(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111284462.7 (22)申请日 2021.11.01 (71)申请人 中国科学院南海 海洋研究所 地址 510000 广东省广州市南沙区海 滨路 1119号 (72)发明人 潘剑宇　叶子晴　蔡冰娜　陈华　 万鹏　陈得科　孙恢礼　 (74)专利代理 机构 广州正明知识产权代理事务 所(普通合伙) 44572 代理人 成姗 (51)Int.Cl. C12P 21/06(2006.01) A23L 33/10(2016.01) A61K 31/513(2006.01) A61K 35/618(2015.01)A61K 38/01(2006.01) A61P 1/04(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/04(2006.01) (54)发明名称 一种缓解化疗药物对肠黏膜损伤且提高抑 瘤率的低分子量牡 蛎酶解物制备方法及其应用 (57)摘要 本发明属于功能食品生物 技术领域， 公开了 一种牡蛎酶解物的制备方法和应用， 牡蛎肉由胰 蛋白酶水解， 经分离得到， 其小分子肽集中于 1kDa以下， 其与5 ‑FU联用时， 200 ‑800mg/(kg · bw)范围时， 可有效缓解S ‑180荷瘤小鼠的肠黏膜 损伤， 小肠绒毛高度、 隐窝深度、 黏膜厚度和绒毛 面积相对于5 ‑FU组均显著增加； 同时提高抑瘤率 到38.24～47.57％， 较5 ‑FU单独使用有明显提 高； 在剂量为800mg/(kg ·bw)时， 显著增加荷瘤 小鼠总蛋白、 白蛋白以及免疫球蛋白含量， 改善 机体营养状况以及调节血清免疫抗体水平。 本发 明的低分子量牡蛎酶解物可应用于5 ‑FU联用的 功能营养食品、 特医食品或药物。 权利要求书1页 说明书10页 附图2页 CN 114196717 A 2022.03.18 CN 114196717 A 1.一种低分子量牡 蛎酶解物的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)牡蛎肉均质化： 新鲜牡蛎肉预处理后， 采用400 ‑600W， 微波加热处理25 ‑45s， 灭菌去 内源酶活， 后加入等重量蒸馏水， 高速 剪切均质化呈 无肉眼可 见颗粒物浆液； (2)酶水解： 均质化后， 加入蒸馏水， 调节pH为8， 搅拌均匀预热至30 ‑45℃， 加入3000 ‑ 4000U/g的胰蛋白酶， 搅拌恒温并保持pH值 为8的条件下， 水解 4‑6小时； (3)分离： 酶解完成后加热至90 ‑100℃， 保持数分钟， 待冷却后， 过滤， 滤过液经5000～ 8000×g离心， 收集上清液； (4)干燥： 上清液经薄膜浓缩， 再经冷冻干燥或喷雾干燥获得所述低分子量牡蛎酶解 物。 2.权利要求1所述方法得到的牡蛎酶解物， 其特征在于， 该牡蛎酶解物的粗蛋白含量 40.4g/100g， 分子质量集中在1kDa以下， 所占比例为92.18％， 其中467Da以下的占比达 83.17％， 谷氨酸含量 为5.8g/10 0g， 必需氨基酸占总氨基酸含量的3 6.44％。 3.权利要求2所述牡 蛎酶解物在制备 具有下述效果的产品中的应用； (1)减轻5 ‑FU化疗下的肠黏膜损伤； 和/或， (2)辅助提高抑瘤率； 和/或， (3)提高机体免疫。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述产品选择保健品、 营养品、 特医食品、 药物。 5.根据权利 要求3所述的应用， 其特征在于， 所述牡蛎酶解物提 高了IgA、 IgM、 IgG、 补体 C4水平。 6.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述牡蛎酶解物改善了小肠绒毛高度、 隐 窝深度、 黏膜厚度和绒毛面积。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114196717 A 2一种缓解化疗药物对肠黏膜损伤且提高抑瘤率的低分子量牡 蛎酶解物制备方 法及其应用 技术领域 [0001]本发明属于功能食品技术领域， 更具体地， 涉及一种缓解化疗药物对肠黏膜损伤 且提高抑瘤率的低分子量牡 蛎酶解物制备 方法及其应用。 背景技术 [0002]据文献统计， 在接受常规化疗药物之一的5 ‑FU化疗的患者当中大约有50～80％患 者伴有肠道炎症的发生。 尽管5 ‑FU具有良好的抗肿瘤作用， 但严重的副作用也影响患者生 活质量及化疗效果。 据研究报道， 5 ‑FU在抑制肿瘤生长的同时， 也易对其他正常体细胞表现 出细胞毒性， 如会抑制更新周期快 的肠黏膜上皮细胞正常增殖， 并同时诱导由细胞因子介 导的肠细胞凋亡和肠道微生物群落改变， 进一步导致肠道黏膜炎症的发生和恶化， 使患者 在化疗期间出现食欲不振， 腹泻， 感染和疲倦等症状， 降低化疗耐受力和效果。 因此， 在化疗 期间针对伴随产生的肠道黏膜炎症和损伤给予适当的辅助保护治疗， 可预期获得更好的化 疗效果。 [0003]目前市面上针对化疗伴随产生的肠道黏膜炎症的辅助保护治疗和提高机体免疫 方面的单一营养素如谷氨酰胺、 精氨酸等被证实通过免疫反应、 紧密连接蛋白的调节改善 肠损伤后黏膜修复， 在炎症过程的调控以及肠道微生物群落的调节中发挥关键作用。 而近 年来， 酶工艺的发展为食源性原料活性成分的提取研究提供了高效的途径。 专利 201710770663.5公开了一种以50KD海地瓜藻聚糖硫酸酯为主要活性物质的方便粥用于化 疗型肠粘膜炎治疗的制备方法， 但其主要成分是由特殊菌酶解获得的海地瓜岩藻多糖硫酸 酯， 因其酶解菌种非常规食品添加剂， 其作为制备食品手段原料的风险未明。 [0004]牡蛎作为我国产量最大的养殖贝类， 富含蛋白质、 维生素以及微量元素铜、 锌、 铁、 锰和硒， 同时也被证实含有丰富的必需氨基酸、 牛磺酸、 有益胆固醇以及ω ‑3不饱和脂肪酸 等对人体健康有益的物质。 从牡蛎提取制备的寡肽和多糖等活性物质大多 具有免疫调节和 抗肿瘤活性。 专利201310399203.8公开了一种牡蛎多糖可作为肠内营养成分辅助化疗， 但 其主要通过调节肠道微生物菌群来起作用， 且制备过程步骤繁复， 需使用有机溶剂进行分 离纯化才能获得目标活性多糖。 专利201310437598公开了一种含牡蛎酶解肽的肠黏膜保护 与修复肠内营养制品， 但其分子量范围为5kDa以下， 酶解物单独作用效果未明确。 专利 201811570057.X公开了一种酶解来源的牡蛎多糖和牡蛎多肽的肠内营养制剂， 能够作为增 强免疫功能为肿瘤患者提供肠内营养支持， 但未阐明单一牡蛎多肽在患者肠内营养 当中的 作用。 专利201810327326公开了两条牡蛎来源的肠黏膜上皮细胞增殖和前移 促进作用的小 分子肽， 但其分子量均超过1kDa， 且动物实验效果未明确。 [0005]现有技术亟需一种制 备方法简单， 动物实验效果明确的， 且具有缓解化疗药物对 肠黏膜损伤， 辅助提高抑瘤率并提高机体免疫指标等效果的低分子量牡 蛎酶解物。说　明　书 1/10 页 3 CN 114196717 A 3