ICS 67.040 C 53 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3818—2019 动物源性食品中喹烯酮药物及代谢物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 残留量的测定 液相 色谱-串联质谱法 Determination of quinocetone and its metabolites 1-DQCT, BDQCT and MQCA residues in animal-derived foods—Liquid chromatography tandem mass spectrometry 2019 - 12 - 24 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 01 - 24 实施 发 布 DB37/T 3818—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：青岛农业大学。 本标准主要起草人：郝智慧、曲少奇、黄亭亭、曲丽华、孙京新。 I DB37/T 3818—2019 动物源性食品中喹烯酮药物及代谢物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 残留量 的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了动物源性食品中喹烯酮药物及代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA残留量测定的液相色谱— 串联质谱法。 本标准适用于猪肝、猪肉、猪心和鸡蛋中的喹烯酮药物及代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA残留量的测 定。 本方法的检出限均为1.25 μg/kg，定量限均为2.5 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 采用乙酸乙酯溶液提取样品中喹烯酮及代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA，提取液经固相萃取小柱净化， 滤膜过滤后用液相色谱-串联质谱法进行测定，外标法定量。 4 试剂或材料 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。 4.1 水：GB/T 6682，一级。 4.2 乙酸乙酯。 4.3 乙腈：色谱纯。 4.4 甲醇：色谱纯。 4.5 二甲基亚砜：色谱纯。 4.6 甲酸：色谱纯。 4.7 0.1 %甲酸水溶液：准确吸取 0.5 mL 甲酸（4.6），加水（4.1）稀释至 500 mL，混匀。 4.8 0.1 %甲酸乙腈溶液：准确吸取 0.5 mL 甲酸（4.6），加乙腈（4.3）稀释至 500 mL，混匀。 4.9 20 %甲醇溶液：准确量取 200 mL 甲醇（4.4），加水（4.1）稀释至 1 000 mL，混匀。 4.10 洗脱液：准确吸取 20 mL 0.1%甲酸水溶液（4.7），加乙腈（4.3）稀释至 1 000 mL，混匀。 4.11 0.1 %甲酸乙腈溶液：0.1 %甲酸水溶液（4.7）+0.1 %甲酸乙腈溶液（4.8）=7+3。 4.12 喹烯酮（QCT）对照品：纯度≥98.0 %。 4.13 3-甲基喹噁啉-2-羧酸（MQCA）对照品：纯度≥98.0 %。 4.14 N1-脱氧喹烯酮（1-DQCT）对照品：纯度≥98.0 %。 1 DB37/T 3818—2019 4.15 脱二氧喹烯酮（BDQCT）对照品：纯度≥98.0 %。 4.16 标准储备溶液：分别称取喹烯酮对照品（4.12）、MQCA 对照品（4.13）、1-DQCT 对照品（4.14）、 BDQCT 对照品（4.15）10 mg，置 10 mL 棕色容量瓶中，加入 1 mL 的二甲基亚砜（4.5）溶解后，用乙 腈（4.3）定容至刻度，配制成浓度均为 1 mg/mL 的标准储备溶液，-20 ℃ 冰箱保存，有效期为 3 个月。 4.17 混合标准中间溶液：准确吸取喹烯酮及 1-DQCT、BDQCT、MQCA 标准储备溶液（4.16）各 1 mL 置 于 10 mL 容量瓶中，加乙腈（4.3）稀释至 10 mL，配制成浓度为 100 μg/mL 的混合标准工作溶液。 4.18 基质混合标准工作溶液系列：准确称取 5 份空白试样（2.0 g，精确至 0.001 g）于 50 mL 聚丙 烯离心管中，根据需要分别加入相应体积的混合标准中间溶液（4.17），配制成 2.5 ng/mL、5 ng/mL、 10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL 的基质混合标准工作溶液系列，然后按 7.1 和 7.2 操作，供液相色谱 —串联质谱仪分析。 4.19 C18 固相萃取柱：250 mg/3 mL，或其它性能类似的小柱。 4.20 微孔滤膜：0.22 μm 有机系过滤膜。 5 仪器设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 液相色谱—串联质谱仪（HPLC-MS-MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。 分析天平：感量 0.001 g 和 0.01 mg 各一台。 均质器：转速不低于 20 000 r/min。 氮气吹干仪。 色谱柱：C18，2.1×100 mm，1.8 μm，或其它性能类似的柱子。 离心机：转速不低于 10 000 r/min。 旋涡混合器。 旋转蒸发仪。 6 样品 6.1 试样的制备 取均质后的供试样品，作为供试试样。 取均质后的空白样品，作为空白试样。 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试样。 