Ｉ ＣＳ　 ６５． １２０ ＤＢ１３ Ｂ　４６ 河　　　　 北　　　　 省　　　　 地　　　　 方　　　　 标 准 ＤＢ１３／Ｔ　 １０９５－ ２００９ 饲料用酶制剂中 ａ一淀粉酶活力的测定 分光光度法 　　　 ２００９－０６－１７发布 ２００９－０７－０２实施 河 北 省 质 量 技 术 ． １ １ ／督 局 　　发 布 ＤＢ　 １　 ３／Ｔ　 １０９５－ ２００９ 前 吉 ．二刁 本标准由河北省畜牧兽医局提出。 本标准起草单位：河北省饲料产品质量监督检验站、河北农业大学、河北省畜牧站。 本标准主要起草人：武英利、王萍、赵国先、李海龙、霍韶瑜、李广东。 ＤＢ１３／Ｔ　 １０９５－ ２００９ 饲料用酶制剂中ａ一淀粉酶活力的测定 　　　　 — 分光光度法 　　　　　　　　　　 ， 范围 本标准规定了饲料用酶制剂中。 　　　　 一淀粉酶活力的单位定义和测定方法。 本标准适用于饲料用酶制剂中。一淀粉酶活力的测定。 　　　　 ６ ４ 规范性引用文件 下列文件通过本标准的引用而成为本标准的 　　　　 条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改 单 （ 不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 ＧＢ／ Ｔ　 ６ ６８ ２ －２ ００８ 分析实验室用水规格和试验方法 　　　　 ＱＢ／ Ｔ　 １ ８ ０ ３ －１ ９ ９３ 工业酶制剂通用试验方法 　　　　 ３ 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 　　　　 ３． １ ａ一淀粉酶活力单位 在６ ０９ Ｃ， 　 ｐ Ｈ＝６． ０的条件下，ｌｈ液化ｌｇ可溶性淀粉所需的酶的量，规定为一个酶活力单位。 ４ 原理 。一淀粉酶能将淀粉分子链中的 　　　　 ａ－１， 　 ４葡萄糖昔键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖 和葡萄糖，而使淀粉对碘呈蓝紫色的特异性反应逐渐消失 ，呈红棕色，其颜色消失的速度与酶活性有 关 故可通过固定反应后的吸光度计算其酶活力。 仪器和设备 ５． １ 分析天平，感量为０． ００ ０１９０ ５． ２ 研钵。 ５． ３ ５． ４ ５． ５ ５． ６ 容量瓶，５ ０　 ｍＬ， 　 １ ０ ０　 ｍＬｏ 电炉，温度可调。 恒温水浴锅，温控范围３ ０℃土 ０． １ ９ Ｃ＾－ ６ ０９ Ｃ１ ０． １ ℃ 烧杯，２ ５ ０　 ｍＬ， 　 ５ ０ ０　 ｍＬｏ ５． ７ 酸度计，精度０． ０１ 。 ５． ８ 秒表。 ５． ９ 离心机，６　 ００ ０　 ｒ ／ ｍｉ ｎ　（ ２ ４０ ０　 Ｘ　 ｇ） ５． １ ０ 移液器，精度 １ ０　 ＬＬｏ ５． １１ 分光光度计。 ５． １ ２ 比色管，２ ５　 ｍＬｏ ６ 试剂 ＤＢ１３／ Ｔ　 １０９５－ ２００９ 方法中所用试剂，除另有规定外均为分析纯试剂， 　　　　 所用水应符合ＧＢ／ Ｔ　 ６ ６ ８ ２－２ ００ ８三级以上用水 要求 。 ６． １ 碘。 ６． ２ 可溶性淀粉。 ６． ３ 磷酸氢二钠 （ Ｎａ ２ ＨＰＯ４ ． １ ２Ｈ２ ０） ｏ 　 ６． ４ 柠檬酸 （ Ｃ６ Ｈ８ ０７ ＂ 　 Ｈ２ 　 Ｏ） ｏ 　 ７ 溶液 ７． １ 浓碘液 称取碘 １ 　　　　 １ 　 ｇ、碘化钾２２　 ｇ，用少量水使完全溶解，然后用水定容至５ ０ ０　 ｍＬ，贮存于棕色瓶中。 ７． ２ 工作用碘液 吸取浓碘液２ 　　　　 ． ０ ０　 ｍＬ，加碘化钾２ ０　 ｇ，用水溶解并定容至５０ ０　 ｍＬ，贮存于棕色瓶中，现用现配。 ７． ３ 可溶性淀粉溶液，浓度２０叭 称取１ ０５ ℃土２ ℃干燥至恒重的可溶性淀粉２ 　　　　 ． ０ ０ ０　 ｇ（ 精确至０ ． ００１ 　 ｇ），用少量水调成稀糊状，在搅动 状态下缓缓加入７ ０　 ｍＬ沸水，继续煮沸至溶液透明，冷却，转移并定容至 １ ０ ０　 ｍＬ，此液现用现配。 ７． ４ 磷酸缓冲溶液，ｐ Ｈ６． ０ 称取磷酸氢二钠４ ５ ． ２ ３ 　 ｇ 　　　　 、柠檬酸８ ． ０ ７　 ｇ ，用水溶解定容至１ 　 ０ ０ ０　 ｍＬ，调ｐ Ｈ６ ． ０ ８ 试样的选取和制备 选取具有代表性的试样用四分法缩减至２ 　　　　 ０ ０　 ｇ，粉碎至０ ． ２ ５　 ｍｍ，装人密封容器中，备用。 ９ 分析步骤 ９． １ 待测酶液的制备 ９． １． １ 称取试样 １ ＇ 　２ｇ（ 精确至０ ． ００ ０　 ２　 ｇ ）置研钵中，加少量磷酸缓冲溶液湿润，研磨３分钟，加１ ５　 ｍＬ 磷酸缓冲溶液，混匀，静置，将上层清液倾人１ ００　 ｍＬ容量瓶中。 ９． １． ２ 沉渣部分继续研磨３分钟，加１ ０　 ｍＬ磷酸缓冲溶液，混匀，静置，将上层清液倾人容量瓶中。 ９． １． ３ 重复９． １ ． ２操作至少３次，将试样全部转移至容量瓶中，用磷酸缓冲溶液定容至刻度，摇匀。 ９ ． １ ． ４ 量取９ ． １ ． ３混悬溶液２ ０　 ｍＬ， 　 ６　 ０ ０ ０　 ｒ ／ ｍｉ ｎ　 （ ２ ４ ０ ０　 Ｘ　 ｇ ）离心１ ０　 ｍｉ ｎ，吸取上清液适量，用磷酸缓 冲液稀释至酶活力 ３． ７　 Ｕ／ ｍＬ－５ ． ６　 Ｕ／ ｍＬ供试验用。 ９． ２ 测定 ９． ２． １ 准确量取淀粉溶液２ ０． ０ ０　 ｍＬ置于２ ５　 ｍＬ比色管中，准确加入磷酸缓冲溶液５． ００　 ｍＬ，于温度 ６ ０｀ ｊ Ｃ、振摇速度 １ ００ ／ 分钟的水浴摇床中预热 １ ０　 ｍｉ ｎｄ ９． ２． ２ 准确量取预先在温度 ６ ０ Ｃ Ｃ、振摇速度 １ ０ ０ ／ 分钟的水浴摇床中预热 １ ０　 ｍｉ ｎ的稀释酶液 （ ９． １ ． ４） １ ． ０ ０　 ｍＬ加人 ９ ． ２． １比色管中，置温度６ ０９ ０、振摇速度 １ ０ ０ ／ 分钟的水浴摇床中反应 ５　 ｍｉ ｎ（ 准确计时） 。 ９． ２． ３ 反应结束后立即准确量取反应液 （ ９． ２ ． ２） 　１ ． ０ ０　 ｍＬ加人装有　 ５ ． ００　 ｍＬ工作用碘液的２ ５　 ｍＬ比色 管中，摇匀，作为样品测试溶液。 ９． ２． ４ 以工作用碘液为空白对照，在“Ｏ　 ｎ ｍ波长处测定样品测试溶液的吸光度，根据测得的试样吸 光度在ＱＢ／ Ｔ　 １ ８ ０３ －９ ３附录Ａ中查出对应的酶液浓度。 ９． ３ 结果计算与表述 ９． ３． １ 结果计算 ａ一淀粉酶活力按 　　　　 （ １ ）式进行计算： Ｘ 二 Ｃ　 ｘ　 Ｖ （１） ＤＢ１３／Ｔ　 １０９５－ ２００９ 式中 ： 　　　　 Ｘ‘一一酶活力， 　　　　Ｕ／ ｇｏ Ｇ一一 从表中查 出的试样溶液 　　　　的酶活力 ，Ｕ／ ｍＬ； Ｖ— 试样稀释总体积，ｍＬ； Ｍ— 试样质量，ｇ０ 　　　　 　　　　 ９． ３． ２ 结果表述 每个样品应取 　　　　 ２份平行样进行测定，以其算术平均值为分析结果，结果保留整数。 １０ 重复性 两平行测定结果的允许相对偏差不大于 　　　　 ３ ． ０％．