ICS 11.120.20 C 30 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5127.4—2019 植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中 有毒有害物质的测定 第 4 部分：柠檬酸迁 移量 酸碱中和滴定法 2019 - 12 - 27 发布 河北省市场监督管理局 2020 - 01 - 28 实施 发 布 DB13/T 5127.4—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5127《植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中有毒有害物质的测定》共分16个部分： ——第1部分：柠檬酸钠和乙二胺四乙酸二钾迁移量 原子吸收分光光度法； ——第2部分：二巯基丙醇迁移量 碘量法； ——第3部分：葡萄糖迁移量 碘量法； ——第4部分：柠檬酸迁移量 酸碱中和滴定法； ——第5部分：硫氰酸胍迁移量 分光光度法； ——第6部分：丙酮迁移量 气相色谱法； ——第7部分：丙交酯迁移量 气相色谱法； ——第8部分：对苯二甲酸迁移量 高效液相色谱法； ——第9部分：乙醇迁移量 气相色谱法； ——第10部分：环氧乙烷迁移量 气相色谱法； ——第11部分：戊二醛迁移量 高效液相色谱法； ——第12部分：异氰酸酯迁移量 高效液相色谱法； ——第13部分：甲醛迁移量 气相色谱质谱联用法； ——第14部分：蛋白质迁移量 可见-紫外分光光度法； ——第15部分：铅、砷、镉、铬、铜、锑、钡、铝、锌、锡迁移量 电感耦合等离子体质谱法； ——第16部分：生物负载 薄膜过滤法。 本部分为DB13/T 5127的第4部分。 本部分由河北省药品监督管理局提出并归口。 本部分起草单位：河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院、河北爱能生物科技股份有限公司、 河北中烟工业有限责任公司。 本部分主要起草人：杨光、郝红玲、刘华、徐兰举、丁春浦、刘若锦、王丽。 I DB13/T 5127.4—2019 植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中有毒有害物质的测定 第 4 部分：柠檬酸迁移量 酸碱中和滴定法 1 范围 本标准规定了植入性医疗器械高分子材料浸提液中柠檬酸迁移量的酸碱中和滴定法的测定方法。 本标准适用于植入性医疗器械高分子材料浸提液中柠檬酸迁移量的测定。 本方法柠檬酸的检出限为0.14 mg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 16886.12 医疗器械生物学评价 第12部分：样品制备与参照材料 3 方法原理 柠檬酸是有机酸，可用氢氧化钠滴定。滴定产物是强碱弱酸盐，滴定突跃在碱性范围内，可选用 麝香草酚酞（9.3（无色）-10.5（蓝色））为指示剂，用氢氧化钠溶液滴定至蓝色为终点。 4 试剂与材料 除另有规定外，所用的试剂应为优级纯，试验用水应符合GB/T 6682规定的二级水的要求。 4.1 柠檬酸标准品：CAS 号：77-92-9。 4.2 氢氧化钠标准滴定液：0.1 mol/L。 5 试剂配制 麝香草酚酞指示剂：取麝香草酚酞 0.1 g，加乙醇 100 mL 溶解。 6 仪器与设备 6.1 碱式滴定管。 6.2 电子天平，精度 0.1 mg。 6.3 容量瓶。 1 DB13/T 5127.4—2019 7 试液制备 7.1 浸提试验 7.1.1 浸提溶液 本标准采用模拟浸提方式，以水为浸提介质。 7.1.2 浸提条件和方法 7.1.2.1 浸提条件建立在通常可行并经论证为一个标准化方法的基础之上，在多数情况下为产品使用 的适当加严的条件。应在下列之一的条件下进行浸提： a) (37±1)℃,(24±2) h； b) (37±1)℃,(72±2)h； c) (50±2)℃,(72±2) h； d) (70±2)℃,(24±2) h； e) (121±2)℃,(1±0.1)h。 7.1.2.2 可用标准表面积确定所需的浸提介质的体积。标准表面积包括样品两面面积的总和，不包括 不确定和不规则面积。当由于样品外形不能确定其表面积时，应使用质量/浸提液体积。见表1。 