(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211143998.1 (22)申请日 2022.09.20 (71)申请人 南昌大学第二附属医院 地址 330006 江西省南昌市民德路1号单 位:南昌大 学第二附属医院 (72)发明人 孙万磊　 (74)专利代理 机构 西安研创天下知识产权代理 事务所(普通 合伙) 61239 专利代理师 郭璐 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种慢性粒细胞白血病BCR-ABL融合基因检 测试剂盒及其检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种慢性粒细胞白血病BCR ‑ ABL融合基因检测试剂盒， 由以下组分组成： 检测 试剂盒A、 检测试剂盒B和检测试剂盒C； 本发明还 公开了一种慢性粒细胞白血病BCR ‑ABL融合基因 的检测方法， 包括以下步骤： S1、 取骨髓血液标本 2ML， 提取RNA； S2、 取2UL的步骤S1提取到的RNA， 加入8UL的RNA逆转录试剂反应得到10UL的CDNA 模板； S3、 分别向检测试剂盒A、 检测试剂盒B和检 测试剂盒C中加入2UL的步骤S2得到的CDNA模板 进行PCR扩增反应， 反应结束后， 检测得到反应结 果。 本发明提供的检测试剂盒通过采 取两步法进 行检测， 具有需求RNA量少且操作更稳定、 重复性 更好的优势。 权利要求书2页 说明书6页 附图2页 CN 115354080 A 2022.11.18 CN 115354080 A 1.一种慢性粒细胞白血病BCR ‑ABL融合基因检测试剂盒， 其特征在于， 由以下组分组 成： 检测试剂盒A、 检测试剂盒B和检测试剂盒C； 所述检测试剂盒A包 含: PCR反应液， PCR反应液的浓度为10umo l/L； 引物探针混合反应液A， 引物探针混合反应液A的浓度为10umo l/L； 无核酶水， 无核酶水的浓度为10umo l/L； 所述检测试剂盒B包 含: PCR反应液， PCR反应液的浓度为10umo l/L； 引物探针混合反应液B， 引物探针混合反应液B的浓度为10umo l/L； 无核酶水， 无核酶水的浓度为10umo l/L； 所述检测试剂盒C包 含: PCR反应液， PCR反应液的浓度为10umo l/L； 引物探针混合反应液C， 引物探针混合反应液C的浓度为10umo l/L； 无核酶水， 无核酶水的浓度为10umo l/L。 2.如权利要求1所述的慢性粒细胞白血病BCR ‑ABL融合基因检测试剂盒， 其特征在于， 所述引物探针混合反应液A由以下引物和探针组成： 外引物b f： 5'‑agc att ccg ctg acc atc a‑3'； 外引物bcr ‑abl r： 5'‑act cag acc ctg agg ctc aaa g‑3'； 外探针bcr‑ablp： 5'‑fam‑aag ccc ttc agc ggc cag tag cat‑tamra‑3'； 所述外引物b  f、 外引物bcr ‑ablr和外 探针bcr‑ablp的浓度均为10umo l/L。 3.如权利要求1所述的慢性粒细胞白血病BCR ‑ABL融合基因检测试剂盒， 其特征在于， 所述引物探针混合反应液B由以下引物和探针组成： 外引物e f： 5'‑cgc aag acc ggg cag at‑3'； 外引物bcr ‑abl r： 5'‑act cag acc ctg agg ctc aaa g‑3'； 外探针bcr‑ablp： 5'‑fam‑aag ccc ttc agc ggc cag tag cat‑tamra‑3'； 所述外引物e  f、 外引物bcr ‑ablr和外 探针bcr‑ablp的浓度均为10umo l/L。 4.如权利要求1所述的慢性粒细胞白血病BCR ‑ABL融合基因检测试剂盒， 其特征在于， 所述引物探针混合反应液C由以下引物和探针组成： 内参引物abl  f： 5'‑gat acg aag gga ggg tgt acc a‑3'； 内参引物abl  r： 5'‑ctc ggc cag ggt gtt gaa‑3'； 内参探针abl  p： 5'‑fam‑tgc ttc tgatgg caa gct cta cgt ctc ct‑tamra‑3'； 所述内参引物abl  f、 内参引物abl  r和内参探针abl  p的浓度均为10umo l/L。 5.一种慢性粒细胞白血病BCR ‑ABL融合基因的检测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 取骨髓血 液标本2ML， 提取RNA； S2、 取2UL的步骤S1提取到的RNA， 加入8UL的RNA逆转录试剂反应得到10UL的CDNA模板； S3、 分别向权利 要求1中的检测试剂盒A、 检测试剂盒B和检测试剂盒C中加入2UL的步骤 S2得到的CDNA模板进行PCR扩增反应， 反应结束后， 检测得到反应结果。 6.如权利要求5所述的慢性粒细胞白血病BCR ‑ABL融合基因的检测方法， 其特征在于， 步骤S3中， 所述PCR扩增反应的条件为： 95℃30秒后， 进入主循环95℃变性5s， 然后在60℃31权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115354080 A 2秒读取数据， 共40个 循环。 7.如权利要求5所述的慢性粒细胞白血病BCR ‑ABL融合基因的检测方法， 其特征在于， 步骤S3中， 所述检测试剂盒A的成分配比为： PCR反应液10.4UL； 引物探针混合反应液A， 具体为外引物b  f0.4UL、 外引物bcr/abl  r 0.4UL、 外探针bcr/ ablp 0.8UL； 无核酶水6UL。 8.如权利要求5所述的慢性粒细胞白血病BCR ‑ABL融合基因的检测方法， 其特征在于， 步骤S3中， 所述检测试剂盒B的成分配比为： PCR反应液10.4UL； 引物探针混合反应液B， 具体为外引物e  f0.4UL、 外引物bcr/abl  r 0.4UL、 外探针bcr/ ablp 0.8UL； 无核酶水6UL。 9.如权利要求5所述的慢性粒细胞白血病BCR ‑ABL融合基因的检测方法， 其特征在于， 步骤S3中， 所述检测试剂盒C的成分配比为： PCR反应液10.4UL； 引物探针混合反应液C， 具体为内参引物abl  f 0.4UL、 内参引物abl  r0.4UL、 内参探针 ablp 0.8UL； 无核酶水6UL。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115354080 A 3