(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111295412.9 (22)申请日 2021.11.03 (71)申请人 江苏护理职业学院 地址 223003 江苏省淮安市清 浦区科技路9 号 (72)发明人 陶娟　韩永红　张艳军　陈桂娟　 刘家秀　 (74)专利代理 机构 北京中政联科专利代理事务 所(普通合伙) 11489 代理人 谢恺 (51)Int.Cl. A61K 47/62(2017.01) A61K 47/68(2017.01) A61K 9/14(2006.01) A61K 31/704(2006.01)A61K 41/00(2020.01) A61K 47/02(2006.01) A61P 15/14(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 转铁蛋白与抗体结合超顺磁性氧化铁纳米 粒及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明属于医药领域， 具体涉及一种转铁蛋 白与抗体结合超顺磁性氧化铁纳米粒及其制备 方法和应用。 所述纳米粒为转铁蛋白和抗粘蛋 白‑1修饰的超顺磁性氧化铁纳米粒(Tf ‑anti‑ MUC1‑SPIONs)； 尤其是将裸SPIONs上的羧基用1 ‑ 乙基‑3， 3‑二甲氨基丙基碳二亚胺盐酸盐(EDC) 和磺基‑N‑羟基丁二酰亚胺(磺基 ‑NHS)活化后， 再进行转铁蛋白(Tf)和抗粘蛋白 ‑1(anti‑MUC1) 偶联。 本发明发现双修饰SPIONs可以有效地将 DOX导入癌细胞， 并通过主动靶向机制呈现出显 著的抗MDA ‑MB‑231细胞毒性。 这些双靶向粒子， 同步靶向乳腺癌细胞， 是人类乳腺癌治疗的有希 望的候选方案 。 权利要求书1页 说明书9页 附图4页 CN 113975403 A 2022.01.28 CN 113975403 A 1.一种转铁蛋白与抗体结合超顺磁性氧化铁纳米粒， 其特征在于， 所述纳米粒为转铁 蛋白和抗粘蛋白 ‑1修饰的超顺磁性氧化铁纳米粒(Tf ‑anti‑MUC1‑SPIONs)。 2.根据权利要求1所述的超顺磁性氧化铁纳米粒， 其特征在于， 所述Tf ‑anti‑MUC1‑ SPIONs是将裸SPIONs上的羧基用1 ‑乙基‑3， 3‑二甲氨基丙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和磺基 ‑ N‑羟基丁二酰亚胺(磺基 ‑NHS)活化后， 再进行转铁蛋白(Tf)和抗粘 蛋白‑1(anti‑MUC1)偶 联。 3.根据权利要求2所述的超顺磁性氧化铁纳米粒， 其特征在于， 所述裸SPIONs、 转铁蛋 白(Tf)和抗粘蛋白 ‑1(anti‑MUC1)的质量比为(7～9)∶(2～6)∶1； 更进一步的， 所述质量比 为8 ∶(3～4)∶ 1； 最优选为8 ∶ 4∶ 1。 4.根据权利要求1所述的超顺磁性氧化铁纳米粒， 其特征在于， 所述Tf ‑anti‑MUC1‑ SPIONs的粒径为50～150nm， Zeta电位为 ‑20～‑40mV； 更进一步的， 所述粒径为110nm， 所述 Zeta电位 为‑32mV。 5.根据权利要求1所述的超顺磁性氧化铁纳米粒， 其特征在于， 所述Tf ‑anti‑MUC1‑ SPIONs负载阿霉素， 所述阿霉素与所述Tf ‑anti‑MUC1‑SPIONs的质量比为2 2 ∶ 1。 6.包含权利要求1所述的超顺磁性氧化铁纳米粒的组合物， 其特征在于， 所述组合物包 含所述Tf ‑anti‑MUC1‑SPIONs和药 学上允许的载体。 7.根据权利要求1 ‑5任一所述的超顺磁性氧化铁纳米粒的制备方法， 其特征在于， 包括 如下步骤： (1)用EDC和磺基 ‑NHS活化裸SPIONs； (2)加入转铁蛋白(Tf)和抗粘蛋白 ‑1(anti‑MUC1)充分 混合反应即可。 8.根据权利要求7所述的制备方法， 其特征在于， 所述制备方法还包括步骤(3)离心去 除多余的Tf和抗MUC1， 然后将纳米粒 再悬浮后储 存过夜。 9.