ICS  65.100 B 25 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3102—2018 饲料中磺酰脲类除草剂的测定 液相色谱串联质谱法 Determination of sulfonylurea herbicides residues in feeds method HPLC LC/MS/MS 文稿版次选择 2018 - 04 - 16 发布 安徽省质量技术监督局 2018 - 05 - 16 实施 发 布 DB34/T 3102—2018 前    言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省食品药品检验研究院（国家农副加工食品质量监督检验中心）提出。 本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省食品药品检验研究院（国家农副加工食品质量监督检验中心）、安徽省检 验检疫科学技术研究院、上海出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：丁磊、程浩、周晓莹、余晓娟、王欣、宋伟、吕亚宁、周典兵、韩芳、胡艳云、 罗纪军、邓晓军、盛旋、郑平。 I DB34/T 3102—2018 饲料中磺酰脲类除草剂的测定 液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了饲料中烟嘧磺隆、甲酰胺磺隆、环氧嘧磺隆、甲基噻吩磺隆、甲磺隆、醚磺隆、醚苯 磺隆、氯磺隆、胺苯磺隆、四唑嘧磺隆、甲磺胺磺隆、三氟啶磺隆、丙苯磺隆、氟磺隆、吡啶磺隆、氯 嘧磺隆、乙氧嘧磺隆、氟胺磺隆、甲基氟嘧磺隆、环丙嘧磺隆等 20 种磺酰脲类除草剂残留量的液相色 谱串联质谱法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料中烟嘧磺隆等 20 种磺酰脲类除草剂的检 测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 方法原理 样品中磺酰脲类除草剂经丙酮提取，采用凝胶渗透色谱仪净化，液相色谱串联质谱法测定，外标法 定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水应符合 GB/Ｔ6682 规定的一级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 丙酮：色谱纯。 4.3 甲酸：色谱纯。 4.4 环己烷：色谱纯。 4.5 乙酸乙酯：色谱纯。 4.6 氯化钠：分析纯。 4.7 乙酸乙酯-环己烷（1：1，体积比）：等体积的乙酸乙酯和环己烷互溶。 4.8 标准物质：烟嘧磺隆、甲酰胺磺隆、环氧嘧磺隆、甲基噻吩磺隆、甲磺隆、醚磺隆、醚苯磺隆、 氯磺隆、胺苯磺隆、四唑嘧磺隆、甲磺胺磺隆、三氟啶磺隆、丙苯磺隆、氟磺隆、吡啶磺隆、氯嘧磺隆、 乙氧嘧磺隆、氟胺磺隆、甲基氟嘧磺隆和环丙嘧磺隆纯度 ≥95％。 4.9 标准储备溶液 ——分别称取 10 mg（精确至 0.1 mg）标准物质（4.8）于 10 mL 容量瓶中，用乙腈（4.1）溶解并 定容，配制成浓度为 1000 mg/L 的标准储备溶液。 1 DB34/T 3102—2018 ——在 0℃～4℃冰箱中可以保存 12 个月。 4.10 0.22 μm 有机滤膜。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9 6 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。 凝胶渗透色谱仪。 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。 匀浆机。 离心机。 氮吹浓缩仪。 涡旋混合器。 超声波清洗器。 超纯水系统。 试样制备与保存 按照 GB/T 14699.1 的规定执行，取有代表性的样品，四分法缩减取约 200 g，经粉碎，混匀装入 磨口瓶中备用。 7 分析步骤 7.1 提取 称取 5 g（精确至 0.01 g）样品于 50 mL 离心管中，先加入 10 mL 水，静置 2 h，涡旋振荡后 加入 20 mL 丙酮，10000 r/min 均质提取 1 min，加入 10 g 氯化钠，涡旋 1 min 后，8000 r/min 离 心 5 min，吸取丙酮层于 100 mL 旋蒸瓶中，用 10 mL 丙酮重复提取一次，合并两次提取液，于 45℃ 水浴下旋转蒸发干，用 10 mL 乙酸乙酯-环己烷（4.7）溶解残渣待净化。 7.2 净化 7.2.1 凝胶色谱条件 凝胶色谱条件如下： a) 净化柱：S-X3 Bio-Beads 填料，粒度 38 μm～75 μm，300 mm×25 mm（内径），或相当者； b) 流动相：乙酸乙酯-环己烷（4.7），流速 5 mL/min； c) 进样量：5 mL； d) 净化程序：0 min～19 min 弃去淋洗液，19 min～27 min 收集淋洗液。 7.2.2 净化过程 5 mL 乙酸乙酯-环己烷（4.7）溶解液进凝胶色谱系统，按照 7.2.1 的条件净化。将收集的洗脱液 于 45℃水浴中浓缩至干，准确加入 2 mL 初始流动相溶解残渣，经 0.22 μm 有机滤膜（4.10）过滤供 液相色谱-质谱/质谱仪测定。 8 测定 2 DB34/T 3102—2018 8.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下： a) 色谱柱：C18 100 mm×2.1 mm，1.8 μm，或相当者； b) 柱温箱温度：40℃； c) 进样量：10 μL； d) 流动相梯度及流速见表 1。 