ICS 71.100.70 Y 42 DB 37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 4089—2020 化妆品中硫柳汞和苯基汞的测定 谱-原子荧光光谱法 液相色 Determination of ethylmercurithiosalicylic acid and diphenylmercury in cosmetics—Liquid chromatography-atomic fluorescence spectrometry 2020 - 08 - 20 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 09 - 20 实施 发 布 DB37/T 4089—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由山东省市场监督管理局提出、归口并组织实施。 本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心、南京市 产品质量监督检验院。 本标准主要起草人：李林林、徐正、郗丹、刘金霞、邓宁、宋才湖、凡书杰、冯文君、孙逸文、陈 月、许士明、周莉莉、邹惠玲、苏本玉、侯广月、王一村、陈小岑。 I DB37/T 4089—2020 化妆品中硫柳汞和苯基汞的测定 液相色谱-原子荧光光谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中硫柳汞和苯基汞含量的测定方法——液相色谱-原子荧光光谱法。 本标准适用于液态、半固态等乳霜类和部分膏霜类化妆品中硫柳汞和苯基汞含量的测定。 本方法检出限：硫柳汞和苯基汞均为0.1 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 化妆品中硫柳汞和苯基汞经乙腈提取后，经C18反相色谱柱分离，色谱流出液进入在线紫外消解系 统，在紫外光照射下与强氧化剂反应将有机汞氧化成无机汞。在酸性介质中无机汞被硼氢化钾或硼氢化 钠还原成原子态汞，由载气带入原子化器中。在特制汞空心阴极灯照射下，基态汞原子被激发至高能态， 在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与汞含量成正比。按保留时间定性，外标法 定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所有试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 乙腈：色谱纯。 4.1.2 乙酸铵。 4.1.3 L-半胱氨酸。 4.1.4 硼氢化钾。 4.1.5 氢氧化钾。 4.1.6 硝酸。 4.1.7 盐酸。 4.2 试剂配制 1 DB37/T 4089—2020 4.2.1 流动相（5%乙腈+0.5%乙酸铵+0.1% L-半胱氨酸）：称取 2.5 g 乙酸铵、0.5 g L-半胱氨酸，加水 溶解，加入 25 mL 乙腈，用水定容至 500 mL。经 0.45 μm 有机相微孔滤膜过滤后，于超声水浴中超声 脱气 30 min。现配现用。 4.2.2 盐酸溶液[10%（v/v）]：量取 100 mL 盐酸，溶于水并稀释至 1 000 mL。 4.2.3 硝酸溶液[20%（v/v）]：量取 200 mL 硝酸，溶于水并稀释至 1 000 mL。 4.2.4 硝酸溶液[1%（v/v）]：量取 10 mL 硝酸，溶于水并稀释至 1 000 mL。 4.2.5 氢氧化钾溶液（5 g/L）：称取 5 g 氢氧化钾，溶于水并稀释至 1 000 mL。 4.2.6 硼氢化钾溶液（2 g/L）：称取 2 g 硼氢化钾，用 5 g/L 氢氧化钾溶液溶解并定容至 1 000 mL。 现配现用。 4.3 标准品 4.3.1 硫柳汞（CAS 号：54-64-8），纯度不低于 99.0%。 4.3.2 苯基汞（CAS 号：62-38-4），纯度不低于 99.0%。 4.4 标准溶液配制 4.4.1 标准储备溶液（1.0 mg/mL）：精密称取硫柳汞（4.3.1）和苯基汞标准品（4.3.2）适量（精确至 0.01 mg），分别置于 10 mL 容量瓶中，用乙腈定容，配成浓度为 1.0 mg/mL 的标准贮备溶液。0 ℃～4 ℃ 密封保存，有效期 3 个月。 