(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211079338.1 (22)申请日 2022.09.05 (71)申请人 福建师范大学 地址 350108 福建省福州市闽侯县上街 镇 大学城福建师 范大学科技处 (72)发明人 沈阳坤　陈骐　赵向前　王达维　 蔡少丽　 (74)专利代理 机构 福州君诚知识产权代理有限 公司 35211 专利代理师 戴雨君 (51)Int.Cl. C12N 7/01(2006.01) C12N 15/22(2006.01) A61K 35/763(2015.01) A61K 38/21(2006.01)A61P 35/00(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种表达I型干 扰素的HSV-1溶瘤病毒 (57)摘要 本发明公开了一种表达I型干扰素的HSV ‑1 溶瘤病毒， 为以下任一种： 表达鼠源IFN ‑β的 HSV‑1重组溶瘤病毒HSV ‑1‑mIFN‑β‑C1、 HSV‑1‑ mIFN‑β‑C2、 HSV‑1‑mIFN‑β‑C3， 或者表达人源 IFN‑β的HSV‑1重组溶瘤病毒HSV ‑1‑hIFN‑β‑ C1、 HSV‑1‑hIFN‑β‑C2、 HSV‑1‑hIFN‑β‑C3； 所述 HSV‑1‑mIFN‑β‑C1、 HSV‑1‑hIFN‑β‑C1是将HSV ‑ 1的一个γ34.5基因拷贝保留， 将HSV ‑1的另外一 个γ34.5基因拷贝插入IFN ‑β的病毒株； 所述 HSV‑1‑mIFN‑β‑C2、 HSV‑1‑hIFN‑β‑C2的构建方 法是将HSV ‑1的一个γ34.5基因拷贝插入IFN ‑ β， 将HSV ‑1的另一个γ34.5移码突变后基因功 能失活的病毒株； 所述HSV ‑1‑mIFN‑β‑C3、 HSV‑ hIFN‑β‑C3是将HSV‑1的两个γ34.5基因拷贝都 插入IFN‑β。 本发明以HSV ‑1溶瘤病毒 为载体， 开 发一种表达I型干扰素的肿瘤免疫治疗药物HSV ‑ 1‑IFN‑β， HSV‑1‑IFN‑β可以利用病毒的感染特 性将IFN‑β基因递送到肿瘤内部， 在肿瘤细胞裂解的同时通过表达IFN ‑β引起机体的抗肿瘤免 疫应答， 并极大地促进了HSV ‑1溶瘤病毒在肿瘤 细胞中的增殖， 最终起到治 疗肿瘤的目的。 权利要求书1页 说明书5页 附图4页 CN 115418356 A 2022.12.02 CN 115418356 A 1.一种表达I型干扰素的HSV ‑1溶瘤病毒， 其特 征在于， 其 为以下任一种： 表达鼠源IFN ‑β 的HSV‑1重组溶瘤病毒HSV ‑1‑mIFN‑β‑C1、 HSV‑1‑mIFN‑β‑C2、 HSV‑1‑ mIFN‑β‑C3， 或者表达人源IFN ‑β 的HSV‑1重组溶瘤病毒HSV ‑1‑hIFN‑β‑C1、 HSV‑1‑hIFN‑β‑ C2、 HSV‑1‑hIFN‑β‑C3； 其中， 所述HSV ‑1‑mIFN‑β‑C1、 HSV‑1‑hIFN‑β‑C1的构建方法是将HSV ‑1的一个γ34.5基 因拷贝保留， 将HSV ‑1的另外一个 γ34.5基因拷贝插 入IFN‑β 的病毒株； 所述HSV‑1‑mIFN‑β‑C2、 HSV‑1‑hIFN‑β‑C2的构建方法是将HSV ‑1的一个γ34.5基因拷 贝插入IFN‑β， 将HSV‑1的另一个 γ34.5移码突变后基因功能失活的病毒株； 所述HSV‑1‑mIFN‑β‑C3、 HSV‑hIFN‑β‑C3的构建方法是将HSV ‑1的两个γ34.5基因拷贝 都插入IFN‑β 。 2.