ICS 65.020.01 CCS A 017 T / NAIA 团 体 标 准 T/ NAIA 0319 -2024 枸杞中6种多酚类化合物的测定 高效液相色谱法 Determination of six polyphenolic compounds in Lycium barbarum ． —High performance liquid chromatography 2024-10-02发布 2024-10-20实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0319-2024 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由宁夏回族自治区药品检验研究院提出。 本文件由宁夏化学分析测试协会归口。 本文件起草单位：宁夏回族自治区药品检验研究院（国家枸杞产品质量检验检测中心 （宁夏））、宁夏回族自治区药品质量控制与评价重点实验室、 宁夏卫生健康职业技术学 院、中国科学院兰州化学物理研究所、宁夏医科大学。 本文件主要起草人：刘淑瑛、臧娅妮、尚博杨、马玲、陈欢、姜文霞、王曼泽、黄钰 馨、撖志明、孙莹、王宁、武亦融、马小荣、白长财、王宁丽、杨文静、马宗卫。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0319-2024 1枸杞中6种多酚类化合物的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了枸杞干果、鲜果及原浆 中1-咖啡酰奎宁酸、绿原酸、 4-香豆酸、芦丁、 山奈酚、水仙苷 的高效液相色谱测定方法 。 本文件适用于枸杞干果、鲜果及原浆中 上述 6种多酚类化合物单个或多个成分含量的 测定，其他枸杞制品中上述 6种多酚类化合物的测定也可以参考本方法。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日 期的引用文件 ，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包 括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的多酚类物质经乙醇溶液提取，用高效液相色谱仪测定，保留时间定性，外标 法定量。 5 试剂与材料 除另有说明 外，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂 ，水为 GB/T 6682规定的一级水 。 5.1 试剂 5.1.1 无水乙醇（ CH 3CH 2OH）。 5.1.2 甲醇（CH 3OH）：色谱纯。 5.1.3 乙腈（ C2H3N）：色谱纯。 5.1.4 冰醋酸（CH 3COOH）：色谱纯。 5.2 溶液配制 5.2.1 60%乙醇溶液（ 60+40，V/V）：取600 mL无水乙醇（ 5.1.1），加400 mL水，混匀 。 5.2.2 90%乙醇溶液（ 90+10，V/V）：取 900 mL无水乙醇（ 5.1.1），加 100 mL水，混匀 。 5.2.3 0.5%醋酸溶液： 取0.5 mL冰醋酸（ 5.1.4）以水定容 至100mL，混匀脱气。 5.3标准品 6种多酚类化合物标准品见附录 A表A.1。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0319-2024 25.4标准溶液配制 5.4.1 标准储备溶液 （1000 mg/L）：准确称取 1-咖啡酰奎宁酸 、绿原酸、4-香豆酸、芦丁、 山奈酚、 水仙苷标准品约 10 mg（精确至 0.1 mg），分别置于 10 mL容量瓶中， 用60%乙 醇溶液溶解（ 5.2.1）并定容至刻度，混匀， 避光 2~10℃条件保存， 有效期 3个月。 5.4.2 混合标准中间溶液（ 20 mg/L ~200 mg/L）：准确吸取 1-咖啡酰奎宁酸、绿原酸、 4- 香豆酸、芦丁、山奈酚、水仙苷标准储备溶液（ 5.4.1）0.5 mL、0.5 mL、0.5 mL、0.5 mL、 5 mL、0.5 mL，分别置 25 mL的容量瓶中， 用60%乙醇溶液（ 5.2.1）定容至刻度，混匀， 避光 2~10℃条件保存， 有效期 1个月。 5.4.3 标准使用溶液（ 0.1 mg/L~40.0 mg/L）：准确吸取一定量混合标准中间溶液（ 5.4.2）， 逐级用 60%乙醇溶液 （5.2.1）定量稀释为含 1-咖啡酰奎宁酸 、绿原酸、4-香豆酸、水仙苷及 山奈酚 0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L和芦丁 2.5 mg/L、4.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、40.0 mg/L的标准使用溶液 ，根据仪器性能和检测 需要选择不少于 5个浓度点，临用新制。 5.5微孔滤膜 0.45 μm，有机相。 6 仪器 6.1 高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器。 6.2 分析天平（ 感量 0.00001 g、感量 0.01 g）。 6.3 高速粉碎机。 6.4 组织捣碎机。 6.5 超声波清洗器（功率： 230 W，频率 40 kHz）。 7 试样制备与保存 取-18℃冷冻的枸杞干果，用高速粉碎机（可加少量的液氮）粉碎（ 30 g样品粉碎时间 为30 s），混匀后分别置于样品瓶中， -18℃冷冻备用。 取枸杞鲜果适量，去除果蒂、叶子等杂质，用组织捣碎机打浆， 2~10 ℃冷藏备用，用 前摇匀。 8 分析步骤 8.1 试样提取 取枸杞干果 粉末约 1.0 g（精确至 0.01 g），加25 mL 60%乙醇溶液（ 5.2.1），超声 20 min，摇匀， 用0.45 μm的滤膜（ 5.5）过滤，取续滤液上机测定。 取枸杞鲜果浆（枸杞原浆 ）约7.0 g（精确至 0.01 g），加25 mL 90%乙醇溶液（5.2.2）， 超声 20 min，摇匀， 用0.45 μm的滤膜（ 5.5）过滤，取续滤液上机测定。 8.2 液相色谱参考条件 a) 色谱柱： C18柱，长150 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 μm (pH=1~11) 或相当者。 b) 流动相 A：乙腈； 流动相 B：0.5%醋酸溶液（ 5.2.2）；梯度洗脱条件见表 1。 全国团体标准信息平台