(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211213710.3 (22)申请日 2022.09.30 (71)申请人 中山大学肿瘤防治中心 （中山大 学 附属肿瘤医院、 中山大 学肿瘤研究 所） 地址 510060 广东省广州市越秀区东 风东 路651号 (72)发明人 康铁邦　付清玲　高瑛　钱林霞　 (74)专利代理 机构 广州粤高专利商标代理有限 公司 44102 专利代理师 段卉 (51)Int.Cl. C12N 5/0775(2010.01) C12N 5/10(2006.01) C07K 14/47(2006.01)A61K 38/17(2006.01) A61K 38/21(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种包含激活型干扰素基因刺激蛋白的纳 米颗粒及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明提供了一种包含激活型干扰素基因 刺激蛋白的纳米颗粒及其制备方法和应用。 本发 明的包含激活型干扰素基因刺激蛋白的纳米颗 粒， 是通过诱导细胞分泌包裹有激活型干扰素基 因刺激蛋白(S TING)的细胞外囊 泡(EVs)得到的， 包裹有激活型STING的EVs稳定性强， 不易降解， 直接用于抗肿瘤及免疫调节， 不需要在体内注射 STING激动剂间接诱导生成激活型S TING， 进一步 避免了个体差异带来的不确定性因素。 本发明通 过构建增强RAB 22A的自噬功能的细胞， 从而增强 细胞分泌包 裹激活型S TING的EVs， 达到 更好的抗 肿瘤效果。 权利要求书1页 说明书20页 附图10页 CN 115466723 A 2022.12.13 CN 115466723 A 1.一种包含激活型干扰素基因刺激蛋白的纳米颗粒的制备方法， 其特征在于， 用含有 干扰素基因刺激蛋白激动 剂的培养基培养细胞， 或者在细胞中过表达激活型干扰素基因刺 激蛋白的基因， 得到活化的细胞， 收集所述活化的细胞分泌的细胞外囊泡和颗粒， 所述细胞 外囊泡和颗粒即为包 含激活型干扰素基因刺激蛋白的纳米颗粒。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述激活型干扰素基因刺激蛋白为 STINGV155M或STINGR281Q。 3.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述干扰素基因刺激蛋白激动剂为 diABZI、 cGAMP、 MSA ‑2或SR‑717。 4.根据权利 要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述细胞为增强RAB22A的自噬功能的 细胞， 所述RAB2 2A的在NCBI上的登录号 为Gene ID： 57403。 5.根据权利 要求4所述的制备方法， 其特征在于， 所述增强RAB22A的自噬功能的细胞为 过表达RAB2 2AQ64L蛋白的细胞。 6.权利要求1～5任一所述方法制备得到的包含激活型干扰素基因刺激蛋白的纳米颗 粒。 7.权利要求6所述包含激活型干扰素基因刺激 蛋白的纳米颗粒在制备抗肿瘤药物中的 应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤为乳腺癌、 鼻咽癌和/或宫颈癌肿 瘤。 9.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述抗肿瘤为抑制肿瘤体积和/或重量的 生长。 10.一种抗肿瘤药物， 其特征在于， 所述抗肿瘤药物中含有权利要求6所述包含激活型 干扰素基因刺激蛋白的纳米颗粒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115466723 A 2一种包含激活 型干扰素基因刺激 蛋白的纳米颗粒 及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学技术领域， 具体地， 涉及一种包含激活型干扰素基因刺激蛋 白的纳米颗粒及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]干扰素基因刺激蛋白(stimulator  of interfer on genes， STING； 也被称为MITA、 MYPS、 ERIS)是一个内质网(endoplasmic  reticulum， ER)相关的信号 分子， 当细胞识别到异 常DNA或者循环二核苷酸(cyclic  dinucleotides， CDNs)后， 激活 的STING负责调控多种宿 主防御基因的转录， 包括I型干扰素(interferon， IFN)和促炎细胞因子。 STING信 号转导可 以保护细胞免受各种病原体的侵袭， 甚至通过促进抗肿瘤的免疫反应对癌症的发展起着至 关重要的作用。 [0003]cGAS‑cGAMP‑STING信号通路在天然免疫中发挥重要作用。 环鸟嘌呤核苷酸腺嘌呤 核苷酸(cyclic  GMP‑AMP， cGAMP)合成酶(cGAMP  synthase， cGAS)感受细胞质DNA刺激后产 生cGAMP， cGAMP作为干扰 素基因刺激分子(sti mulator of interferon  genes， STING)的天 然激动剂和S TING结合后激活TANK结合激酶1(TANK ‑binding kinase 1， TBK1)， 进而诱导干 扰素β(interferonβ， IFNβ )的产生， 补充IFNβ 在先天性免疫中的功能。 同时， IFNβ 可以选择 性地刺激肿瘤抗原的交叉递呈， 动员肿瘤特异 性T细胞， 从而启动对抗肿瘤的适应性免疫应 答。 [0004]细胞外囊泡(extracellular  vesicles， EVs)EVs是一组具有异质性的细胞来源的 膜状小体结构， 主要包括外泌体(exo somes)和微囊泡(microvesicles， MVs)， 外泌体来源于 细胞的内膜系统， 微囊泡来源于细胞膜出芽。 EVs携带有母细胞的多种核酸、 蛋白质 、 脂质、 氨基酸和代谢产物等重要信息， 在细胞间通讯以及器官体内稳态和疾病中发挥着重要作 用， 在癌症生物学和免疫学等多个学 科中受到广泛关注。 [0005]间充质干细胞(MSCs)是多能干细胞， 通常从骨髓、 脂肪组织和脐 带血中分离出来。 MSCs通过与T淋巴细胞、 B淋巴细胞、 自然 杀伤细胞或树突状细胞的相互作用， 对免疫系统疾 病具有强大的免疫调节作用。 MS Cs发挥其免疫调节特性的主要机制是通过细胞间接触和旁 分泌因子， 旁分泌因子包括TGF ‑β 1、 TNF‑α、 PGE2、 IFN ‑γ和HGF等， 被包裹在细胞外囊泡中到 达远处， 调节相应宿主细胞。 MSC s的免疫原 性普遍较低， 由于MSC s表达相对较低水平的主要 组织相容性复合体I类分子， 缺乏主要组织相容性复合体II类和共刺激分子(如CD40、 CD80 和CD86)的表达， 因此MSCs不容易触发受体免疫应答。 然而， 使用成人MSCs有几个潜在的局 限性， 包括其增殖能力有限、 不同供体细胞质量的显著差异以及多潜能的快速丧失。 诱导多 能干细胞(IPSCs)是使用转录因子从体细胞重新编程的细胞。 与胚胎干细胞类似， IPSCs已 被成功诱导分化为多种功能细胞， 如神经元、 心肌细胞、 胰岛细胞和MSC s。 由于IPS Cs是非特 异性细胞， 能在培养皿中无限更新， IPSCs来源的MSCs显示出更高的增殖率。 此外， 与成人 MSCs相比， 人IPSC ‑MSC对IFN ‑γ诱导的人类白细胞抗原(HLA) ‑II表达不敏感， 移植后具有说　明　书 1/20 页 3 CN 115466723 A 3