ICS 13.080 B 10 山 DB37 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3474—2018 土壤中 12 种有机磷农药及代谢物残留量的 测定液相色谱-质谱/质谱法 Determination of 12 organophosphorous pesticides and metabolites residues in soil Liquid chromatography - mass spectrometry 2018 - 12 - 29 发布 山东省市场监督管理局 2019 - 01 - 29 实施 发 布 DB37/T 3474—2018 前  言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山东省农业农村厅提出并监督实施。 本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省农药检定所。 本标准主要起草人：周力、韩帅兵、张耀中、李向阳、姜士聚、吴亚玉、迟归兵、鞠易明、杨扬、 林得平、于淼。 I DB37/T 3474—2018 土壤中 12 种有机磷农药及代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质 谱法 1 范围 本标准规定了土壤中12种有机磷农药及代谢物残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。 本标准适用于土壤中甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧乐果、噻唑磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亚砜、三 唑磷、二嗪磷、辛硫磷、丙溴磷、毒死蜱残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 土壤样品中残留的有机磷农药及代谢物经乙腈提取，盐析离心，分散固相萃取净化，用液相色谱质谱/质谱仪检测，外标法定量。 4 试剂与材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 4.1.2 4.1.3 4.1.4 4.1.5 甲醇（CH3OH，65-56-1）：色谱纯。 乙腈（CH3CN，75-05-8）：色谱纯。 甲酸（HCOOH，64-18-6）：色谱纯。 乙酸铵（CH3COONH4，631-61-8）：色谱纯。 氯化钠（NaCl，7647-14-5）。 4.2 溶液配制 0.02 %甲酸水溶液（含5 mmol/L乙酸铵）：准确移取0.2 mL甲酸和称取0.385 g乙酸铵于1000  mL 容量瓶中，用水定容至刻度，现配现用。 4.3 标准品 12种有机磷农药及代谢物标准物质，纯度≥95 %。 4.4 标准溶液配制 1 DB37/T 3474—2018 4.4.1 标准储备溶液 分别准确称取适量（精确至0.1 mg）12种有机磷农药及代谢物标准品于10 mL容量瓶中，用甲醇溶 解并定容至刻度，配制成浓度约为100 mg/L的标准储备溶液，0～4 ℃保存，保存期为6个月。 4.4.2 中间标准溶液 准确吸取适量标准储备溶液（4.4.1），用甲醇稀释配制成10 mg/L的中间标准溶液，0～4 ℃保存， 保存期为1个月。 4.4.3 混合标准工作溶液 准确吸取适量中间标准溶液（4.4.2），用甲醇稀释配制成所需浓度的混合标准工作溶液，现配现 用。 4.5 材料 4.5.1 有机滤膜：0.22 μm。 1) 4.5.2 分散固相萃取净化管（Dispersive SPE 15 mL，Rruits and Veg，EN )。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9 5.10 5.11 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 分析天平：精度 0.01 g 和 0.0001 g。 回旋式振荡器。 离心机：最大转速为 6000 r/min。 旋转蒸发仪。 旋涡混合器。 真空泵。 具塞离心管：100 mL。 量筒：50 mL。 鸡心瓶：25 mL。 刻度离心管：10 mL。 6 试样制备 取土壤样品约500 g，除去土壤中的碎石、杂草和植物根茎等杂物后，过1 mm试验筛，均分成三份 作为试样，分装至洁净的容器内，密封并做好标识，于-18 ℃以下冷冻保存。在试样制备过程中，应防 止样品污染或发生残留物含量的变化。 7 分析步骤 7.1 提取 1) Dispersive SPE 15 mL，Fruits and Veg，EN 净化管为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方 便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 2 DB37/T 3474—2018 称取10 g试样（精确至0.01 g），置于100 mL离心管中，加入5 mL水，再准确加入20.0 mL乙腈， 在回旋式振荡器上震摇30 min。加入3 g～5 g NaCl，再剧烈震荡30 s，在离心机中以4500 r/min离心5 min，待净化。 7.2 净化 移取约7 mL上层提取液至分散固相萃取净化管（4.5.2）中，在旋涡混合器上涡旋1 min，在离心机 中以4500 r/min离心3 min。准确移取4.00 mL上层清液至鸡心瓶中，于40 ℃水浴减压浓缩至干，用甲 醇定容到1.0 mL，经0.22 μm滤膜过滤，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱-质谱/质谱参考条件 7.3.1.1 色谱柱：Shim-pack XR-ODS Ⅲ 2.0 mm（i.d）×75 mm，1.6 μm，或相当者。 