ICS 65.020.20 B 04 DB 12 天 津 市 地 方 标 准 DB12/T 885—2019 植物提取物中原花青素的测定 紫外/可见 分光光度法 Determination of polysaccharide in Lily Bulbus-UV/VIS spectrophotometry 2019 - 03 - 25 发布 天津市市场监督管理委员会 2019 - 05 - 01 实施 发 布 DB12/T 885—2019 前 言 本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由天津市农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所。 本标准主要起草人：刘征辉、赵琳琳、魏静娜、张强、赵云平、薛天凯、徐石勇、郑贵忠。 I DB12/T 885—2019 植物提取物中原花青素的测定 紫外/可见分光光度法 1 范围 本标准规定了采用紫外/可见分光光度法测定植物提取物中原花青素含量的原理、试剂材料、仪器 设备、分析步骤、分析结果表述和精密度。 本标准适用于植物提取物中原花青素的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 原花青素本身无色，但经过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子，用分光光度法测定原花 青素在水解过程中生成的花青素离子，计算试样中原花青素含量。 4 试剂和材料 4.1 试剂 4.1.1 4.1.2 4.1.3 4.1.4 4.1.5 甲醇 （CH3OH）。 正丁醇 (CH3(CH2)2CH2OH)。 盐酸 (HCL)：纯度为 35%～37%（g/g）。 硫酸铁铵(NH4Fe(SO4)2·12H2O)。 水（H2O）：GB/T 6682 规定的一级水。 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。 4.2 试剂配制 4.2.1 盐酸-正丁醇溶液：取正丁醇 50 mL，于 100 mL 容量瓶中，准确量取盐酸 5 mL，用正丁醇定容，摇 匀，备用。 4.2.2 2mol/L 盐酸溶液：准确量取盐酸 20 mL 于烧杯中，加 100 mL 水，摇匀，备用。 4.2.3 硫酸铁铵溶液：称取硫酸铁铵 2.0 g 于三角瓶中，加 2 mol/L 盐酸溶液，放置于沸水浴中，至其全 部溶解后，取出放置至室温，将其转移至 100 mL 容量瓶中用 2 mol/L 盐酸溶液定容至刻度。 4.3 标准品 原花青素标准品 纯度≥95% ，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 1 DB12/T 885—2019 4.4 标准溶液配制 4.4.1 原花青素标准储备液（1.0 mg/mL）：取原花青素标准品 10 mg，精密称定，置 10 mL 容量瓶中， 加甲醇溶解并定容至刻度，即得浓度为 1.0 mg/mL 标准储备液，溶液现用现配。 4.4.2 原花青素标准系列工作液：准确量取原花青素储备液 0.0 mL、0.10 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL 分别置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，的浓度为 0 μ g/mL、10.0 μ g/mL、25.0 μ g/mL、50.0 μ g/mL、100 μ g/mL、150 μ g/mL、200 μ g/mL、250 μ g/mL 的标准系列 工作溶液。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 紫外分光光度计，配 1 cm 比色杯，波长范围(110～900) nm。 超声波提取机。 涡旋混合仪。 天平：感量 0.01mg。 具盖安瓿瓶：10 mL。 封口钳。 容量瓶：10 mL、50 mL、100 mL。 6 分析步骤 6.1 供试品溶液的制备 取样品(10～100) mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加入30 mL甲醇，超声处理（功率250 W，频 率50 kHz）20 min，放至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，离心或放至澄清后取上清液作为供试品溶液。 如样品原花青素含量较高，再精密量取上清液10 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀， 作为供试品溶液。 6.2 测定 6.2.1 标准曲线的绘制 准确吸取原花青素标准系列工作液各1 mL，置于安瓿瓶中，精密加入盐酸-正丁醇溶液（4.2.1）6 mL， 硫酸铁铵溶液（4.2.3）0.2 mL，混匀，用封口钳将其密封，置沸水中加热40 min后，取出，立即置冰 水中冷却至室温，于546 nm波长处测吸光度，显色在1小时内稳定。 以吸光度为纵坐标，原花青素浓度为横坐标绘制标准曲线。 6.2.2 样品溶液的测定 精密吸取6.1项下的供试品溶液1 mL，置于安瓿瓶中，然后按照标准曲线制作步骤执行。以相应试 剂为空白。测定样品吸光度，用标准曲线计算试样中原花青素的含量。 7 分析结果表述 试样中原花青素的含量按式（1）计算： 2 DB12/T 885—2019 X c  V  V 2 1000 100 .............................. (1) m V 1 1000 1000 式中： X——试样中原花青素的含量，单位为克每100克（g/100g）； c——反应混合物中原花青素的量，单位为微克每毫升（μg/mL）； V——待测样液总体积，单位为毫升（mL）； V1——样液反应体积，单位为毫升（mL）； V2——样液反应后总体体积，单位为毫升（mL）； m——样液所代表的试样质量，单位为毫克（mg） 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。测定结果须 扣除空白值。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。 _________________________________ 3