱和的正己烷溶液，涡旋1 min充 分混匀，浸泡10 min。加入5 mL饱和氯化钠溶液，用5 mL正己烷饱和的乙腈溶液涡旋2 min，3 000 r/min 离心5 min，收集乙腈层于试管中，再重复使用5 mL正己烷饱和的乙腈溶液提取2次，合并3次提取液，待 净化。 8.2净化 提取液经凝胶渗透色谱装置净化，收集流出液蒸发浓缩至近干，用乙酸乙酯和环己烷混合溶液定容 至2 mL（或采用等效净化方式），进仪器分析。凝胶渗透色谱净化参考条件见附录A。 8.3气相色谱参考条件 8.3.15 %苯基-甲基聚硅氧烷毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），或等效色谱柱。 8.3.2进样口温度：230 ℃。 8.3.3升温程序：初始柱温80 ℃，保持1 min，以10 ℃/min升温至250 ℃，保持5 min。 8.3.4检测器温度：250 ℃。 8.3.5进样量：1 μL。 8.3.6进样方式：不分流进样。 8.3.7载气：氮气，纯度≥99.999 %，流速1 mL/min。 8.4定量测定 将标准系列工作液及试样溶液分别注入气相色谱仪中，测定相应的抗氧化剂，以标准工作液的浓度 为横坐标，以目标物响应值(如：峰面积、峰高等)为纵坐标，绘制标准曲线。根据试样溶液相应的抗氧 化剂响应值，在标准曲线得到待测液中相应抗氧化剂的浓度，色谱图见附录B。当目标物有检出时使用 气相色谱-质谱法进行确证（附录C）。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI039—2021 38.5平行试验 按上述规定对同一试样进行平行试验测定。 8.6空白试验 除不加试料外，按上述规定进行操作。 9试验数据处理 试样中抗氧化剂的含量按式（1）计算： fmVcY ……………………………………………(1) 式中： Y——试样中抗氧化剂含量，mg/kg； c——从校正曲线上得到的试样抗氧化剂浓度，mg/L； m——试样质量，g； V——样液最终定容体积，mL； f——测定液稀释倍数。 计算结果应扣除空白值，以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留3 位有效数字。 10精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。 11其他 本方法定量限为：丁基羟基茴香醚(BHA)，2 mg/kg；二丁基羟基甲苯(BHT)，2 mg/kg。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI039—2021 4A 附录A （资料性） 凝胶渗透色谱净化参考条件 凝胶渗透色谱净化参考条件如下： 凝胶渗透色谱柱：300 mm×20 mm玻璃柱，BioBeads(S-X3)，40 μm～75 μm； 流动相：乙酸乙酯：环己烷=1：1(体积比)； 流速：5 mL/min； 进样量：2 mL； 流出液收集时间：7 min～17.5 min； 紫外检测器波长：280 nm。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI039—2021 5附录B （资料性） 标准谱图 B.1BHA、BHT标准溶液的气相色谱图 图B.1BHA、BHT标准溶液的气相色谱图（浓度为50.0mg/L） B.2BHA、BHT标准溶液的气相色谱质谱图 图B.2BHA、BHT标准溶液的气相色谱质谱图（浓度为1.0mg/L） 全国团体标准信息平台 T/SDAQI039—2021 6B.3BHA（SIM扫）离子比例图 图B.3BHA（SIM扫）离子比例图 B.4BHT（SIM扫）离子比例图 图B.4BHT（SIM扫）离子比例图 全国团体标准信息平台 T/SDAQI039—2021 7附录C （资料性） 气相色谱-质谱法确证 C.1仪器设备 C.1.1气相色谱质谱联用仪（配有EI源）。 C.1.2凝胶渗透色谱仪(GPC)。 C.1.3电子天平：感量为0.1 mg和0.01 mg。 C.1.4旋转蒸发仪。 C.1.5漩涡振荡器。 C.1.6粉碎机。 C.2气相色谱质谱仪参考条件 色谱柱：5 %苯基-甲基聚硅氧烷毛细管柱，30 m×0.25 mm×0.25 μm，或等效色谱柱； 色谱柱升温程序：70 ℃保持1 min，然后以10 ℃/min程序升温至200 ℃，再以280 ℃后运行5 min； 载气：氦气，纯度≥99.999 %，流速1 mL/min； 进样口温度：230 ℃； 进样量：1 μL； 进样方式：无分流进样，1 min后打开阀； 电子轰击源：70 eV； 离子源温度：230 ℃； GC-MS接口温度：280 ℃； 溶剂延迟10 min； 选择离子监测：每种化合物分别选择1个定量离子，2个定性离子。每组所有需要检测离子按照出峰 顺序，分时段分别检测。 表A.1定量、定性离子表 抗氧化剂名称 定量