(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221084043 3.2 (22)申请日 2022.07.18 (83)生物保 藏信息 GDMCC No： 62289 2022.03.11 (71)申请人 南京工业大 学 地址 211816 江苏省南京市浦口区浦珠南 路30号 (72)发明人 江凌　杨智晗　朱政明　朱丽英　 杨蕾　陈盈利　 (74)专利代理 机构 江苏致邦律师事务所 32 230 专利代理师 尹妍　徐蓓 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A23K 20/147(2016.01) C12R 1/145(2006.01) (54)发明名称 一种微生物发酵合成单细胞蛋白及其制备 方法和应用 (57)摘要 本发明提供一种微生物发酵合成单细胞蛋 白及其制备方法和应用， 以废弃虾蟹 壳粉作为氮 源， 酪丁酸梭菌作为微生物种源发酵获取所述单 细胞蛋白。 所述废弃虾蟹壳粉由餐厨垃圾中的废 弃虾蟹壳清洗、 干燥、 研磨制成， 不经过酸碱处 理。 分离得到的单细胞蛋白含有丰富的氨基酸， 达到17种， 可以作为单细胞蛋白饲料营养的补 充。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 115305219 A 2022.11.08 CN 115305219 A 1.一种微生物发酵合成单细胞蛋白的方法， 其特征在于， 以废弃虾蟹壳粉作为氮源， 酪 丁酸梭菌作为 微生物种源发酵获取 所述单细胞蛋白。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述废弃虾蟹壳粉由餐厨垃圾中的废弃虾 蟹壳清洗、 干燥、 研磨制成， 不经 过酸碱处 理。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 包括： 将废弃虾蟹壳清洗、 干燥、 研磨制成废弃虾蟹壳粉； 将所述废弃虾蟹壳粉添加至酪丁 酸梭菌生长的培 养基中； 将酪丁酸梭菌过夜培养的种子液接种至所述培养基， 静置培养2~3d后， 将发酵液离心 分离、 重悬洗涤收集菌体与虾蟹壳粉残留物， 冻干 至恒重， 即为所述单细胞蛋白产品。 4.根据权利要求1或3所述的方法， 其特征在于， 所述废弃虾蟹壳粉的粒径小于100目筛 网的孔径。 5.根据权利要求1或3所述的方法， 其特征在于， 酪丁酸梭菌发酵的培养基由碳源、 氮源 和无机盐组成； 发酵的碳源选用葡萄糖， 以所述废弃虾蟹壳粉作为唯一氮源。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述无机盐包括氯化钠、 磷酸氢二钾、 硫酸 镁和七水合硫酸 亚铁。 7.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 酪丁酸梭菌发酵的培养基中碳氮比为8/ 0.875~8/1.75； 优选8/1.75 。 8. 根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述酪丁酸梭菌为酪丁酸梭菌 （Clostridium tyrobutyricum ） L319， 保藏编号GDM CC No： 62289。 9.一种微生物发酵合成单细胞蛋白， 其特征在于， 利用权利要求1~8任一项所述方法制 备得到。 10.权利要求9所述 微生物发酵合成单细胞蛋白在制备饲养肥 料中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115305219 A 2一种微生物发酵 合成单细胞蛋白及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及 微生物单细胞蛋白领域， 特别是一种酪丁酸梭菌发酵废 弃虾蟹壳粉生 产的单细胞蛋白及其应用。 背景技术 [0002]在养殖业的发展现状下， 原料的缺乏特别是蛋白资源短缺限制了行业的稳定发 展。 微生物发酵合成单细胞蛋白(S CP)是利用非致病性微生物在适宜的条件下培养， 将营养 基质在其自身生命周期下转化为菌体蛋白。 与传统动植物蛋白合 成相比， S CP的效率往往能 够达到上千倍， 同时S CP富含氨基酸、 维生素等， 营养价值高。 此外， S CP的生产可以利用许多 廉价易得的农耕废弃物以及工业废气， 可以有效的降低温室气体二氧化碳的排放， 促进农 业稳定可持续的发展。 [0003]废弃虾蟹壳资源分布广泛， 全球每年有800 ‑1000万吨虾蟹壳垃圾产生， 废弃虾蟹 壳的综合利用存在巨大问题。 酪丁酸梭菌作为一种新型益生菌， 其主要产物丁酸(钠)已被 农业部列入饲料添加剂品种目录， 且其在肠道治疗方面有了实际的应用， 所以被认为是更 好的生产SCP的底盘细胞。 但是目前SCP的绿色生产研究较少， 且很难满足实际大规模生产 的需求， 主要问题是(1)营养基质来源局限， 还是以高成本的酵母粉、 蛋白胨等作为氮源； (2)蛋白营养功能单一， 缺少更广的应用潜力。 此外， 对于酪丁酸梭菌来生产单细胞蛋白饲 料以及发酵废弃虾蟹壳生产单细胞蛋白至今均没有报道。 发明内容 [0004]本发明第一目的是提供一种微生物发酵合成单细胞蛋白的方法， 该方法可有效解 决废弃虾蟹壳综合利用差的问题， 填补了酪丁酸梭菌发酵废弃虾蟹壳生产营养丰富的单细 胞蛋白的空白。 [0005]为实现上述 技术目的， 本发明采用如下技 术方案： [0006]一种微生物发酵合成单细胞蛋白的方法， 以废弃虾蟹壳粉作为氮源， 酪丁酸梭菌 作为微生物种源发酵获取 所述单细胞蛋白。 [0007]作为一种优选 的实施方式， 所述废弃虾蟹壳粉由餐厨垃圾中的废弃虾蟹壳清洗、 干燥、 研磨制成， 不经 过酸碱处 理。 [0008]作为一种优选的实施方式， 所述方法包括： [0009]将废弃虾蟹壳清洗、 干燥、 研磨制成废弃虾蟹壳粉； [0010]将所述废弃虾蟹壳粉添加至酪丁 酸梭菌生长的培 养基中； [0011]将酪丁酸梭菌过夜培养的种子液接种至所述培养基， 静置培养2～3d后， 将发酵液 离心分离、 重悬洗涤收集菌体与虾蟹壳粉残留物， 冻干 至恒重， 即为所述单细胞蛋白产品。 [0012]作为一种优选的实施方式， 所述废弃虾蟹壳粉的粒径小于10 0目筛网的孔径。 [0013]作为一种优选的实施方式， 酪丁酸梭菌 发酵的培养基由碳源、 氮源和无机盐组成； 发酵的碳源选用葡萄糖， 以所述废弃虾蟹壳粉作为唯一氮源。说　明　书 1/3 页 3 CN 115305219 A 3