ICS65.020.30 B43 团体标准 T/SDAA0052－2021 规模化鸡场鸡传染性喉气管炎防控 技术规程 Technicalcriterionforpreventionandcontrolofavianinfectious laryngotracheitisinlargescalechickenfarm 2021-12-6发布 2022-1-7实施 山东省畜牧协会发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SDAA0052－2021 全国团体标准信息平台 T/SDAA0052－2021 前言 本文件按照GB/T1/1-2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》 给出的规则起草。 本文件由山东畜牧业协会提出并归口。 本文件起草单位：山东省农业科学院家禽研究所、山东省动物疫病预防与控制中心。 本文件主要起草人：亓丽红、徐怀英、宋玲玲、吴家强、刘涛、兰邹然、王苗利、党 安坤、于可响、马秀丽、吕俊峰、房立春、秦卓明、王爱琴、黄兵、艾武、李玉峰。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/SDAA0052－2021 全国团体标准信息平台 T/SDAA0052－2021 规模化鸡场鸡传染性喉气管炎防控技术规程 1范围 本文件规定了规模化鸡场鸡传染性喉气管炎防控的饲养管理、生物安全、诊断、防治措 施及废弃物的无害化处理。 本文件适用于肉鸡、蛋鸡规模化养殖场。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB13078饲料卫生标准 GB18596畜禽养殖业污染物排放标准 NY/T33鸡饲养标准 NY/T556鸡传染性喉气管炎诊断技术 NY/T1168畜禽粪便无害化处理技术规范 NY/T3075畜禽养殖场消毒技术 NY5027无公害食品畜禽饮用水水质 NY/T5030无公害农产品兽药使用准则 NY5036无公害食品肉鸡饲养兽医防疫准则 NY/T5038无公害食品家禽养殖生产管理规范 NY5041无公害食品蛋鸡饲养兽医防疫准则 DB37/T4034规模化家禽养殖场消毒技术规范 《病死及病害动物无害化处理技术规范》农医发[2017]25号 世界动物卫生组织（OIE）陆生动物诊断试剂手册 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 全国团体标准信息平台 T/SDAA0052－2021 4饲养管理 4.1参照NY/T5038要求控制鸡舍的温湿度、光照和通风，依据品种、饲养方式、生长期调 整饲养密度。 4.2饲料应符合GB13078的要求。不同生长阶段的营养需求，参照NY/T33规定执行。 4.3饮水应符合NY5027的要求。 5生物安全 5.1应实行“全进全出”的饲养管理制度，不同日龄、批次和品种的鸡不宜混养。 5.2养殖场应参照NY/T3075的规定，建立完善的消毒制度并有效实施。消毒方法参照 DB37/T4034执行。 5.3养殖场应结合本场具体情况，做好杀虫、灭鼠和防止野鸟、野猫等野生动物进入场区等 工作。 6诊断 6.1临床诊断 6.1.1流行病学特征 主要感染成年鸡，育雏、育成鸡也可感染，潜伏期一般为2~6天，感染鸡发病率高达 90%~100%，病死率为5%~70%不等。 6.1.2临床症状 病鸡呼吸困难，呈犬坐式张口、伸颈呼吸，常因试图咳出气管中的阻塞物而发出咯咯声， 在鸡舍笼具上常可发现咳出的血凝块；也可表现为眼结膜炎、流泪，严重时出现干酪样渗出 物；产蛋鸡产蛋严重下降，通常需要一个月后才能恢复。 6.1.3病理变化 6.1.3.1剖检变化病鸡主要病变集中在上呼吸道，包括喉头和气管，表现为喉头气管黏膜充 血、出血，黏液分泌增多，受侵害的气管黏膜肿胀、水肿，并形成糜烂和出血。后期可在喉 头及气管出现干酪样渗出物，并可见假膜性炎症，甚至形成栓塞。 6.1.3.2病理组织学变化上皮细胞水肿，纤毛消失，黏膜下层细胞浸润，毛细血管出血，随 着疾病的发展，气管和喉部出现细胞浸润和黏膜变性。 6.2病原分离培养 对可疑鸡群进行传染性喉气管炎病毒的分离培养，样品处理、接种方法及培养条件等参 照世界动物卫生组织（OIE）陆生动物诊断试验和疫苗标准手册相关要求。 全国团体标准信息平台 T/SDAA0052－2021 6.3核酸检测 鸡传染性喉气管炎病毒聚合酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR）参见附录A。 