ICS 67.050 X 04 备案号：56341-2017 吉 林 DB22 省 地 方 标 准 DB 22/T 2640—2017 淀粉中顺丁烯二酸及顺丁烯二酸酐的测定 高效液相色谱法 Determination of maleic acid and maleic anhydride in starch——HPLC method 2017 - 06 - 12 发布 吉林省质量技术监督局 2017 - 08 - 12 实施 发 布 DB22/T 2640—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2015给出的规则起草。 本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。 本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心。 本标准主要起草人：康明芹、杨璐、宋翱、田芳洁、曹海微、邢燕燕。 I DB22/T 2640—2017 淀粉中顺丁烯二酸及顺丁烯二酸酐的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了淀粉中顺丁烯二酸及顺丁烯二酸酐的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于玉米淀粉、马铃薯淀粉、绿豆淀粉中顺丁烯二酸及顺丁烯二酸酐的测定，顺丁烯二酸 酐以顺丁烯二酸计。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测 3 原理 样品用乙醇-水溶液超声提取，高效液相色谱法测定，内标法定量。 4 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1 水（H2O）：GB/T 6682，一级。 4.2 无水乙醇(C2H6O)。 4.3 顺丁烯二酸（C4H4O4）标准物质：CAS 号 110-16-7，纯度≥98%。 4.4 2-甲基顺丁烯二酸（C5H6O4）：CAS 号 498-23-7，纯度≥98%。 4.5 磷酸（H3PO4）。 4.6 0.1%磷酸：称取 1.00 mL 磷酸，用 1 000 mL 水稀释并定容，超声后过膜。 4.7 10 %乙醇：取 10 mL 无水乙醇（4.2），用水稀释并定容至 1 000 mL。 4.8 顺丁烯二酸标准储备液：200.0 mg/L。准确称取适量顺丁烯二酸标准物质（4.3）用无水乙醇（4.2） 溶解并全部转移至 50 mL 容量瓶中，用无水乙醇（4.2）定容至刻度，混匀，0 ℃~4 ℃避光保存。 4.9 2-甲基顺丁烯二酸标准储备液（内标）： 200.0 mg/L。准确称取适量 2-甲基顺丁烯二酸标准物 质（4.4）用无水乙醇（4.2）溶解并全部转移至 50 mL 容量瓶中，用无水乙醇（4.2）定容至刻度，混 匀，0 ℃~4 ℃避光保存。 4.10 标准工作液：准确吸取顺丁烯二酸标准储备液（4.8）适量，分别准确吸取 2-甲基顺丁烯二酸标 准储备液（4.9）适量，用 10 % 乙醇（4.6）依次配制成顺丁烯二酸浓度分别为 2.5、5.0、10.0、25.0、 50.0 mg/L，2-甲基顺丁烯二酸均为 10.0 mg/L 的标准溶液。 4.11 滤膜：0.22 µm，有机相。 1 DB22/T 2640—2017 5 仪器 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 6 高效液相色谱仪：紫外检测器。 高速离心机：≥10 000 r/min。 天平：感量 0.0001 g 和 0.01 g。 超声波清洗器。 具塞离心管：聚丙烯或聚四氟乙烯，50 mL。 涡旋混合器。 样品 应按照GB/T 27404-2008 附录 E 的规定对样品进行制备，装入干净的容器内混匀备用。 注：在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或待测物发生含量的变化。 7 试验步骤 7.1 提取 称取5 g样品（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入0.5 mL 内标液（4.8），再加入9.5 mL 10% 乙醇（4.6）， 涡旋混合2 min，超声30 min，10 000 r/min离心5 min，取1mL上清液过膜，待上机。 7.2 空白试验 除不称取试样外，均按7.1进行。 7.3 测定 7.3.1 色谱参考条件 色谱参考条件如下： a) 色谱柱：T3，2.1 mm×150 mm，3.5 μm； b) 柱温：40 ℃； c) 流速：0.25 mL/min； d) 进样量：2 μL； e) 流动相：0.1 %磷酸溶液（4.6）； f) 波长：208 nm。 7.3.2 标准工作曲线 样品按照7.3.1测定条件对标准工作液（4.10）进行测定，以标准工作溶液中顺丁烯二酸浓度为横 坐标，以顺丁烯二酸和内标物2-甲基顺丁烯二酸峰面积比值为纵坐标绘制标准工作曲线。 7.3.3 7.3.3.1 2 定性分析和定量测定 定性分析 DB22/T 2640—2017 样品按照7.1的步骤处理完毕后进样。如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与顺丁烯二酸标准 溶液色谱峰的保留时间一致，则可判定样品中存在该物质。顺丁烯二酸和2-甲基顺丁烯二酸的参考保留 时间分别为4.6 min和11.3 min，谱图参见附录A 。 7.3.3.2 定量测定 样品按照7.1的步骤处理完毕后进样，做两份样品的平行测定。样品中顺丁烯二酸含量根据标准工 作曲线进行定量计算。同时做空白试验。 8 试验数据处理 按式（1）计算样品中顺丁烯二酸含量，计算结果扣除空白： X  (c  c 0 )  V .................................... (1) m 式中： X——样品中被测组分残留量，单位为毫克每千克 (mg/kg)； c ——从标准曲线读出的被测组分溶液浓度，单位为毫克每升（mg/L）； c0 ——空白溶液浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V ——最终定容体积，单位为毫升 (mL)； m ——样液所代表的最终试样的质量，单位为克 (g)。 计算结果表示到小数点后一位。 9 定量限与检出限、回收率和精密度 9.1 定量限与检出限 本标准方法顺丁烯二酸定量限为5.0 mg/kg，检出限为2.0 mg/kg。 9.2 回收率及精密度 9.2.1 回收率 样品中顺丁烯二酸的添加浓度及其回收率、精密度实验数据参见 附录B。 9.2.2 9.2.2.1 9.2.2 精密度 重复性 在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相 互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%，以大于 这两个测定值的算术平均值的95%的情况不超过5%为前提。 9.2.2.2 再现性 3 DB22/T 2640—2017 在不同的实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被测对象相互独立 进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的20%，以大于这两个 测定值的算术平均值的95%的情况不超过5%为前提。 10 试验报告 试验报告至少应给出以下几个方面的内容： ——试验对象； ——所使用的标准（包括发布或出版年号）； ——所使用的方法（如果标准中包括几个方法）； ——结果； ——观察到的异常现象； ——试验日期。 4 DB22/T 2640—2017 AA 附 录 A （资料性附录） 顺丁烯二酸液相色谱图 顺丁烯二酸液相色谱图见图A.1。 图A.1 顺丁烯二酸和 2-甲基顺丁烯二酸标准溶液色谱图 (10.0 g/mL) 5 DB22/T 2640—2017 BB 附 录 B （资料性附录） 不同添加水平回收率和精密度（n=10） 不同添加水平回收率和精密度（n=10）见表B.1。 表B.1 不同添加水平回收率和精密度 添加浓度 回收率范围 相对标准偏差 mg/kg % % 5.0 90.0～100.0 3.3 10.0 92.0～102.0 2.8 50.0 89.6～98.4 2.7 5.0 90.0～98.0 3.5 10.0 88.0～97.0 2.9 50.0 91.6～101.0 3.5 5.0 90.0～102.0 4.7 10.0 95.0～103.0 2.5 50.0 93.8～100.4 2.2 样品名称 玉米淀粉 马铃薯淀粉 绿豆淀粉 ─────────── 6