ICS 65.020.30 B 43 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB13/T 2442—2017 蛋种鸡场禽白血病的净化技术规程 2017 - 03 - 29 发布 河北省质量技术监督局 2017 - 06 - 01 实施 发 布 DB13/T 2442—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北科技师范学院提出。 本标准由河北科技师范学院动物科技学院起草。 本标准主要起草人：张香斋、李蕴玉、李佩国、贾青辉、张文香、申红莲、张艳英、张召兴、常 超越、闫艳娟。 I DB13/T 2442—2017 蛋种鸡场禽白血病的净化技术规程 1 范围 本标准规定了蛋种鸡场禽白血病净化的术语和定义、净化方法与程序、饲养管理、种鸡场建设和 净化标准。 本标准适用于蛋种鸡场禽白血病的净化。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 13078 饲料卫生标准 GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 NY/T 388 畜禽场环境质量标准 NY/T 1167 畜禽场环境质量及卫生控制规范 NY/T 1168 畜禽粪便无害化处理技术规范 NY 5027 无公害食品 畜禽饮用水水质 NY/T 5038 无公害食品 家禽养殖生产管理规范 NY/T 5339 无公害食品 畜禽饲养兽医防疫准则 DB13/T 990 鸡场消毒技术规范 《中华人民共和国动物防疫法》 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 禽白血病 由反转录病毒科的禽白血病病毒(Avian leukosis virus，ALV)引起的禽类多种肿瘤性传染病。 注：主要包括淋巴细胞性白血病、成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病、骨髓细胞瘤等。 3.2 ALV－p 27抗原 禽白血病病毒所有亚群共有的核衣壳蛋白，氨基酸序列比较保守，是ALV的主要特异性抗原。 3.3 酶联免疫吸附试验（ELISA） 一种用酶标记抗原或抗体的方法，将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机 地结合起来的一种新型的免疫测定技术，可敏感地检测体液中微量的特异性抗原或抗体。 3.4 1 DB13/T 2442—2017 DF-1细胞系（DF-1） 来源于East Lansing Line（ELL-0）鸡胚胎，是鸡胚成纤维细胞的可传代细胞系。 注：该细胞系缺少禽白血病病毒、肉瘤病毒群病毒相关的内源片段，并具有正常的成纤维形态。DF-1细胞支持禽 反转录病毒的复制，是一种自发的、无肿瘤基因的、稳定的、无限增殖的细胞系。 3.5 净化 为达到消灭和清除传染源的目的，在某一限定地区或养殖场内采取的一系列措施。 4 净化方法与程序 4.1 原种鸡场核心群禽白血病的净化 4.1.1 1 日龄雏鸡胎粪检测 出壳前，将每只种鸡的种蛋置于同一出壳袋中。出壳后，逐只采集1日龄雏鸡胎粪，采用ELISA的 方法检测ALV-p27抗原。每采集完同一只母鸡的雏鸡胎粪后，更换一次手套。同一只母鸡所产雏鸡中， 只要有一只阳性就淘汰同袋中的其他雏鸡，同时淘汰相应种母鸡。 4.1.2 6～10 周龄育成鸡检测 6～10周龄按育种规程选择出后备鸡，逐只采集血浆，接种DF-1细胞分离病毒，培养9 d后用ELISA 的方法逐孔检测ALV-p27抗原，淘汰阳性鸡。同一饲养笼中鸡只，只要有一只阳性就淘汰同笼中的所有 鸡。 4.1.3 18～20 周龄开产初期检测 取母鸡初生蛋3个，分离蛋清，公鸡采集精液或泄殖腔棉拭子，分别用ELISA方法检测ALV-p27抗原， 淘汰阳性鸡。 4.1.4 留种继代前(43～55 周龄)检测 取2～3个种蛋，对蛋清做ALV-p27抗原检测，公鸡可采集精液检测ALV-p27抗原，淘汰阳性鸡。逐 只采集血液，分离血清，ELISA检测A/B、J抗体，淘汰阳性鸡；同时采集抗凝血，分离血浆，接种DF-1 细胞分离病毒，培养9 d后用ELISA方法逐孔检测ALV-p27抗原，淘汰阳性鸡，然后组建家系，收集种蛋 入孵。 