ICS 67.120.30 B50 T/MMAT 茂 名 市 罗 非 鱼 协 会 团 体 标准 T/MMAT 0 02—2020 罗非鱼中孔雀石绿、氯霉素、呋喃西林和呋 喃唑酮代谢物 残留快速检测 方法 2020 - 07 - 01发布 2020 - 07 - 10实施 茂名市罗非鱼协会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/MMAT 002 —2020 I 前 言 本标准依据 GB/T 1.1 -2009 给出的规则起草。 本标准由 茂名市罗非鱼协会 提出并归口。 本标准起草单位： 茂名市罗 非鱼协会 、茂名市食品药品检验所 。 本标准主要起草人： 林莉莉、王伯顺、 李海丽、李土贵、张海明、康婷、伍杰森 本标准为首次发布 。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/MMAT 002 —2020 1 罗非鱼中孔雀石绿、氯霉素、呋喃西林和呋喃唑酮代谢物 残留快速 检测方法 1 范围 本标准规定了 罗非鱼中孔雀石绿、氯霉素、呋喃西林和呋喃唑酮代谢物 残留快速检测 方法的试剂、 仪器和耗材、操作步骤、结果判定等技术要求。 本标准适用于在生产、销售环节中对罗非鱼产品进行药物残留快速检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SC/T 3016 -2004 水产品抽样方法 农业部1192号公告-1-2009 水产苗种违禁药物抽检技术规范 DB44/T 531-2008 养殖水产品药物残留抽样技术规范 《广东省水产品质量安全监控工作规范（试行）》 GB/T 20361 -2006 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定 高效液相色谱荧光检测法 GB/T 22338 -2008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定 GB/T 21311 -2007 动物源性食品中硝基呋喃类药物 代谢物残留量检测方法 高效液相色谱 /串联质 谱法 3 检测试剂盒采购与验收 孔雀石绿检测试剂盒法，检测限为 2.0 μg/kg及以下，不得有假阴性，具体操作步骤参见试剂盒 生产厂家检测使用说明书。 呋喃唑酮、呋喃西林代谢物检测试剂盒法，检测限为 1.0 μg/kg及以下，不得有假阴性，具体操 作步骤参见试剂盒生产厂家检测使用说明书。 其它药物残留快速检测方法参照执行。 采购的快速检测试剂盒品牌应参加过农业部渔业渔政管理局组织的产品性能验证。 开展检测前，应对选用的快速检测试剂盒产品每个批号进行性能验证。 孔雀石绿、呋喃唑 酮（呋喃西林）代谢物残留检测试剂盒可参考以下验证方法：配制孔雀石绿（无 色）和呋喃唑酮（呋喃西林）代谢物标准溶液，添加标准溶液至孔雀石绿（无色） 3.0 μg/kg，呋喃唑 酮代谢物 2.0 μg/kg，样品经前处理后，进行验证。其它药物残留检测试剂盒验收可参照执行 。 4 仪器和耗材 全国团体标准信息平台 T/MMAT 002 —2020 2 分析天平（精确至 0.0001g）、匀浆机、 离心管（5mL、50mL）、 离心机（最高离心速度不低于 4000r/min ）、 移液管（1mL、2mL、5mL）、可调移液器（ 50μL 、200μL、1000μL）、恒温水浴锅、涡旋振荡器 、氮 吹仪 5 操作步骤 5.1 样品采集及运输 样品采集及运输按照 SC/T 3016 -2004、农业部 1192号公告 -1-2009 水产苗种违禁药物抽检技术规 范、 DB44/T531 -2008、《广东省水产品质量安全例行监测行为规范（试行） 》等规定执行。 采集罗非鱼 的肌肉部位用于检测， 鲜活水产品保证样品送至实验室时不变质，干 制水产品应密封保存，不能使其吸 潮或水分散失 。 5.2 样品处理 现场制样时， 将样品去皮去脂肪， 样品肌肉部位，试样量不少于 400g。将肌肉部分切成小块，大 小约为1 cm×1 cm×1cm，用匀浆机搅拌样品 ，装入样品袋，贴上样 品标签。 