根据权利要求7或8所述的制备 方法， 其特 征在于， 所述制备 方法为： (1)将1mL的SPIONs(0.55nmol/mL)超声分散在2mL  pH＝6的MES缓冲液中， 添加4μmol、 191.7g/mo l的EDC HCl； (2)向(1)获得的溶液 中添加10.0 μmol、 217.13g/mol的磺基NHS， 并充分混合， 封口膜封 好； (3)将(2)获得的溶 液反应在室温下摇床培 养10分钟 ‑15分钟； (4)11000rpm， 离心15分钟， 以去除过量未反应的EDC和NHS； (5)去掉上清液， 将活化后的S PIONs超声分散在2mL的pH＝7.2的PBS缓冲液中； (6)将0.5mL的转铁蛋白Tf和0.1mL的anti ‑MUC1加入到 活化的SPIONs中， 快速超声分散 30s， 室温下摇床2h ‑2.5h， 之后离心洗涤以去除多余的Tf和anti ‑MUC1， 然后将偶连后的 SPIONs再悬浮在无菌的PBS中； 最后， 将产品储 存在4℃过夜即得； 任选地， 所述裸SPIONs的浓度为0.55nmol/mL； 所述转铁蛋白的浓度为1mg/mL； 所述 anti‑MUC1的浓度为1.2mg/mL； 任选地， 所述 转铁蛋白的分子量MW 为80000Da； 所述anti ‑MUC1的分子量MW 为260000Da。 10.根据权利要求1 ‑5任一所述的超顺磁性氧化铁纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用， 优选在制备具备肿瘤诊断和治疗双重功能的药物中的应用； 更优选在制备具有乳腺癌诊断 和治疗双重功能的药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113975403 A 2转铁蛋白与抗体结 合超顺磁性氧化铁纳米粒 及其制备方 法和 应用 技术领域 [0001]本发明属于医药领域， 具体涉及一种转铁蛋白与抗体结合超顺磁性氧化铁纳 米粒 及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]乳腺癌是目前女性最常见的恶性肿瘤之一， 在世界范围内发病率逐年上升， 并有 年轻化的趋势。 乳腺癌具有侵袭性 强、 易复发和易转移的特点。 为了提高患者的生存率和生 活质量， 需要更安全有效的治疗方法来降低乳腺癌的复发率。 常用的常规治疗方式有病灶 切除、 放疗和化疗， 或单独进行， 或联合进行， 但这些治疗一般具有侵袭性， 不具有选择性， 多数情况下对肿瘤的治疗效果明显有限， 对健康器官、 组织和细胞也会产生不良副作用。 目 前， 纳米靶向给药系统(TDDSs)在乳 腺癌的靶向治疗中得到了广泛的关注， 以缓解乳 腺癌的 症状， 提高或延长患者的生存期。 [0003]不同类型的磁性纳 米颗粒(MNPs)作为载体已成为肿瘤治疗领域的基本应用。 MNPs 作为一种 药物传递系统， 由于其独特 的磁性和 生物相容性， 可以在外磁场作用下靶向于人 体的特定部位。 迄今为止， 超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIONs)是应用最广泛的MNPs类型之 一。 SPIONs具有超顺磁性、 催化性、 低毒性和生物导电性等多种 性质， 使其在生物医学领域 的应用成为可能。 临床上， 这类粒子广泛应用于磁共振成像(MRI)， 热疗， 将抗癌药物传递到 特定的位置、 生物传感器、 传感器、 体内细胞追踪、 和癌细胞磁分离。 当SPIONs装载药物时， 它们在确保磁性靶区的药物浓度达到治疗浓度的同时降低药物剂量； 降低非靶区的药物浓 度以降低其毒性和副作用。 [0004]一般来说， SP IONs可以通过被动或主动靶向机制给药。 渗漏的肿瘤微血管(TMV)导 致通透性和滞留(EPR)效应增强， 这是NPs被动靶向机制的基础， 因为MNPs可以通过TMV内皮 细胞的孔隙和空隙渗出并积聚在宽松的肿瘤微环 境(TME)中。 另一方面， SPIONs与特定聚合 物功能化可以增强组织的对比度。 癌细胞通常比正常细胞在细胞表面过表达更多的特定蛋 白质， 这些蛋白质被用作癌症生物标志物， 如粘蛋白1(MUC1)、 Tf受体(TfRs)、 叶酸受体、 CD44受体、 epidermal  growth factor(EGF)受体等。 利用适体、 配体、 抗体等生物相容性修 饰物对SPIONs进行进一步功能化， 可以提高SPIONs在外磁场作用下在癌细胞附近的定位， 进而通过识别和结合肿瘤生物标志 物实现靶向给 药， 这称为主动靶向机制。 [0005]专利CN102784400A、 WO2009033176A1、 WO2020236998A2等公开了偶联转铁蛋 白的 超顺磁性氧化铁纳米粒。 粘蛋白1(MUC1)与纳米粒载体结合也已有文献报道(Siminzar  P  et al.； Targeted  delivery  of doxorubicin  by magnetic  mesoporous  silica  nanoparticles  armed with mucin‑1aptamer； J  Drug Target.； 2020Jan； 28(1):92 ‑101)。 但转铁蛋白+抗粘蛋白1双修饰/双靶向的超顺磁性氧化铁纳米粒 未见报道。说　明　书 1/9 页 3 CN 113975403 A 3