表1 标准表面积和浸提液体积 厚度 浸提比例 （mm） （表面积或质量/体积）±10% 膜、薄片、管壁 ＜0.5 6 cm / mL 管壁、厚板、小型模制件 0.5～1.0 3 cm / mL 大型模制件 ＞1.0 3 cm / mL 弹性密封件 ＞1.0 1.25 cm / mL 粉剂、球体、泡沫材料、无吸收性模制件 不规则形状固体器械 0.2 g/ mL 薄膜、织物 不规则形状多孔器械（低密度材料） 0.1 g/ mL 材料形态举例 2 2 2 2 注1：现在尚无测试吸收剂和水胶体的标准化方法，推荐以下方案： 2 注2：测定材料浸提介质吸收量（每0.1 g或1.0cm 材料所吸收的量）； 2 注3：在进行浸提时，对浸提混合物按每0.1 g或1.0 cm 额外加入该浸提介质吸收量。 7.1.2.3 对于弹性体、涂层材料、复合材料、多层材料等，由于完整表面与切割表面存在潜在的浸提 性能差异，因此应尽量完整地进行浸提。 7.2 标准工作液制备 精密称取柠檬酸0.5 g，用水溶解，于100 mL容量瓶中，定容至刻度，混匀。制得约5 mg/mL柠檬 酸储备液。 用实验用水将5 mg/mL柠檬酸储备液配制成浓度分别为1.00 mg/mL、2.00 mg/mL、2.50 mg/mL、3.00 mg/mL、5.00 mg/mL柠檬酸系列标准溶液。 7.3 空白液制备 以同批浸提介质作为空白试验液。 2 DB13/T 5127.4—2019 8 测定 8.1 标准溶液测定 精密吸取标准溶液2.00 mL，至锥形瓶中，加入麝香草酚酞指示液2滴，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液 滴定至蓝色。 8.2 样品测定 精密吸取浸提液2.00 mL，至锥形瓶中，加入麝香草酚酞指示液2滴，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液滴 定至蓝色。 9 结果计算 浸提液中柠檬酸的含量按公式（1）计算。 …………………………………………（1） 式中： C——柠檬酸的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； V ——消耗 0.1 mol/L 氢氧化钠体积（mL）； f ——与1.0 mL0.1mol/L氢氧化钠对应的柠檬酸的量（f=7.005）； ρ ——稀释倍数。 样品中柠檬酸的特定迁移量按公式（2）计算。 M  C A  1000 …………………………………………（2） 式中： 2 M ——特定迁移量，mg/cm 或 mg/g； A ——浸提比例，cm2/ mL或g/mL。 计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。 10 确证 当浸提液中检出柠檬酸时，用附录A高效液相色谱法进行确证。 11 精密度 浸提液中目标物在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 3 DB13/T 5127.4—2019 附 录 A (规范性附录) 高效液相色谱法 A.1 原理 试样中的柠檬酸利用高效液相色谱柱分离，配有紫外（UV）检测器或二极管阵列(PDA)检测器的高 效液相色谱仪测定，外标法定量。 A.2 仪器与设备 A.2.1 高效液相色谱仪。 A.2.2 pH计。 A.2.3 阿贝折光仪。 A.3 色谱参考条件 根据所用仪器型号选择最佳测定条件。 参考条件：色谱柱：ODS-3 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）或与之相当的色谱柱；流动相：0.1 mol/L 磷酸二氢铵溶液，用磷酸调节 pH=2.4，过 0.45 μm 微孔滤；流速：0.6 ml/min；检测波长：210 nm； 色谱柱温度：40℃；进样体积：10 μL。 A.4 样品处理 将有代表性的样品用浸提液提取，混合均匀，选择适宜的稀释倍数，用0.45 μm微孔滤膜过滤或 离心获取上清液过0.45 μm微孔滤膜至样品瓶，供液相色谱分析。 A.5 测定 根据样液中被测物含量的情况，选定浓度相近的标准工作溶液，对标准工作溶液与样液等体积进 样测定，标准工作溶液和待测样液的响应值均在仪器检测的线性范围内。 _________________________________ 4