ICS 11.120.20 C 30 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5127.14—2019 植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中 有毒有害物质的测定 第 14 部分：蛋白质迁 移量 可见-紫外分光光度法 2019 - 12 - 27 发布 河北省市场监督管理局 2020 - 01 - 28 实施 发 布 DB13/T 5127.14—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5127《植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中有毒有害物质的测定》共分16个部分： ——第1部分：柠檬酸钠和乙二胺四乙酸二钾迁移量 原子吸收分光光度法； ——第2部分：二巯基丙醇迁移量 碘量法； ——第3部分：葡萄糖迁移量 碘量法； ——第4部分：柠檬酸迁移量 酸碱中和滴定法； ——第5部分：硫氰酸胍迁移量 分光光度法； ——第6部分：丙酮迁移量 气相色谱法； ——第7部分：丙交酯迁移量 气相色谱法； ——第8部分：对苯二甲酸迁移量 高效液相色谱法； ——第9部分：乙醇迁移量 气相色谱法； ——第10部分：环氧乙烷迁移量 气相色谱法； ——第11部分：戊二醛迁移量 高效液相色谱法； ——第12部分：异氰酸酯迁移量 高效液相色谱法； ——第13部分：甲醛迁移量 气相色谱质谱联用法； ——第14部分：蛋白质迁移量 可见-紫外分光光度法； ——第15部分：铅、砷、镉、铬、铜、锑、钡、铝、锌、锡迁移量 电感耦合等离子体质谱法； ——第16部分：生物负载 薄膜过滤法。 本部分为DB13/T 5127的第14部分。 本部分由河北省药品监督管理局提出并归口。 本部分起草单位：河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院、石家庄亿生堂医用品有限公司。 本部分主要起草人：王丽、刘胜军、刘华、高明、刘若锦、李素哲、杨光。 I DB13/T 5127.14—2019 植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中有毒有害物质的测定 第 14 部分：蛋白质迁移量 可见-紫外分光光度法 1 范围 本标准规定了植入性医疗器械高分子材料浸提液中蛋白质迁移量的可见-紫外分光光度法测定方 法。 本标准适用于植入性医疗器械高分子材料浸提液中蛋白质迁移量的测定。 本方法蛋白质的检出限为0.2 mg/L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 16886.12 医疗器械生物学评价 第12部分：样品制备与参照材料 3 方法原理 试样经浸提液浸提后，浸提液中蛋白质分子的碱性氨基酸（精氨酸）和芳香族氨基酸在酸性溶液 中与考马斯亮蓝G250结合形成蓝色复合物，在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质 对照品溶液作标准曲线，采用比色法测定浸出液中蛋白质的含量。 4 试剂与材料 除另有规定外，所用的试剂应为优级纯，试验用水应符合GB/T 6682规定的二级水的要求。 4.1 牛血清白蛋白标准品：CAS 号：9048-46-8。 4.2 考马斯亮蓝 G250：CAS 号：6104-58-1。 4.3 磷酸：CAS 号：7664-38-2。 4.4 乙醇：CAS 号：64-17-5。 5 仪器与设备 5.1 酸性染色液的制备：取考马斯亮蓝 G250（4.2） 0.1g，加乙醇（4.4）50 mL 溶解后，加磷酸（4.3） 100 mL，加水稀释至 1000 mL,混匀。滤过，取滤液，即得。本试剂应置棕色瓶内，如有沉淀产生，使 用前需经过滤。 5.2 对照品储备液制备：准确称取牛血清白蛋白标准品（4.1）50 mg（精确到 0.1 mg）于 50 mL 容 量瓶中，加水定容，摇匀，得到浓度为 1000 mg/L 的对照品储备液。 5.3 对照品中间液制备：精密移取对照品储备液（5.2）2.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，加水稀释并定容 至刻线，摇匀，即得 200 mg/L 的对照品中间液。 1 DB13/T 5127.14—2019 5.4 对照品溶液制备：精密移取对照品中间液（5.3）10 mL 于 100 mL 容量瓶中，加水稀释并定容至 刻线，摇匀，即得 20 mg/L 的对照品溶液。 6 仪器与设备 6.1 紫外-可见分光光度计。 6.2 电子天平，精度 0.1 mg。 6.3 具塞刻度试管：10 mL。 6.4 容量瓶：50 mL。 6.5 石英比色皿，1cm 光径。 7 试液制备 7.1 浸提试验 7.1.1 浸提溶液 本标准采用模拟浸提方式，以水为浸提介质。 7.1.2 浸提条件和方法 7.1.2.1 浸提条件建立在通常可行并经论证为一个标准化方法的基础之上，在多数情况下为产品使用 的适当加严的条件。应在下列之一的条件下进行浸提： a) (37±1)℃,(24±2) h； b) (37±1)℃,(72±2)h； c) (50±2)℃,(72±2) h； d) (70±2)℃,(24±2) h； e) (121±2)℃,(1±0.1)h。 7.1.2.2 可用标准表面积确定所需的浸提介质的体积。标准表面积包括样品两面面积的总和，不包括 不确定和不规则面积。当由于样品外形不能确定其表面积时，应使用质量/浸提液体积。见表1。 表1 标准表面积和浸提液体积 厚度 浸提比例 （mm） （表面积或质量/体积）±10% 膜、薄片、管壁 ＜0.5 6 cm / mL 管壁、厚板、小型模制件 0.5～1.0 3 cm / mL 大型模制件 ＞1.0 3 cm / mL 弹性密封件 ＞1.0 1.25 cm / mL 粉剂、球体、泡沫材料、无吸收性模制件 不规则形状固体器械 0.2 g/ mL 薄膜、织物 不规则形状多孔器械（低密度材料） 0.1 g/ mL 材料形态举例 注1：现在尚无测试吸收剂和水胶体的标准化方法，推荐以下方案： 2 注2：测定材料浸提介质吸收量（每0.1 g或1.0cm 材料所吸收的量）； 2 注3：在进行浸提时，对浸提混合物按每0.1 g或1.0 cm 额外加入该浸提介质吸收量。 2 2 2 2 2 DB13/T 5127.14—2019 7.1.2.3 对于弹性体、涂层材料、复合材料、多层材料等，由于完整表面与切割表面存在潜在的浸提 性能差异，因此应尽量完整地进行浸提。 7.2 空白液制备 以同批浸提介质作为空白试验液。 8 测定 8.1 仪器条件 波长：595 nm。 8.2 工作曲线和样品测定 分别精密量取对照品溶液0.0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.5 mL、1.0 mL，对照品中间液0.2 mL,分别至具塞试管中，各加水至1.0 mL，再分别加入酸性染色剂5.0 mL，立即混匀，放置2 min后， 在595 nm波长处测定吸光度；同时以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与其相对应的吸光度计算线性 回归方程。 另精密量取浸提液溶液1.0 ml，同法测定浸提液。 9 结果计算 浸提液中甲醛蛋白质的含量按公式（1）计算。 ……………………………………………………（1） 式中： C ——浸提液中蛋白质的浓度，单位为微克每毫升（mg/L）； y ——浸提液的吸光度； a ——回归曲线的斜率； b ——回归曲线的截距； ρ ——稀释倍数。 样品中蛋白质的特定迁移量按公式（2）计算。 M  C A  1000 ……………………………………………………（2） 式中： 2 M ——特定迁移量，mg/cm 或 mg/g； 2 A ——浸提比例，cm / mL或g/mL。 计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。 10 精密度 浸提液中目标物在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 _________________________________ 3