如权利要求1所述的一种表达I型干扰素的HSV ‑1溶瘤病毒在制备治疗肿瘤的药物中 的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115418356 A 2一种表达I型干扰素的HSV ‑1溶瘤病毒 技术领域 [0001]本发明属于生物技 术领域， 具体涉及一种表达I型干扰素的HSV ‑1溶瘤病毒。 背景技术 [0002]I型干扰素(Interferon,IFN)是各种细胞(如成纤维细胞、 白细胞、 自然杀细胞等) 对细菌、 病毒、 寄生虫等病原体以及癌症和其他外源细胞应激反应时分泌表达的一种天然 蛋白质， 其在先天免疫和适应性免疫的激活过程中都扮演着重要角色。 近年来， 越来越多的 证据表明， I型干扰素可以同时作用于肿瘤细胞和免疫细胞， 进而抑制肿瘤生长。 其中， 对于 肿瘤细胞， I型干扰素不仅可以通过阻断细胞周期进程和诱导细胞凋亡通过抑制增殖、 调节 细胞凋亡、 分化、 迁移和细胞表面抗原表达发挥直接抗肿瘤作用， I型干扰素还可以刺激固 有和适应性细胞毒性淋巴细胞群(T细胞、 自然杀伤细胞NK、 树突状细胞、 固有淋巴样细胞 ILCs)， 以及抑制抗肿瘤免疫的抑制性细胞(例如， 骨髓源性抑制细胞MDSCs和调节性T细胞 Treg)， 导致免疫细胞的激活， 进而杀伤肿 瘤。 因此， 肿瘤微环境中I型干扰素的释放是影响 肿瘤生长和治疗的关键， 激活或利用干扰素治疗肿瘤成为肿瘤免疫 治疗的重要研究方向。 [0003]早在1986年， 美国FDA首次批准I型干扰素rhIFNα ‑2a用于晚期黑色素瘤的治疗。 这 可以称之为第一代作用于I型干扰素通路的药物。 之后的临床研究显示， I型干扰素通路的 激活是刺激肿瘤抗原交叉呈递和肿瘤特异性CD8  T细胞激活的必需因素。 在多种肿瘤模型 中， 通过修饰环核苷酸的瘤内传递， I型干扰素的治疗可以有效和持久的肿瘤消退。 因此， I 型干扰素在治疗癌症方面具有巨大潜能。 目前 Ⅰ型干扰素已在血液系统肿瘤(如毛细胞白血 病、 滤泡性淋巴瘤、 慢 性髓性白血病和多发性骨髓瘤)和实体瘤(如 恶性黑色素瘤、 A IDS相关 性Kaposi氏肉瘤、 肾癌、 内分泌性胰腺肿瘤)的治疗中得到广泛应用。 然而， 全身性的I型干 扰素免疫治疗的一个潜在的严重问题是 “细胞因子风暴 ”的发生。 免疫信号的持续激活会导 致细胞因子的过量产生， 导致严重中毒甚至死亡， 这些副作用直接限制了I型干扰素的使 用。 因此， 开发新一代的干扰素药物以更有效地靶向肿瘤组织、 增强I型干扰素的半衰期以 及有效减少系统性给 药的副作用依然是 该领域的重要研究方向。 [0004]HSV‑1是一类有包膜的双链DNA病毒， 属于α ‑疱疹病毒亚家族。 目前， HSV ‑1已被广 泛应用于重组溶瘤病毒治疗药物的开发研究， 同时也是首个被美国FDA批准用于抗癌治疗 的溶瘤病毒。 相较于其他类型的溶瘤病毒， HSV ‑1拥有更长的基因组(约150kb)， 能接纳更多 外源基因的插入， 因此HSV ‑1被广泛用作针对肿瘤基因治疗的基因递送平台。 其中， Richard   G.Vile课题组已经将I型干扰素IFN ‑β 整合到病毒或者溶瘤病毒载体内用于小鼠肝癌的治 疗， 并且在大鼠和恒河猴中证实了其安全性。 然而， 由于IFN ‑β 能有效激活抗病毒免疫反应， 将I型干扰素整合到病毒体内仍将面临巨大挑战。 因此， 如 何解决IFN ‑β 在溶瘤病毒治疗过 程中激活抗肿瘤免疫和抗病毒免疫间的平衡是需要攻克的难题。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种表达I型干扰素的HSV ‑1溶瘤病毒。说　明　书 1/5 页 3 CN 115418356 A 3