ICS 11.220 B 41 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 4039—2020 鸡肉中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱－串联质谱法 Determination of fipronil and its metabolite residues in chicken by liquid chromatography tandem mass spectrometry 2020 - 07 - 09 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 08 - 09 实施 发 布 DB37/T 4039—2020 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 试验原理 .......................................................................... 1 4 试剂或材料 ........................................................................ 1 5 仪器设备 .......................................................................... 2 6 试样的制备 ........................................................................ 2 7 试验步骤 .......................................................................... 2 7.1 7.2 7.3 7.4 提取 .......................................................................... 净化 .......................................................................... 标准曲线的制备 ................................................................ 测定 .......................................................................... 2 2 2 2 8 数据处理 .......................................................................... 4 9 检测方法的准确度和精密度 .......................................................... 4 9.1 准确度 ........................................................................ 4 9.2 精密度 ........................................................................ 4 附录 A（资料性附录） 氟虫腈及其代谢物参考质量色谱图 .................................. 5 I DB37/T 4039—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准主要起草单位：山东省兽药质量检验所、威海市畜牧业发展中心。 本标准主要起草人：尹伶灵、陈玲、李有志、杨修镇、刘少宁、魏秀丽、牛华星、张呈军、陈志强、 赵国清。 II DB37/T 4039—2020 鸡肉中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱－串联质谱法 1 范围 本标准规定了鸡肉中氟虫腈及其代谢物（氟甲腈、氟虫腈硫醚和氟虫腈砜）残留量检测的液相色谱 －串联质谱测定方法。 本标准适用于鸡肉中氟虫腈及其代谢物残留量的检测。 本方法检出限为0.5 μg/kg，定量限为2.0 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 试验原理 鸡肉中的氟虫腈及其代谢物经乙腈提取后，加入氯化钠进行分层，经PRiME HLB固相萃取柱净化后， 液相色谱-串联质谱负离子模式测定，基质匹配外标法定量。 4 试剂或材料 除非另有规定，所用试剂均为分析纯。 4.1 水：符合国标 GB/T 6682 一级水的规定。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 氯化钠。 4.4 20 %乙腈水溶液：准确量取乙腈（4.2）20 mL，加水稀释至 100 mL。 4.5 氟虫腈对照品、氟虫腈砜对照品、氟虫腈硫醚对照品和氟甲腈对照品，含量≥95 %。 4.6 氟虫腈及其代谢物标准储备液：分别准确称取氟虫腈对照品、氟虫腈砜对照品、氟虫腈硫醚对照 品和氟甲腈对照品（4.5）各 10 mg，分别置于 100 mL 容量瓶中，用乙腈（4.2）配制成标准储备液(100 μg/mL)，转移至棕色试剂瓶中后，避光储存于冰箱中(-20 ℃)备用，有效期一年。 4.7 氟虫腈及其代谢物混合标准工作液：分别精密吸取氟虫腈和 3 种代谢物标准储备液（4.6）各 100 μL，置于同一 10 mL 容量瓶中，用 20 %乙腈水溶液（4.4）稀释至刻度摇匀，配制成浓度均为 1 μg/mL 的混合标准工作液，避光 0 ℃～4 ℃保存，有效期 2 周。 1) 4.8 PRiME HLB 固相萃取柱 或性能相当。 4.9 有机滤膜：0.22 μm。 1) 非商业性声明：本试验是利用此固相萃取柱做的净化处理，此处列出的固相萃取柱仅是为了提供参考，并不涉 及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同型号的固相萃取柱。 1 DB37/T 4039—2020 5 仪器设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。 分析天平：感量 0.000 01 g、0.01 g。 均质机。 涡旋混合器。 离心机：转速不低于 4 000 r/min。 6 试样的制备 取适量新鲜或冷藏的鸡肉，均质机搅碎，-20 ℃以下保存。 7 试验步骤 7.1 提取 称取试样2 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管内，加水10 mL，涡旋1 min。再加乙腈（4.2） 10 mL，振荡10 min。然后加入氯化钠4 g（4.3），剧烈振摇1 min，4 000 r/min离心5 min。 7.2 净化 取上清液0.5 mL淋洗HLB固相萃取柱，流出液弃去。再加入上清液1.5 mL，过HLB固相萃取柱，收集 流出液备用。精密吸取上述流出液0.5 mL加水定容至1.0 mL，0.22 μm滤膜过滤后，供液相色谱-串联 质谱测定。 7.3 标准曲线的制备 用基质液分别制备成系列浓度为：0.1 μg/L、0.2 μg/L、0.5 μg/L、1.0 μg/L、2.0 μg/L、 5.0 μg/L、10.0 μg/L的标准工作液，供液相色谱-串联质谱测定。 7.4 测定 7.4.1 色谱参考条件 色谱柱：C18 50 mm×2.1 mm，粒径1.7 μm，或相当者。 流动相：流动相A：乙腈；流动相B：水。 流速：0.2 mL/min。 进样量：2 μL。 柱温：35 ℃。 流动相梯度洗脱条件见表1。 表1 流动相梯度洗脱条件 时间 流速 A相 B相 min mL/min % % 0 0.2 20 80 2.0 0.2 70 30 2 DB37/T 4039—2020 表 1 流动相梯度洗脱条件（续） 时间 流速 A相 B相 min mL/min % % 3.5 0.2 90 10 4.5 0.2 20 80 6.0 0.2 20 80 7.4.2 质谱参考条件 离子源：电喷雾离子源。 扫描模式：负离子扫描。 检测方式：多反应离子检测（MRM）。 脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮或其他合适气体。 锥孔电压、碰撞能量等应优化至最优灵敏度。 监测离子参数情况见表2。 表2 氟虫腈及其代谢物的定性定量离子对以及锥孔电压、碰撞能量 药 物 氟虫腈 定量离子对 锥孔电压 碰撞能量 m/z m/z V eV 435.1＞329.9 8 451＞281.7 26 419.1＞262 8 387＞350.9 20 435.1＞329.9 435.1＞249.9 451＞281.7 氟虫腈砜 氟虫腈硫醚 定性离子对 451＞415 419.1＞262 419.1＞383.1 氟甲腈 387＞350.9 387＞281.9 18 26 32 24 34 16 14 48 7.4.3 定性测定 通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液各 色谱峰的特征离子相对照定性。试料与标准品保留时间的相对偏差不大于2.5 %；试料特征离子的相对 丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断试料中存在氟虫腈及其代谢物残 留。 表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度（%） ＞50 ＞20 至 50 ＞10 至 20 ≤10 允许的相对偏差（%） ±20 ±25 ±30 ±50 7.4.4 定量测定 取基质匹配标准对照溶液和试料溶液，按外标法，以峰面积定量，标准对照溶液及试料溶液中的待 测物响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，标准对照溶液中特征离子参考质 量色谱图参见附录A。 3 DB37/T 4039—2020 8 数据处理 试料中待测物的残留