7.3.1.2 流动相及梯度洗脱条件见表 1。 表 1 流动相及梯度洗脱条件 时间/min 流速/（mL/min） 流动相 A（甲醇）/% 流动相 B（0.02 %甲酸+5 mmol/L 乙酸铵水溶液）/% 0.00 0.35 10 90 0.50 0.35 10 90 2.00 0.35 60 40 5.00 0.35 60 40 9.00 0.35 95 5 11.50 0.35 95 5 12.00 0.35 10 90 7.3.1.3 7.3.1.4 7.3.1.5 7.3.1.6 柱温：40 ℃。 进样量：0.5 μL。 质谱仪参数：参见附录 A。 监测离子对、碰撞电压：参见附录 B。 7.3.2 定性测定 在相同实验条件下，试样中被测物的色谱峰保留时间与标准工作液相同，并且在扣除背景后的试样 谱图中，所选择的离子对均出现，各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比，偏差不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。 表 2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50 % >20 %至50 % >10 %至20 % ≤10 % 允许的相对偏差 ±20 % ±25 % ±30 % ±50 % 7.3.3 定量测定 本标准中液相色谱-质谱/质谱采用外标法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，本方法采用空 白样品溶液配制基质混合标准工作溶液，并且应保证所测样品中农药及代谢物的响应值均在仪器的线性 范围以内。对混合基质标准溶液和样液等体积参插进样测定。12 种有机磷农药及代谢物多反应监测 3 DB37/T 3474—2018 （MRM）色谱图参见附录 C。 7.4 平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验。 7.5 空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 8 结果计算 液相色谱-质谱/质谱测定结果可由计算机按外标法自动计算，也可按式(1)计算：  V1  AX  V3  V5   S .................................................................... (1) V2  AS  V4  m 式中： ω——试样中每种被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； ρS——标准溶液质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V1——提取溶液总体积，单位为毫升（mL）； V2——净化后吸取出用于浓缩的提取溶液体积，单位为毫升（mL）； V3——样品定容体积，单位为毫升（mL）； V4——待测液进样体积，单位为微升（μL）； V5——标准溶液进样体积，单位为微升（μL）； AS——标准溶液的峰面积； AX——待测液的峰面积； m——试样质量，单位为克（g）； 注：计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。 9 精密度 9.1 在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差不大于重复性限（r），重复性限（r）的数据按照 附录 D。 9.2 在再现性条件下，两次独立测定结果的绝对差不大于再现性限（R），再现性限（R）的数据按照 附录 E。 10 定量限和回收率 10.1 定量限 本方法中12种有机磷农药及代谢物在土壤中定量限均为0.001 mg/kg。 10.2 回收率 本方法的添加水平和回收率范围见附录F。 4 DB37/T 3474—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 2) 质谱仪参数 液相色谱-质谱/质谱仪的质谱仪参数： a) 扫描方式：正离子扫描； b) 检测方式：多反应监测； c) 离子源：电喷雾离子源（ESI）； d) 电离电压：4.0 kV； e) 加热块温度：400 ℃； f) DL 管温度：250 ℃； g) 检测器电压：1.74 kV； h) 碰撞气：氩气； i) 碰撞气压力：0.23 Mpa； j) 雾化气流速：3.0 L/min； k) 干燥气流速：10.0 L/min； l) 加热气流速：10.0 L/min。 2) 非商业性声明：所列参数是在岛津 LCMS-8050 液相色谱串联质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为 了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。 5 DB37/T 3474—2018 BB 附 录 B （资料性附录） 12 种有机磷农药及其代谢物中英文名称、监测离子对、碰撞电压和保留时间 碰撞电压 碰撞电压 序号 中文名 英文名 保留时间 /min 定量离子对 1 甲胺磷 Methamidophos 1.19 142.10>94.00 -14 142.10>125.10 -18 2 乙酰甲胺磷 Acephate 1.73 184.00>143.00 -10 184.00>125.00 -17 3 氧乐果 Omethoate 1.96 214.10>155.00 -15 214.10>183.00 -11