表1 8.2 液相色谱梯度洗脱条件 时间 流速 0.1％甲酸水溶液 乙腈 /(min) /（mL/min） /(％) /(％) 0.00 0.3 95 5 2.00 0.3 95 5 5.00 0.3 90 10 7.00 0.3 70 30 12.00 0.3 60 40 14.00 0.3 40 60 16.00 0.3 10 90 18.00 0.3 10 90 18.01 0.3 95 5 20.00 0.3 95 5 质谱条件 质谱条件如下： a) 离子源：电喷雾离子源（ESI）； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测（MRM）； d) 其他参考质谱条件参见附录 A 中表 A.1。 8.3 标准曲线的绘制 取空白样品按照 7.1 和 7.2 处理，用所得的样品溶液将磺酰脲类标准储备溶液（4.9）逐级稀释 得到的浓度为 1.0 μg/L、2.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L、50.0 μg/L 的基质标准工作液，浓度由 低到高进样检测，以定量子离子峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。 8.4 定量测定及定性判定 按照液相色谱串联质谱条件测定样品和基质标准工作溶液。基质标准工作液和待测液中待测物的响 应值应在仪器线性响应范围内。若响应值超出线性范围，应用空白基质样液将其稀释至线性范围内进行 定量测定。 按照上述条件测定试样和基质标准工作溶液，如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一 致（变化范围 ±2.5％之内）；样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对 丰度一致，相对丰度偏差不超过表2 的规定，则可定性判定该目标物，磺酰脲类除草剂总离子色谱图见 附录B 中图B.1 。 3 DB34/T 3102—2018 表2 定性离子相对丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50％ ＞20％～50％ ＞10％～20％ ≤10％ 允许的相对偏差 ±20％ ±25％ ±30％ ±50％ 8.5 空白试验 除不加试样外，按上述分析步骤进行。 8.6 平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验。 9 结果计算和表述 按公式（1）计算试样中残留的含量，计算结果需扣除空白值。 Xi  Ai  ci  V  F .................................. (1) Asi  m 式中： Xi —— 试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）； ci —— 标准溶液中被测组分的浓度，单位为微克每升（μg/L）； Ai —— 测定液中被测组分的峰面积； Asi —— 标准液中被测组分的峰面积； V —— 样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）； F —— 稀释倍数； m —— 试样的质量，单位为克（g）。 10 定量限 本标准中醚苯磺隆、氯磺隆、四唑嘧磺隆、三氟啶磺隆、甲基氟嘧磺隆、丙苯磺隆定量限为 1.0 μg/kg, 烟嘧磺隆、甲酰胺磺隆、环氧嘧磺隆、甲基噻吩磺隆、甲磺隆、醚磺隆、胺苯磺隆、甲磺胺磺隆、氟磺 隆、吡啶磺隆、氯嘧磺隆、乙氧嘧磺隆、氟胺磺隆、环丙嘧磺隆定量限为 0.5 μg/kg。 11 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20％。 4 DB34/T 3102—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 参考质谱条件 参考质谱条件： a) 干燥器温度：350℃； b) 干燥器流速：8 L/min； c) 鞘气温度：350℃； d) 鞘气流速：12 L/min； e) 毛细管电压：3500 V； f) 碰撞气：高纯氮气； g) 其他质谱参数见表 A.1。 表A.1 20 种磺酰脲类除草剂英文名称、CAS 号、参考保留时间、监测离子对和碰撞能量 保留时间 监测离子对 碰撞能量 /mim （m/z） /eV 名称 英文名称 CAS号 烟嘧磺隆 Nicosulfuron CA15515000 9.604 甲酰胺磺隆 Foramsulfuron C13905000 10.104 环氧嘧磺隆 Oxasulfuron 144651-06-9 10.394 甲基噻吩磺隆 Thifensulfuron-methyl 79277-27-3 10.566 411.2/213.1 ※ 411.2/182.1 15 453.2/272.1 5 ※ 453.2/182.0 20 407.1/284.0 10 ※ 15 ※ 388.1/167.1 10 388.1/141.2 15 407.1/150.1 ※ 甲磺隆 Metsulfuron-methyl 74223-64-6 11.013 382.1/167.1 10 382.1/141.2 15 ※ 醚磺隆 Cinosulfuron 94593-91-6 11.051 醚苯磺隆 Triasulfuron 82097-50-5 11.598 氯磺隆 Chlorsulfur