6.2 试样的保存 -18 ℃以下保存。 7 试验步骤 7.1 提取 平行做两份实验，称取试样2 g（精确至0.001 g），置于50 mL聚丙烯离心管中，准确加入乙酸乙 酯（4.2）10 mL，均质提取1 min后，于10 000 r/min离心10 min，取上清液，置另一干净的50 mL聚丙 烯离心管中。残渣准确加入10 mL乙酸乙酯（4.2）重复提取一次，离心后合并上清液，将上清液于旋转 蒸发仪中50 ℃水浴，蒸发至近干。准确加入2 mL 20 %甲醇溶液（4.9）溶解，涡旋混合30 s，待净化。 2 DB37/T 3818—2019 7.2 净化 C18固相萃取柱（4.19）依次用3 mL甲醇（4.4）、3 mL水（4.1）预洗活化。将提取液转移至已活化 好的C18固相萃取柱（4.19）上，保持流速为1滴/s，加入3 mL水（4.1）淋洗，3 mL洗脱液（4.10）洗脱， 收集洗脱液于5.0 mL离心管中，40 ℃氮气吹干。残渣用1.00 mL含0.1 %甲酸乙腈溶液（4.11）溶解， 用微孔滤膜（4.20）过滤，取滤液作为HPLC-MS-MS供试品溶液，采用外标法计算药物含量。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱参考条件： a) 色谱柱：C18，2.1×100 mm，1.8 μm, 或其它性能类似的柱子； b) 流动相：0.1 %甲酸水溶液（4.7，A 相），乙腈（4.3，B 相）； c) 流速：0.3 mL/min； d) 进样量：5 μL； e) 柱温：30 ℃； f) 流动相及梯度洗脱条件见表 1。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间（min） A 相（%） B 相（%） 0.0 95 5 2.0 60 40 3.0 60 40 4.0 0 100 7.0 0 100 8.0 95 5 9.0 95 5 7.3.2 质谱参考条件： a) 离子源及扫描方式：电喷雾正离子扫描（ESI+）； b) 毛细管电压：3 kV； c) 离子源温度：110 ℃； d) 脱溶剂气（N2）温度：320 ℃； e) 脱溶剂气（N2）流速：550 L/h； f) 监测方式：多反应监测（MRM）； g) 喹烯酮药物及代谢物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 的特征离子对、碰撞能量和锥孔电压见表 2。 表2 特征离子对、碰撞能量和锥孔电压 序号 化合物 母离子 子离子 碰撞能量/eV 锥孔电压/V 1 喹烯酮 307 273 15 24 2 1-DQCT 189 143 10 15 3 BDQCT 291 159 10 20 4 MQCA 275 143 10 20 7.3.3 定性测定。通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应 浓度标准溶液各色谱峰的特征离子相对照定性。试样与标准品保留时间的相对偏差在±2.5 %之内；试 3 DB37/T 3818—2019 样特征离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 3 的规定，则可判 断试样中存在相应的目标化合物。 表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度，% ＞50 ＞20 至 50 ＞10 至 20 ≤10 允许相对偏差，% ±20 ±25 ±30 ±50 7.3.4 定量测定。对基质标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标、基质标准工作溶液浓度为横坐标绘 制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品采用外标法进行定量，样品溶液中喹烯酮药物及代谢物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 的响应值应在仪器测定的线性范围内。喹烯酮药物及代谢物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 溶液的多反应监测（MRM）色谱图参见附录 A。 8 试验数据处理 供试试样中喹烯酮及1-DQCT、BDQCT、MQCA残留量以质量分数ω，单位以纳克每千克表示（ng/g）， 按式(1)计算： = A1  C  V A2  m ...................................... (1) 式中： A1——试样溶液中喹烯酮及1-DQCT、BDQCT、MQCA峰面积； A2——标准溶液中喹烯酮及1-DQCT、BDQCT、MQCA峰面积； C ——标准溶液中喹烯酮及1-DQCT、BDQCT、MQCA浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； V ——溶解残渣的液体体积，单位为毫升（mL）； m ——试样质量，单位为克（g）。 注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 精密度 在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值，不大于该平均值的15 %。 4 DB37/T 3818—2019 AA 附 录 A （资料性附录） 喹烯酮药物及代谢物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 混合标准工作液的 MRM 色谱图 喹烯酮药物及代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA混合标准工作液的MRM色谱图见图A.1。 图A.1 混合标准溶液色谱图（20 µg/L）的多反映监测（MRM）色谱图 ______________________