ICS 67.250 A 43 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 1495—2012 化妆品中 20 种邻苯二甲酸酯物质 含量的测定 Cosmetics in 20 Phthalate esters Determination 2012 - 01 - 16 发布 河北省质量技术监督局 2012 - 01 - 30 实施 发 布 DB13/T 1495—2012 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则进行起草。 本标准由河北省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、国家环保产品质量监督检验中心。 本标准第3章主要起草人：张敬轩、范斌、蔡立鹏、何淑娟、张冬生、杨岚、康素芬、赵树凯、张 玉霞。 本标准第4章主要起草人：张岩、马晓斐、夏静、杨忠辉、张斌、秦丽、王洪涛、刘金鹏、崔晓斌。 I DB13/T 1495—2012 化妆品中 20 种邻苯二甲酸酯物质 含量的测定 1 范围 本标准规定了化妆品中20种邻苯二甲酸酯物质含量的气相色谱-质谱联用法和液相色谱-串联质谱 法的检测方法。 本标准适用于爽肤水、指甲油、香水、洗面奶、卸妆水、乳液、面膜等化妆品中20种邻苯二甲酸酯 的含量的测定。 本标准气相色谱-质谱联用法检出限为5 mg/kg；液相色谱-串联质谱法检出限为2 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（ISO 3696:1987，MOD） 3 气相色谱-质谱联用法 3.1 原理 液体样品加入甲醇进行超声溶解、提取，高速离心；膏状及乳状样品用环己烷提取，提取液氮吹干 后，用甲醇溶解，高速离心，上清液过有机滤膜，进行气相色谱-质谱分析，外标法定量。 3.2 试剂与材料 除另有规定，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 3.2.1 甲醇：色谱纯。 3.2.2 无水硫酸钠。 3.2.3 环己烷：色谱纯。 3.2.4 邻苯二甲酸酯标准品：20 种邻苯二甲酸酯的分子式、CAS 登记号参见资料性附录 A。 3.2.5 邻苯二甲酸酯标准储备溶液：分别准确称取附录 A 中每种邻苯二甲酸酯的标准品（4.4），用甲 醇分别配制成 1.0 mg/mL 的标准储备液。标准储备液保存于 4℃冰箱中。 3.2.6 邻苯二甲酸酯标准使用液：将标准储备液用甲醇稀释至浓度为 0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/L 的标 准系列溶液待用。混合标准工作溶液保存于 4℃冰箱中。 3.3 仪器与设备 1 DB13/T 1495—2012 3.3.1 气相色谱-质谱联用仪：带有电子轰击离子源（EI）。 3.3.2 高速冷冻离心机：转速不低于 15 000r/min。 3.3.3 分析天平：感量 0.1 mg、1mg。 3.3.4 氮气浓缩仪。 3.3.5 涡旋混匀器。 3.3.6 玻璃器皿：所有玻璃器皿洗净后，用重蒸水淋洗三次，丙酮浸泡 1 小时，在 200℃下烘烤 2 小 时，冷却至室温备用。 3.4 分析步骤 3.4.1 提取 3.4.1.1 爽肤水、香水等溶液状样品：称取约 1.0 g 样品（精确至 1 mg）于 50 mL 玻璃离心管中，加 入 20mL 甲醇，超声提取 30 min，转移至 50 ml 容量瓶中，用甲醇洗涤，洗涤液转入容量瓶中，用甲醇 定容，混匀。将上清液 10ml 转入 100ml 小烧杯中，加 5g 无水硫酸钠脱水。取上清液过 0.45 μm 滤膜， 待分析。 3.4.1.2 指甲油、洗面奶、乳液等膏状、乳状样品：称取约 1.0g 样品（精确至 1 mg）于 50 mL 玻璃 离心管中，加入 30mL 环己烷超声提取 30 min，上清液转入 50 ml 容量瓶中，残渣用 10 ml 环己烷重复 提取，提取液转入容量瓶中，用环己烷定容，摇匀。取上清液 10 ml 与 50ml 玻璃烧杯中，加 5 g 无水 硫酸钠脱水，提取液 15000 r/min 离心 10min，取上清液 5.0mL，氮气吹干，残渣用 5.0mL 甲醇定容， 进行 GC-MS 分析。 3.4.2 仪器参考条件 3.4.2.1 a) b) c) d) e) f) g) h) i) j) k) l) m) 3.4.3 3.4.3.1 2 色谱参考条件： 色谱柱：5%苯基甲基聚硅氧烷，熔融石英毛细管柱 30m×0.32mm×0.25μm，或相当者； 升温程序：初始柱温 50℃，保持 1min，以 15℃/min 升至 180℃，保持 4min，再以 10℃/min 升至 280℃，保持 7min； 进样口温度：280℃； 色谱与质谱接口温度：280℃； 离子源温度：230℃； 载气：高纯氦气：纯度不小于 99.999%； 流速：1.5mL/min； 进样量：1.0μL； 进样方式：不分流进样； 监测方式：选择离子模式（SIM），监测离子参见附录 A； 电离能量：70ev； 溶剂延迟：6min； 各化合物定性、定量离子参见规范性附录 B。 仪器测定 定性测定 DB13/T 1495—2012 每种被测组分选择3个碎片离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合标准溶液 中对应的保留时间偏差在2.5％之内，且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液 中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表1规定的范围，则可判定为样品中存在对应的 待测物。 