ICS 65.02 B40 团 体 标 准 T/NAIA 004—2020 瘤胃液中氨态氮浓度的测定 碱性次氯酸钠 -苯酚分光光度法 Determination of ammoniacal nitrogen concentration in Rumen fluid alkaline Sodium hypochlorite Phenol Spectrophotometer 2020-07-07 发布 2020-08-01 实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 1前 言 本标准的编写格式符合 GB/T 1.1-2009 《标准化工作导则 第 1 部分 标准的结构和编写》 规定编写。 本标准由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本标准由宁夏大学、宁夏饲料工程技术研究中心、宁夏兽药饲料监察所、宁夏昊标检测服 务研究院、宁夏化学分析测试协会起草。 本标准主要起草人：辛国省、刘辉、卜姣姣、燕翀、杨仪、丁园、高巧仙、武晓宏、谢荣 国、 张小飞、王京、佐婷婷。 本标准为首次发布。 全国团体标准信息平台 2瘤胃液中氨态氮浓度的测定 碱性次氯酸钠 -苯酚分光光度法 1　范围 本标准规定了瘤胃液中氨态氮浓度的碱性次氯酸钠 -苯酚分光光度测定方法。本标准适用于 反刍动物瘤胃液中氨态氮浓度的测定。 本方法定量限： 0.1mg/100mL 。 2　规范性引用文件 下列文件中的条款通过在本标准中的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其随后所有的修改单 (不包括勘误的内容 )或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准 达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本 适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 602 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备 3　原理 在催化剂亚硝基铁氰化钠存在下，氨与碱性次氯酸钠和酚反应生成蓝色吲哚酚。 4　试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1　甲醇（分析纯）。 4.2　盐酸（分析纯）。 4.3　亚硝基铁氰化钠。 4.4　苯酚。 4.5　苯酚显色剂： 称取0.05g亚硝基铁氰化钠（ 4.3），用 500mL蒸馏水溶解；加入 10g苯酚（4.4），混合，溶 解；用蒸馏水定容到 1L，装入棕色试剂瓶，在 2～10℃保存。在避光条件下可保存 6个月。 4.6　氢氧化钠。 4.7　磷酸氢二钠。 4.8　次氯酸钠。 全国团体标准信息平台 34.9　碱性次氯酸钠试剂： 称取5g 氢氧化钠（ 4.6），用 650mL左右的蒸馏水溶解；加入 37.85g 磷酸氢二钠（ 4.7）， 加热溶解；冷却后，加入 50mL 次氯酸钠（ 4.8），混合，用蒸馏水定容到 1L。用滤纸过滤，置 于聚乙烯瓶中， 2～10℃避光保存，有效期 6个月。 4.10　氯化铵（优级纯）。 4.11　氨态氮标准溶液（ 32mg/100mL ）： 称取0.1005g氯化铵（ 4.10），用80mL蒸馏水溶解。用 2N的盐酸将 pH值调至2。用蒸馏水定 容到100mL。此溶液为 32mg/100mL 。测定前配制成 1mg/100mL 、2mg/100mL 、4mg/100mL 、 8mg/100mL 、16mg/100mL 和32mg/100mL 的标准溶液。 5　仪器和设备 5.1　分析天平：感量 0.0001g。 5.2　旋涡混合仪。 5.3　紫外分光光度计。 5.4　pH 计。 5.5　玻璃试管。 5.6　容量瓶： 50mL、100mL、1000mL。 5.7　刻度吸管： 5.00mL、10.0mL、20.0mL。 5.8　烧杯：500mL。 6　瘤胃液的采集、处理与保存 瘤胃液的采集在晨饲前进行，方法有两种，一种是通过瘤胃瘘管进行采集，另一种是采用 特定的胃管通过食道插入瘤胃进行采集。采集的瘤胃内容物，用 60目尼龙袋过滤，取滤液 5.00mL于离心管中（离心管中预先加入预冷的 5.00mL甲醇），迅速混匀，置于 -20℃冰柜中保 存。 7　测定步骤 7.1　试样制备：将瘤胃液充分混匀，准确吸取 1.00mL瘤胃液，加入离心管中， 4℃下 12000r/min 离心15min，取上清液备用。 7.2　平行试验：对同一试样进行平行试验测定。 7.3　空白试验：随同试样进行空白试验。除不量取样品外，均按瘤胃液样品步骤进行。 7.4　测定与显色：吸取备用液（ 7.1）80μL加入到玻璃试管中，加入 2.50mL苯酚显色剂，混 匀；加入 2.00mL碱性次氯酸钠溶液，混匀。在 37℃下水浴 10min，取出后室温下放置 10min。 于紫外分光光度计波长 650nm处，以试剂空白为参比，测量其吸光度。 7.5　标准曲线的绘制 准确移取氨态氮标准溶液 1mg/100mL 、2mg/100mL 、4mg/100mL 、8mg/100mL 、16mg/100mL 和 32mg/100mL 各40μL，加入到预先标好的玻璃试管中，各管补加 40μL 甲醇(4.2)，混匀；加入 2.5mL苯酚显色剂，混匀；加入 2.00mL碱性次氯酸钠溶液，混匀。在 37℃下水浴 10min，取出后 室温下放置 10min。于紫外分光光度计波长 650nm处，以试剂空白为参比，测量其吸光度。以氨 态氮浓度 (mg/100mL) 为横坐标，相应吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，建立线性拟合回归方 程。 全国团体标准信息平台 4 8　分析结果的计算 按式(1)计算试样中的氨态氮浓度 C，其数值用 mg/100mL 表示。 0 1 ) 100/( CC mL mgC  )1( 式中： C0—空白试验查得的氨态氮浓度，单位为 mg/100mL ； C1—标准曲线上查得的氨态氮浓度，单位为 mg/100mL 。 9　允许差 在重复性条件下，完成两个平行测定的结果的相对偏差不大于 5%。 _________________________________ 全国团体标准信息平台