ICS 71.100.70 Y 42 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3302—2018 化妆品 5 种苯并噁唑类荧光增白剂含量的 测定 高效液相色谱串联质谱法 Determination of five benzoxazole fluorescent brighteners in cosmetics HPLC LC/MS/MS method 文稿版次选择 2018 - 12 - 29 发布 安徽省市场监督管理局 2019 - 01 - 29 实施 发 布 DB34/T 3302—2018 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。 本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院、安徽国泰众信检测技术有限公司、铜陵市农业 委员会、安徽省环境监测中心站、上海海关动植物与食品检验检疫技术中心。 本标准主要起草人：丁磊、王苏宁、赵彬、周晓莹、陈洪周、宋伟、吕亚宁、周典兵、韩芳、胡艳 云、盛旋、郑平、张付海、邓晓军。 I DB34/T 3302—2018 化妆品 5 种苯并噁唑类荧光增白剂含量的测定 高效液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中荧光增白剂 135（FWA135）、荧光增白剂 185（FWA185）、荧光增白剂 367 （FWA367）、荧光增白剂 393（FWA393）、荧光增白剂 184（FWA184）等 5 种荧光增白剂的高效液相 色谱串联质谱法。 本标准适用于膏霜类化妆品中 5 种苯并噁唑类荧光增白剂含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 样品中荧光增白剂类物质，用亚铁氰化钾和醋酸锌溶液沉淀大分子基质，乙酸乙酯提取,经固相萃 取柱净化，用液相色谱串联质谱法测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 甲酸：色谱纯。 4.3 乙酸乙酯。 4.4 10％亚铁氰化钾溶液：称量 115 g K4Fe(CN)6·3H2O 固体，用水溶解定容至 1 L。 4.5 20％乙酸锌溶液：称量 239 g C4H6O4Zn·2H2O 固体，用水溶解定容至 1 L。 4.6 20％乙腈溶液（20％，体积分数）：准确量取 200 mL 乙腈和 800 mL 纯水于 1 L 容量瓶中混匀。 4.7 标准物质：荧光增白剂 135（FWA135）、荧光增白剂 185（FWA185）、荧光增白剂 367（FWA367）、 荧光增白剂 393（FWA393）、荧光增白剂 184（FWA184）标准品，纯度均大于 95％。 4.8 标准储备溶液：分别称取适量（精确至 10 mg）5 种荧光增白剂标准物质于 10 mL 容量瓶中，用 三氯甲烷配制成浓度为 1000 mg/L 的标准储备溶液。在 0℃～4℃冰箱中可以保存 2 个月。 4.9 标准工作液：将 5 种荧光增白剂标准储备液用阴性基质溶液稀释至浓度分别为 5.0、10.0、20.0、 50.0、100.0 µg/L 的工作液待用。 4.10 C18 固相萃取柱或相当者：200 mg，3 mL。 4.11 0.22 μm 有机滤膜。 1 DB34/T 3302—2018 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 6 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。 离心机：转速 ≥8000 r/min。 氮吹浓缩仪。 涡旋混合器。 超声波清洗器。 固相萃取装置。 分析步骤 6.1 提取 称取 0.5 g（精确至 0.01 g）样品于 15 mL 具塞离心管中，准确加入 5 mL 乙酸乙酯（4.3）， 充分涡旋提取 3 mim，再分别加入亚铁氰化钾（4.4）和乙酸锌（4.5）各 1.0 mL，室温下超声 10 min， 8000 r/min 离心 5 min，吸取上层清液于另一 15 mL 具塞离心管，下层溶液用 5 mL 乙酸乙酯（4.3） 重复提取步骤合并提取液，于 45℃水浴中氮吹至干，用 5 mL 20 mL 10％乙腈（4.6）溶解，待进行固 相萃取小柱净化。 6.2 净化 C18 固相萃取柱（4.13）依次用 5 mL 乙腈、5 mL 水进行活化，将待净化液（6.1）全部转移至已 活化的固相萃取柱，用 20 mL 10％乙腈（4.6）淋洗，弃去全部流出液，减压抽干 5 min，最后用 9 mL 乙腈（4.1）进行洗脱，将收集的洗脱液于 45℃水浴中氮吹至干，准确加入 1 mL 初始流动相溶解残渣， 经 0.22 μm 有机滤膜（4.11）过滤供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7 测定 7.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下： a) 色谱柱：C18 50 mm×2.1 mm，1.8 μm，或相当者； b) 柱温箱温度：40℃； c) 进样量：10μL； d) 流动相梯度及流速见表 1。 