表1 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差（%） 相对离子丰度 ＞50 ＞20～50 ＞10～20 ≤10 允许的最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 3.4.3.2 定量测定 在仪器最佳工作条件下，混合标准工作液与试样交替进样，采用与测试样品浓度接近的单点标准溶 液外标法定量。 标准溶液中被测组分峰面积为纵坐标，相应被测组分浓度为横坐标绘制工作曲线，用工作曲线对样 品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。 3.4.3.3 空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 3.4.4 结果计算 按下列公式计算： Xi= C × V ×1000 × f ……………………………………… (1) m ×1000 式中： Xi—试样中每种邻苯二甲酸酯的含量，mg/kg； Ci—上机样液中每种邻苯二甲酸酯的含量，μg/mL； V—定容体积，mL； f—稀释倍数； m—样品质量，g。 本方法检出限为5.0mg/kg。 3.5 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 4 液相色谱-串联质谱法 4.1 原理 液体样品加入甲醇进行超声提取；膏状及乳状样品用环己烷溶解提取，氮吹干后，用甲醇进行溶解； 提取液过有机滤膜，进行液相色谱-串联质谱分析，外标法定量。 4.2 试剂与材料 3 DB13/T 1495—2012 除另有规定，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.2.1 邻苯二甲酸酯标准品：同 4.4 条款。 4.2.2 甲醇：色谱纯。 4.2.3 乙腈：色谱纯。 4.2.4 环己烷：色谱纯。 4.2.5 邻苯二甲酸酯标准储备溶液：分别准确称取附录 A 中每种邻苯二甲酸酯的标准品（4.4），用甲 醇分别配制成 1.0 mg/mL 的标准储备液。标准储备液保存于 4℃冰箱中。 4.2.6 邻苯二甲酸酯标准使用液：将标准储备液用甲醇稀释至浓度为 0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/L 的标 准系列溶液待用。混合标准工作溶液保存于 4℃冰箱中。 4.3 仪器与设备 4.3.1 高效液相色谱三重四级杆质谱联用仪：带有电喷雾电离源（ESI）。 4.3.2 高速冷冻离心机：转速不低于 15 000r/min。 4.3.3 分析天平：感量 0.1 mg、1 mg。 4.3.4 氮气浓缩仪。 4.3.5 涡旋混匀器。 4.3.6 玻璃器皿：所有玻璃器皿洗净后，用重蒸水淋洗三次，丙酮浸泡 1 小时，在 200℃下烘烤 2 小 时，冷却至室温备用。 4.4 分析步骤 4.4.1 提取 4.4.1.1 液体样品：称取约 1.0g 样品（精确至 1 mg）于 50 mL 玻璃离心管中，加入 20mL 甲醇，超声 提取 30 min，提取液转移至 50ml 容量瓶中，用甲醇定容，混匀。将上清液在 15 000r/min 下离心 5min。 取上清液进行 LC-MS/MS 分析。 4.4.1.2 膏状、乳状样品：称取 1.0g 样品（精确至 0.1 mg）于 50 mL 玻璃离心管中，用 40 ml 环己 烷分两次超声提取 30 min。提取液转移至 50 ml 容量瓶中，用环己烷定容。取上清液 5mL，氮气吹干， 残渣用 5mL 甲醇溶解，15000 r/min 下离心 10 min，进行 LC-MS/MS 分析。 4.4.2 4.4.2.1 a) b) c) d) e) 4 仪器参考条件 色谱参考条件： 色谱柱：ODS-C18（150mm×2.1mm,3.5μm）,或相当者； 流动相梯度洗脱程序，见表 2； 柱温：30℃； 流速：0.3mL/min； 进样量：10μL。 DB13/T 1495—2012 表2 时间/min 4.4.2.2 a) b) c) d) e) f) 4.4.3 4.4.3.1 梯度洗脱程序流动相梯度洗脱条件 0.1%甲酸溶液/(%) 乙腈/(%) 0.0 60.0 40.0 40.0 0 100.0 60.0 0 100.0 质谱参考条件： 电离方式：电喷雾电离，正离子； 干燥气温度：350℃； 干燥气流速：10L/min； 碰撞气：高纯氮气； 扫描模式：MRM； 各化合物定性、定量离子见规范性附录 B。 仪器测定 定性测定 每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与 混合标准溶液中对应的保留时间偏差在2.5％之内，且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接 近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品 中存在对应的待测物。 表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差（%） 相对离子丰度 ＞50 ＞20～50 ＞10～20 ≤10 允许的最大偏差 ±20