4.1.5 第 2～5 世代鸡的检测与淘汰 对经上述检测组建家系后的种鸡，收集种蛋入孵，出壳的雏鸡，作为净化后第二世代鸡，按4.1.1、 4.1.2、4.1.3、4.1.4的要求进行第2～5世代种鸡ALV-p27的检测和净化，直至达到净化标准。 4.2 祖代或父母代种鸡群禽白血病的净化 4.2.1 选择净化的种源，加强引种检疫 引进种鸡时，应要求对方出具禽白血病净化证明和其他相关的检疫合格证或按照NY/T 5339的要求 进行。 4.2.2 严格隔离制度 2 DB13/T 2442—2017 种鸡引入后至少隔离饲养60 d，并经病原学检测确认为阴性，同时按照本场免疫程序进行常规免 疫后方可调入鸡场。 4.2.3 定期检测 祖代和父母代鸡场连续三次抽检，抽检比例为1%左右，每次检测间隔2个月。如果病原学检测阳性 率超过净化标准，应按原种鸡场核心群禽白血病的净化方法与程序进行净化，直至达到净化标准。 5 种鸡场建设要求 5.1 种鸡场的场址选择、布局与卫生设施应符合 NY/T 5038 的要求。 5.2 场区的空气环境质量应符合 NY/T 388 的要求。 5.3 场区的土壤环境质量应符合 NY/T 1167 的要求。 6 饲养管理 6.1 优化饲养方式 6.1.1 实行全进全出的饲养方式。 6.1.2 对于原种鸡场，在育雏和育成鸡执行单家系饲养管理，产蛋鸡采取单笼饲养，执行终身跟踪制 度。 6.2 出雏管理 按照1只母鸡后代的全同胞进行装袋落盘。出雏执行严格隔离，品系之间、家系之间不交叉。 6.3 饲料质量 饲料品质应符合GB 13078 的要求。 6.4 饮水质量 饮用水水质应符合NY 5027的要求。 6.5 卫生消毒 6.5.1 消毒剂的选择应符合《中华人民共和国兽药典》的规定，选择广谱、高效、杀菌作用强、刺激 性低、对人和鸡安全的产品。消毒剂应定期轮换使用，以提高杀菌效力。 6.5.2 场区环境、人员、用具、鸡舍及种蛋的消毒按 DB13/T 990 的要求进行。 6.5.3 每天对孵化室进行清扫，并喷雾消毒，保持清洁。 6.5.4 入孵前，对孵化器、入孵盘进行清洗、喷雾消毒，再按每立方米 38 %甲醛溶液 14 ml、高锰酸 钾 7 g、水 7 ml 的比例熏蒸 30 min。 6.5.5 落盘后，出雏器内按每立方米 38 %甲醛溶液 20 ml～30 ml，自然挥发，直至出雏结束。 3 DB13/T 2442—2017 6.5.6 出雏后，清除出雏器中的污物、死胚、死雏、蛋壳，并对出雏器、出雏盘进行清洗和喷雾消毒， 再按每立方米 38 %甲醛溶液 42 ml、高锰酸钾 21 g、水 21 ml 的比例熏蒸 30 min。 6.6 免疫接种 免疫接种应符合《中华人民共和国动物防疫法》的要求，根据本地区和本场疫病流行情况，制定 合理的免疫接种计划，选择适宜的疫苗和免疫方法，并做好记录。 6.7 无害化处理 对病死鸡、蛋壳和鸡粪等和孵化场内的废弃物应按GB 16548和NY/T 1168的要求进行无害化处理。 6.8 杀虫、灭鼠 定期开展杀灭蚊虫、苍蝇和老鼠等工作，消灭传播媒介和传染源。 7 净化标准 7.1 病原学检测 原种场全部为阴性，祖代场和父母代场阳性率低于1 %。 7.2 血清学检测 A/B、J 抗体检测，原种场全部为阴性，祖代场和父母代场阳性率低于1 %。 8 净化状态的维持 种鸡场达到禽白血病净化状态或通过评估后，可开展维持性监测。 4 DB13/T 2442—2017 附 录 A （资料性附录） 相关技术 A.1 ALV 病毒分离 采集抗凝血置于灭菌离心管中，1500 r/min离心3 min，取100 μ L血浆接种24孔细胞板处于对数 生长期的DF-1细胞，37 ℃、5 % CO2培养箱作用2 h后，用灭菌PBS润洗一遍，加入含1 %胎牛血清的DMEM 维持培养7 d～9 d，收集细胞上清进行ALV-p27抗原检测。 A.2 ELISA 检测 采集的胎粪、泄殖腔棉拭子、蛋清上清等样品，经过几次反复冻融后，按照ELISA检测试剂盒操作 说明进行ALV-p27抗原检测；无菌采集血液，分离血清，按照ELISA检测试剂盒操作说明进行ALV A/B、 J抗体检测，操作过程详见试剂盒说明书。 _________________________________ 5