5.3 样品检测 5.3.1 孔雀石绿 称取2±0.05g均质物于 50mL离心管；用提取剂 A专用刻度滴管加入 2m L MG提取剂A，振荡1min， 然后分别加入 200μL MG提取剂B、1瓶MG提取剂C于50mL离心管中； 剧烈振荡 3min后，在室温下 （20-25℃）经4000r/min 离心5min；用移液管移取 1mL上清液于到 5mL离心管中，加入 MG氧化剂瓶 内的下层黄色液体 50μL于上清液中， 65℃下空气吹干；用复溶液专用滴管向吹干的离心管中加入 300 μL MG复溶液，用试剂板内置滴管冲洗溶解离心管内壁上残留物；用移液器吸取待检样本溶液 100μL 于金标微孔中，用滴管充分吸打混匀，等待反应 5分钟，全部加至样孔，结果应在 5-8分钟读取，观察 结果。 5.3.2 氯霉素 称取2±0.05g均质物至 5mL离心管中；加入一管 CAP提取剂（乙酸乙酯） ；剧烈振荡 3min后，在 室温下（ 20-25℃）经4000r/min 离心5min；用移液管移取上层溶液 2mL至新5mL离心管中，在 65℃水 浴中用氮气（或公司提供的空气吹干仪）吹干；分别用 CAP净化剂专用滴管和 CAP复溶液专用滴管向吹 干的离心管中 加入0.3mL CAP净化剂和 0.3mL CAP复溶液，用试剂板内置的滴管轻轻吹打润洗离心管内 壁（吹打时避免产生气泡） ；静置分层后吸取下层溶液，待检；用移液器吸取下层液体 100μL至加样孔 （或滴管滴加 3滴） ，结果应在 3-5分钟，其他时间判读无效。 5.3.3 呋喃西林和呋喃唑酮代谢物 称取2±0.05g均质物至 50mL离心管中；依次加入 4mL去离子水、 0.5mL 1M盐酸，0.1mL SEM/AOZ 衍生化试剂，充分混合 3min，60℃水浴条件下孵育 30min；取出后加入 5mL 0.1M磷酸氢二钾， 0.4mL 1M 氢氧化钠，倒入一瓶 SEM/AOZ提取剂（ 6mL） ，充分混合 1min，经4000r/min 离心5min；用移液管移取 上层溶液 3mL于5mL离心管中， 65℃下空气吹干；向吹干的试管中加入 1mL SEM/AOZ净化剂，加盖振荡 1min，然后加入 0.5mL SEM复溶液，上下颠倒混匀， 经4000r/min 离心1min（或静置至明显分层） ； 用移液器 吸取下层液体 0.1mL分别至SEM、AOZ加样孔（或滴管滴加 3滴） ，静置 5分钟，观察结果。 全国团体标准信息平台 T/MMAT 002 —2020 3 6 结果判定 6.1 结果记录 样品检测时，可每 20个样品为 1个检测批次，应按程序填写样品名称 、样品编号、环境记录、试 剂盒生产单位及批号、结果判定等相应的原始记录（孔雀石绿、呋喃唑酮代谢物残留检测原始记录格式 见附录A ，其他药物残留原始记录格式可参照绘制） 。快检样品结果判读无效时，该快检样品须进行重 新检测。 6.2 质量控制 每批次样品需添加 1个空白添加试样作为阳性对照，作为阳性对照的空白添加试样，添加浓度为药 物残留快速检测试剂盒检出限的 1～2倍左右。疑似阳性样品应重复检测一次，需添加空白试样作为阴 性对照，添加空白添加试样作为阳性对照。阴性对照和阳性对照等质控样品应与同批次快检样品同时检 测，质控结果应准确清 晰记录并归档。质控样品检测结果异常时，同批次样品应进行重复检验。 6.3 结果判定与疑似阳性样品确证 6.3.1 结果判定 试剂盒快速检测结果仅作定性筛选判定。当出现阳性结果时，应及时送请有相应检测资质的检测机 构进行确证 6.3.2 确证方法 孔雀石绿确证方法： GB/T 20361 -2006 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定 高效液相色谱荧 光检测法 （检出限 ：0.0005mg/kg)。 氯霉素确证方法： GB/T 22338 -2008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定 （检出限： 0.1μg/kg） 呋喃西林和呋喃唑酮代谢物确证 方法：GB/T 21311 -2007 动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残 留量检测方法 高效液相色谱 /串联质谱法 (检出限：0.5 μg/kg)。 _________________________________ 全国团体标准信息平台