ICS 13.020.40 Z 10 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3286—2020 水质 5 种磺胺类抗生素的测定 固相萃取/高效液相色谱-三重四极杆串联 质谱法 2020 - 08 - 30 发布 辽宁省市场监督管理局 2020 - 09 - 30 实施 发 布 DB21/T 3286—2020 目 前 次 言 ..............................................................................II 1 适用范围 .............................................................................1 2 规范性引用文件 .......................................................................1 3 方法原理 .............................................................................1 4 干扰和消除 ...........................................................................1 5 试剂 .................................................................................1 6 仪器和设备 ...........................................................................2 7 样品 .................................................................................2 8 分析步骤 .............................................................................3 9 结果计算与表示 .......................................................................5 10 精密度和准确度 ......................................................................6 11 质量保证和质量控制 ..................................................................7 12 废物处理 ............................................................................7 附录 A （资料性附录） 方法的精密度和准确度 ..............................................8 I DB21/T 3286—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则编写。 本标准附录A为资料性附录。 本标准由大连市市场监督管理局提出。 本标准由辽宁省生态环境厅归口。 本标准主要起草单位：辽宁省大连生态环境监测中心。 本标准主要起草人：付晓燕、刘莲莲、杨硕、杨萌。 本标准发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省生态环境厅（沈阳市浑南区双园路30甲），联系电话：024-62788517。 标准起草单位通讯地址：辽宁省大连生态环境监测中心（辽宁省大连市沙河口区连山街58号），联 系电话：0411-84691900。 II DB21/T 3286—2020 水质 5 种磺胺类抗生素的测定 固相萃取/高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法 警告：实验中所使用的甲醇、磺胺类抗生素属于有毒有机物，实验操作时应避免接触皮肤和衣物， 溶液配制过程应在通风橱内进行。 1 适用范围 本标准规定了测定水中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶和磺胺甲恶唑等 5 种磺胺类抗生素的高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法。 本标准适用于地表水、地下水、海水、工业废水和生活污水中 5 种磺胺类抗生素的测定。 