6.4确诊 符合6.1中流行病学特征、临床症状和病理变化可判为鸡传染性喉气管炎疑似病例，结 合6.2中病原分离培养或6.3中核酸检测结果阳性结果，即可确诊。 7防制措施 7.1免疫接种 7.1.1免疫原则 对于发生过鸡传染性喉气管炎疫情的疫区鸡场或疫区内的健康鸡场，均应进行免疫接 种；从未发生过该病的非疫区鸡场，不提倡接种疫苗。 7.1.2推荐免疫程序 7.1.2.1种鸡场或蛋鸡场可参考推荐以下免疫程序：首免4~5周龄，选用组织源疫苗或鸡胚源 疫苗点眼免疫；二免12~14周龄，选用鸡胚源疫苗点眼或涂肛免疫。一般情况下，不能对4 周龄以下的雏鸡（对雏鸡可致病）和18周龄以上的鸡进行免疫接种（疫苗对开产前鸡有致病 性）。 7.1.2.2商品肉鸡场可参考推荐以下免疫程序：商品肉鸡一般不建议疫苗接种。当鸡场附近 暴发该病或本鸡场曾暴发该病且缺乏有效措施时，可采用基因重组疫苗或载体疫苗接种。 7.1.2.3规模养鸡场应根据本场特点和当地情况制定免疫程序，免疫日龄和剂量应严格按照 疫苗使用说明书进行操作。 7.1.3紧急预防 确诊鸡发生鸡传染性喉气管炎疫情时，应通过点眼或涂肛对健康鸡群进行传染性喉气管 炎活疫苗紧急接种。 7.2药物治疗 将发病鸡隔离饲养，参照NY5041和NY/T5030对发病鸡进行对症治疗。 8废弃物的无害化处理 8.1垫料、粪便、污水应按NY/T1168和GB18596规定无害化处理。 8.2病死鸡按照《病死及病害动物无害化处理技术规范》处理。 全国团体标准信息平台 T/SDAA0052－2021 附录A （资料性） 鸡传染性喉气管炎病毒检测PCR法 A.1试验原理 以传染性喉气管炎病毒的DNA为模板，用脱氧核糖核苷三磷酸为底物，针对TK基因 保守序列的引物与模板3'端结合，在Taq酶的作用下互补链不断延伸，多次反复的循环使得 微量的模板DNA获得极大程度的扩增，最终使得TK基因保守序列的数量呈指数增加。 A.2试剂或材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂。 A.2.1水：符合GB/T6682中一级水的要求。 B.2.2病毒DNA提取试剂盒。 B.2.3PCRTaq酶。 B.2.4DNAMarker2000。 B.2.5琼脂糖。 B.2.6阳性对照：传染性喉气管炎病毒K317株。 B.2.7阴性对照：SPF鸡胚尿囊液。 B.3仪器设备 B.3.1微量移液器：2μL、10μL、100μL、200μL、1000μL。 B.3.2电子天平：精度0.01mg。 B.3.3高速冷冻离心机：转速≥12000r/min。 B.3.4生物安全柜。 B.3.5PCR扩增仪。 B.3.6电泳仪。 B.3.7紫外透射反射分析仪。 B.4样品 按NY/T556要求无菌采集发病鸡的气管1g～2g，加入5倍体积生理盐水，用剪刀剪碎 后，置于研磨器中充分研磨，反复冻融2次～3次，8500rpm离心10min，取上清液200μL用 于DNA提取。 B.5试验步骤 B.5.1核酸提取 使用病毒DNA提取试剂盒，按照说明书步骤提取待检样品的DNA。病毒DNA提取成功 后置于-20℃保存，备用。 全国团体标准信息平台 T/SDAA0052－2021 B.5.2引物设计 依据传染性喉气管炎病毒的TK基因保守序列，设计引物，扩增目的基因片段长度约为 330bp。 上游引物P1：5'-ATGAATACTACCACCTACCTCC-3' 下游引物P2：5'-CGTCTCGGCAAACTCTAAAC-3' B.5.3反应体系 反应体系为50µL，配制见表1。 表1PCR反应体系配制 反应体系中各成分 每个样品反应组分用量/µL 2×EasyTaqPCRSuperMix(+dye) 25.0 20µmol/L引物P1 0.5 20µmol/L引物P2 0.5 DNA模板 2.0 ddH2O 22.0 总体积 50.0 B.5.4反应程序 采用以下反应程序进行扩增： 第一阶段：95℃3min； 第二阶段：95℃30s，55℃30s，72℃30s，共进行30个循环； 第三阶段：72℃5min。 B.5.5电泳 取PCR扩增产物6µL与10×上样缓冲液1µL混合，加入到1.5%的琼脂糖凝胶孔中，同时 在旁边点样孔中加入DNAMarker2000（分子量标准物）10µL，以5V/cm电压进行电泳25～ 30min，在紫外投射反射分析仪上观察结果。 B.6结果判定 阳性对照出现一条大小约330bp的特异性条带，而阴性对照无此条带，则试验成立。 待检样品在相应位置如出现与阳性对照同样大小的条带时（参见图1），可判为阳性； 待检样品未出现与阳性对照同样大小的条带时，则判为阴性。 全国团体标准信息平台