ICS 65.020 B 05 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 2800—2017 玉米大斑病菌对杀菌剂抗药性评价技术规 范 Technical specification for resistance evaluation of Exserohilum turcicum tofungicides 2017 - 12 - 11 发布 吉林省质量技术监督局 2018 - 04 - 01 实施 发 布 DB22/T 2800—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由吉林省农业委员会提出并归口。 本标准起草单位：吉林大学。 本标准主要起草人：张祥辉、王岩、潘洪玉、张艳华、刘金亮、杨正宇、司乃国、许矛。 I DB22/T 2800—2017 玉米大斑病菌对杀菌剂抗药性评价技术规范 1 范围 本标准规定了玉米大斑病菌对杀菌剂敏感性测定、敏感基线建立、抗药性评价和待测菌株抗性水平 评估。 本标准适用于玉米大斑病菌对吡唑醚菌酯、咪鲜胺和嘧菌酯抗药性评价。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 玉米大斑病菌 fungus of Northern corn leaf blight 凸脐蠕孢菌（Exserohilum turcicum）。 2.2 杀菌剂抗药性 resistance to fungicide 对农药敏感的野生型植物病原物个体或群体，由于遗传变异而对药剂出现敏感性下降的现象。 2.3 有效中浓度 effective concentration (EC50 ) 抑制50%病菌菌丝生长或孢子萌发时的杀菌剂浓度。 2.4 菌丝生长抑制率 inhibitory rate of mycelium growth 杀菌剂对靶标生物菌落生长抑制效率。 3 3.1 杀菌剂敏感性测定 测定方法 3.1.1 供试菌株 在未施用过吡唑醚菌酯、咪鲜胺和嘧菌酯类杀菌剂的地区，采集病样，通过单孢分离纯化获得至少 50 株玉米大斑病菌株，保存在 PDA 培养基中，置于4 ℃冰箱，备用。 3.1.2 供试药剂 3.1.2.1 吡唑醚菌酯标准品（98.5%）、咪鲜胺标准品（98%）、啶菌恶唑标准品（95%），三种杀菌剂 标准品均用分析纯丙酮进行溶解。 3.1.2.2 PDA 培养基（见附录 A）。 3.1.2.3 无菌水。 3.1.3 杀菌剂药液配制 1 DB22/T 2800—2017 将杀菌剂标准品用相应的溶剂溶解，并用无菌水稀释，加入到PDA培养基中，制成含有系列质量浓 度的 PDA 培养基，培养基中溶剂含量应低于0.1%。 3.1.4 生长速率法测定 将培养好的玉米大斑病菌，用直径为 5 mm 灭菌打孔器打成菌饼，置于含有杀菌剂的 PDA 培养基 平板中，每个培养皿中一个菌饼，另设不含药剂的 PDA 培养基与只含等量溶剂 PDA 培养基为对照，于 25 ℃恒温培养箱中培养 7 d，重复3 次。采用十字交叉法测量各处理的菌落直径。 3.2 计算方法 按公式（1）、（2）计算药剂对菌丝的生长抑制率，采用最小二乘法建立毒力回归方程，计算相关 系数和药剂的有效中浓度（EC50），按照附录B.1记录试验结果。 D  D1  D2 ...................................... (1) 式中： D ——菌落增长直径 D1 ——菌落直径 D2 ——菌饼直径 I D0  D1  100 ................................... (2) D0 式中： I ——菌落生长抑制率 D0 ——空白对照菌落增长直径 D1 ——药剂处理菌落增长直径 4 敏感基线的建立 利用供试菌株的 EC50 值制作敏感性频率分布图，确定是否符合正态性分布。若符合正态分布，供 试菌株的EC50 平均值作为玉米大斑病对杀菌剂的敏感基线；若不符合正态分布，出现双峰情况，证明供 试菌株中已出现抗性菌株，应剔除，重新建立敏感基线。 5 抗药性评价 建立待测菌株对杀菌剂的抗药性判定标准。 2 DB22/T 2800—2017 表1 待测菌株抗药性水平判定标准 抗性指数 RF（供试菌株EC50值/敏感基线的EC50值） 抗性菌株 抗性水平 吡唑醚菌酯 吡唑醚菌酯 咪鲜胺 啶菌恶唑 敏感菌株 ≤5 ≤5 ≤5 S 低抗菌株 5＜RF≤10 5＜RF≤10 5＜RF≤10 LR 中抗菌株 10＜RF≤40 10 ＜RF≤100 10＜RF≤40 MR 高抗菌株 ＞40 >100 ＞40 HR 注1：S——敏感; 注2：LR——抵抗; 注3：MR——中抗; 注4：HR——高抗。 6 待测菌株抗性水平评估 根据待测菌株的EC50值，计算抗药性比值，评价待测菌株的抗药性水平。同时调查菌株采集地的病 害防治的药剂施用历史（见附录B.2）。 3 DB22/T 2800—2017 AA 附 录 A （资料性附录） PDA 培养基配方 PDA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂18 g，水1 L。 4 DB22/T 2800—2017 BB 附 录 B （资料性附录） 玉米大斑病菌对杀菌剂的敏感性与抗药性测定调查要求 B.1 玉米大斑病菌对杀菌剂的敏感性测定调查 玉米大斑病菌对杀菌剂的敏感性测定调查见表B.1。 表B.1 菌 CK 株 菌落直径 玉米大斑病菌对杀菌剂的敏感性测定调查表 菌落直径 （mm）/抑制率（%） 浓度 1 浓度 2 浓度 3 浓度 4 线性相 试验记录人： B.2 EC50 关方程 浓度 5 调查日期： 年 相关系数 月 日 玉米大斑病菌对杀菌剂的抗药性测定调查 玉米大斑病菌对杀菌剂的抗药性测定调查见表B.2。 表B.2 菌株 玉米大斑病菌对杀菌剂的抗药性测定调查表 来源地点 是否使用过杀菌剂及历史 鉴别剂量效应（生长抑制率%） 调查日期： 记录人： 年 月 日 _________________________________ 5