当样品体积为100 ml，浓缩定容至1.0 ml，进样体积为10.0 μl时，本方法磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧 啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶和磺胺甲恶唑的检出限分别为0.01 μg/L、0.01 μg/L、0.01 μg/L、 0.009 μg/L和0.01 μg/L，测定下限分别为0.04 μg/L、0.04 μg/L、0.04 μg/L、0.036 μg/L和0.04 μg/L，测定上限均为100 μg/L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14581 水质 湖泊和水库采样技术指导 HJ 91.1 污水监测技术规范（部分代替HJ/T 91 污水监测技术规范） HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 HJ/T 164 地下水环境监测技术规范 HJ 442 近岸海域环境监测规范 HJ 493 水质 样品的保存和管理技术规定 3 方法原理 水样经固相萃取后，水中磺胺类抗生素经液相色谱仪分离，用串联质谱仪在多反应监测（MRM）条 件下测定，根据保留时间和特征离子对定性，内标法以峰面积（或峰高）定量。 4 干扰和消除 当样品中存在基质干扰时，可通过优化色谱条件、稀释样品、减少进样体积以及对样品进行预处理 等方式降低或消除。 5 试剂 1 DB21/T 3286—2020 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的优级纯试剂，实验用水符合 GB/T 6682，一级。 5.1 甲醇（CH3OH）：液相色谱纯。 5.2 甲酸（HCOOH）。 5.3 甲酸溶液：1+1000（V/V）。 量取1.0 ml甲酸（5.2）缓慢加入1 L实验用水中，混匀。 5.4 标准物质 5.4.1 磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑标准物质：纯度≥99%。 5.4.2 磺胺甲基嘧啶-13C6内标标准物质：纯度≥99%。 5.5 标准溶液 5.5.1 磺胺类抗生素标准贮备液：ρ=100.0 mg/L。 准确称取适量的每种磺胺类标准物质（5.4.1），用甲醇配成100.0 mg/L的标准贮备液，或直接购 买有证标准溶液，贮备液在0~4℃冷藏避光保存，可稳定保存20天，或参照制造商的产品说明保存。 5.5.2 磺胺类抗生素标准使用液：ρ=1.00 mg/L。 将磺胺类抗生素标准贮备溶液（5.5.1）用甲醇稀释至1.0 mg/L，现用现配。 13 5.5.3 磺胺甲基嘧啶- C6标准贮备液：ρ=100.0 mg/L。 13 准确称取适量的磺胺甲基嘧啶- C6标准物质（5.4.2），用甲醇（5.1）配成100.0 mg/L的标准贮备 液，或直接购买有证标准溶液，贮备液在0~4℃冷藏避光保存或参照制造商的产品说明保存使用。 5.5.4 磺胺甲基嘧啶-13C6标准使用液：ρ=1.0 mg/L。 13 将磺胺甲基嘧啶- C6标准贮备溶液（5.5.3）用甲醇（5.1）稀释至1.0 mg/L，现用现配。 5.6 氮气：纯度≥99.9%。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱/三重四极杆质谱仪：高效液相色谱仪具备梯度洗脱功能；三重四极杆质谱仪配有电 喷雾离子化源（ESI）。 6.2 色谱柱：填料为硅胶基质C18，粒径1.8 μm，柱长100 mm，内径2.1 mm，或其他等效色谱柱。 6.3 固相萃取装置。 6.4 浓缩装置：K-D 浓缩器、氮吹仪等性能相当的设备。 6.5 滤膜：针式有机相过滤器，孔径0.22 μm，直径13 mm，玻璃纤维、亲水性聚丙烯、亲水性聚四氟 乙烯（PTFE）或其它等效材质。 6.6 固相萃取柱：填料为二乙烯苯和 N-乙烯基吡咯烷酮共聚物或同等柱效的萃取柱，规格为 6 ml/500 mg。 6.7 棕色样品瓶：2.0 ml。 6.8 采样瓶：500 ml棕色玻璃瓶，螺旋盖（具聚四氟乙烯涂层的密封垫）。 6.9 微量注射器：10 μl、50 μl、100 μl、1 ml。 7 样品 7.1 样品采集与保存 2 DB21/T 3286—2020 按照GB/T 14581、HJ 91.1、HJ/T 91、HJ/T 164、HJ 442和HJ 493的相关规定进行样品的采集和保 存。 采集样品时，向采样瓶（6.8）中加入甲酸（5.2）500 μl，然后采集样品至满瓶，拧紧螺旋盖密 封，摇匀。水样0~4℃冷藏避光保存，48 h内完成分析。 7.2 试样制备 活化：用10 ml甲醇（5.1）活化固相萃取柱，保证固相萃取柱柱头浸润。再用10 ml实验用水活化 固相萃取柱，保证固相萃取柱柱头浸润。 上样：水样上样前放置至室温，准确量取100 ml水样，水样以3~5 ml/min的流速通过固相萃取柱。 淋洗：用10 ml实验用水淋洗固相萃取柱，将在固相萃取柱上保留较弱的杂质淋洗下来，弃去淋洗 液。 洗脱：用10 ml甲醇（5.1）洗脱富集后的固相萃取柱，并用接收管接收甲醇洗脱液。 浓缩：将上述提取溶液浓缩至低于1.0 ml近干，加甲酸溶液（5.3）定容到1.0 ml，最后加入内标 使用液10.0 μl，经0.22 μm滤膜（6.5）过滤，置于棕色样品瓶（6.7）中，待测定。 7.3 空白试样的制备 用实验用水代替样品按照试样制备（7.2）相同操作步骤，制备空白试样。 8 分析步骤 8.1 仪器参考条件 8.1.1 液相色谱仪参考条件 流动相：流动相A为甲醇（5.1），流动相B为甲酸溶液（5.3），线性梯度洗脱程序见表1。 柱温：40℃； 进样体积：10 μl； 流速：0.2 ml/min； 表1 液相色谱流动相线性梯度洗脱程序 8.1.2 质谱仪参考条件 3 时间（min） 流动相 A（%） 流动相 B（%） 0 5 95 0.5 5 95 5.0 30 70 7.0 30 70 7.5 90 10 8.5