表1 2 液相色谱梯度洗脱条件 时间 流速 0.1％甲酸水溶液 甲醇 /(min) /（mL/min） /(％) /(％) 0.00 0.3 40 60 1.00 0.3 40 60 2.00 0.3 10 90 7.00 0.3 10 90 DB34/T 3302—2018 表 1（续） 7.2 时间 流速 0.1％甲酸水溶液 甲醇 /(min) /（mL/min） /(％) /(％) 7.01 0.3 40 60 9.00 0.3 40 60 质谱条件 质谱条件如下： a) 离子源：电喷雾离子源（ESI）； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测（MRM）； d) 其他参考质谱条件参见附录 A 中表 A.1。 7.3 标准曲线的绘制 取空白样品按照 6.1 和 6.2 处理，用所得的样品溶液将荧光增白剂标准储备液（4.10）逐级稀释 得到的浓度为 5.0、10.0、20.0、50.0、100.0 µg/L 的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以定量 子离子峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。 7.4 定量测定及定性判定 按照液相色谱串联质谱条件测定样品和基质标准工作溶液。基质标准工作液和待测液中待测物的响 应值应在仪器线性响应范围内。若响应值超出线性范围，应用空白基质样液将其稀释至线性范围内进行 定量测定。测定结果按公式（1）计算样品中待测物的含量。 按照上诉条件测定试样和标准工作溶液，如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致 （变化范围 ±2.5％之内）；样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰 度一致，相对丰度偏差不超过表2 的规定，则可定性判定该目标物，磺酰脲类除草剂总离子色谱图参见 附录B中图B.1。 表2 定性离子相对丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50％ ＞20％至50％ ＞10％至 20％ ≤10％ 允许的相对偏差 ±20％ ±25％ ±30％ ±50％ 7.5 空白试验 除不加试样外，按上述分析步骤进行。 7.6 平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验。 8 结果计算和表述 按公式（1）计算试样中残留的含量，计算结果需扣除空白值。 Xi  Ai  ci  V  F .................................. (1) Asi  m 3 DB34/T 3302—2018 式中： Xi ——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）； ci ——标准溶液中被测组分的浓度，单位为微克每升（μg/L）； Ai ——测定液中被测组分的峰面积； Asi ——标准液中被测组分的峰面积； V ——样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）； F ——稀释倍数； m ——试样的质量，单位为克（g）。 9 定量限 本标准中荧光增白剂 135（FWA135）、荧光增白剂 185（FWA185）、荧光增白剂 367（FWA367）、 荧光增白剂 393（FWA393）、荧光增白剂 184（FWA184）为 5.0 μg/kg。 10 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20％。 4 DB34/T 3302—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 参考质谱条件 参考质谱条件： a) 干燥器温度：350℃； b) 干燥器流速：10 L/min； c) 鞘气温度：350℃； d) 鞘气流速：12 L/min； e) 毛细管电压：3500 V； f) 碰撞气：高纯氮气。 g) 其他质谱参数见表 A.1。 表A.1 5 种荧光增白剂英文名称、CAS 号、参考保留时间、监测离子对和碰撞能量 名称 英文缩写 CAS号 荧光增白剂135 FWA135 1041-00-5 保留时间 监测离子对 碰撞能量 /mim （m/z） /eV 2.158 291.1/158 35 ※ 291.1/107 30 ※ 荧光增白剂185 FWA185 12224-41-8 2.679 319.1/225.8 35 319.1/199.9 40 ※ 荧光增白剂367 FWA367 5089-22-5 3.708 363.1/269.9 35 ※ 40 363.1/244 ※ 荧光增白剂184 FWA184 7128-64-5 4.186 431.1/415.1 50 431.1/399.1 71 ※ 荧光增白剂393 注： ※ FWA393 1533-45-5 5.779 415.1/399.1 45 415.1/385.1 45 为定量离子对，对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。 5 DB34/T 3302—2018 BB 附 录 B （资料性附录） 5 种荧光增白剂总离子色谱图 1.0x105 6.0x104 TIC离 子 强 度 （ cps） 8.0x104 4.0x104 2.0x104 0.0 1 2 3 4 5 6 7