4.4.2 硫柳汞和苯基汞混合标准使用液 （10.00 mg/L）：分別准确吸取 1.0 mL 硫柳汞标准储备液（4.4.1） 、 1.0 mL 苯基汞标准储备液（4.4.1）于 100 ml 容量瓶中，加水稀释并定容至刻度。现配现用。 4.4.3 硫柳汞和苯基汞混合标准系列溶液：取 6 支 10 mL 容量瓶，分别准确加入 10.00 mg/L（4.4.4.2） 混合标准使用液 0.00 μL、20.0 μL、40.0 μL、60.0 μL、80.0 μL、100.0 μL，加水稀释至刻度，此标准系 列溶液的浓度分别为 0.0 μg/L、20.0 μg/L、40.0 μg/L、60.0 μg/L、80.0 μg/L、100.0 μg/L。现配现用。 4.5 材料 4.5.1 有机相微孔滤膜：0.45 μm。 4.5.2 离心管：50 mL。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱-原子荧光光谱联用仪（LC-AFS）：由液相色谱仪、在线紫外消解系统及原子荧光光谱 仪组成。 5.2 分析天平：感量分别为 1 mg 和 0.01 mg。 5.3 超声波清洗器。 5.4 涡旋混合器。 5.5 离心机：转速不低于 6 000 r/min。 注：玻璃器皿使用前经硝酸（4.2.3）浸泡24 h后，清洗、晾干后备用。 6 试验步骤 6.1 提取 2 DB37/T 4089—2020 称取试样1.0 g（精确至0.001 g），置于50 mL离心管中，准确加入20 mL乙腈，摇匀，超声提取10 min， 6 000 r/min离心10 min。取上清液过0.45 μm的微孔滤膜，供上机测定。同时作空白试验。 6.2 液相色谱参考条件 6.2.1 色谱柱：C18 柱，250 mm×4.6 mm(i.d.)，5 μm，或性能相当者。 6.2.2 流动相：5%乙腈水溶液（含 0.5%乙酸铵和 0.1% L-半胱氨酸）。 6.2.3 流速：1.0 mL/min。 6.2.4 柱温：常温。 6.2.5 进样体积：50 μL。 6.3 原子荧光检测参考条件 6.3.1 负高压：320 V。 6.3.2 汞灯总电流：30 mA。 6.3.3 紫外灯（UV）：开。 6.3.4 载气流速：400 mL/min。 6.3.5 辅助气流速：400 mL/min。 6.3.6 载液：10%盐酸溶掖，流速 4 mL/min。 6.3.7 还原剂：2 g/L 硼氢化钾溶液，流速 4 mL/min。 6.4 测定 分别上机测定标准系列溶液和试样溶液。试样溶液与标准溶液中硫柳汞和苯基汞的保留时间相对偏 差在±2.5 %之内，硫柳汞和苯基汞标准溶液图谱参见附录A。以硫柳汞和苯基汞的浓度为横坐标，以其 响应值（峰面积）为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线相关系数不低于0.997。硫柳汞和苯基汞的响应 值应在标准工作曲线测定的线性范围内。如超出线性范围，应稀释（n倍）后，重新进样分析。 7 试样数据处理 试样中硫柳汞和苯基汞含量以质量分数Xi计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，多点校准按式(1) 计算： Xi  Ci  C 0 ×V  1000 ×n 1000  1000  m ................................................................. (1) 式中： Xi——试样中硫柳汞和苯基汞的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； Ci——从标准曲线查得的试样溶液硫柳汞和苯基汞的浓度，单位为微克每升（μg/L）； C0——空白溶液中硫柳汞和苯基汞的浓度，单位为微克每升（μg/L）； v ——提取液的体积，单位为毫升（mL）； m ——试样的质量，单位为克（g）； n ——上机测定的试样溶液超出线性范围后，进一步稀释的倍数。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 3 DB37/T 4089—2020 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。 4 DB37/T 4089—2020 AA 附 录 A （资料性附录） 硫柳汞和苯基汞的典型色谱图 硫柳汞和苯基汞标准溶液色谱图见图A.1。 图A.1 硫柳汞和苯基汞标准溶液色谱图 _________________________________ 5