ICS 67 X 04 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5189.1—2020 天然植物提取物中危害成分检测 第 1 部分：亚硝酸盐的测定 2020 - 06 - 28 发布 河北省市场监督管理局 2020 - 07 - 28 实施 发 布 DB13/T 5189.1—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5189《天然植物提取物中危害成分的测定》共分12个部分： ——第 1 部分：亚硝酸盐的测定； ——第 2 部分：二氧化硫的测定； ——第 3 部分：正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇 5 种有机溶剂残留的测定； ——第 4 部分：辣椒提取物中砷、铅、镉、铬、汞的测定； ——第 5 部分：万寿菊提取物中对氧基苯胺的测定； ——第 6 部分：万寿菊提取物中乙氧基喹啉的测定； ——第 7 部分：天然番茄红中苯并[α ]芘的测定； ——第 8 部分：辣椒提取物中苏丹红的测定； ——第 9 部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定； ——第 10 部分：辣椒红中赭曲霉毒素 A 的测定； ——第 11 部分：叶黄素中苯的测定； ——第 12 部分：甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定。 本部分为DB13/T 5189的第1部分。 本标准由河北省市场监督管理局提出。 本部分起草单位：河北省食品检验研究院、晨光生物科技集团股份有限公司、石家庄海关技术中 心、清河县食品药品检验检测中心。 本部分主要起草人：史国华、郭美娟、杨清山、张兰天、田丽娜、艾连峰、马新颜。 I DB13/T 5189.1—2020 天然植物提取物中危害成分检测 第1部分：亚硝酸盐的测定 1 范围 本部分规定了天然植物提取物中亚硝酸盐的测定方法。 本部分适用于天然植物提取物中亚硝酸盐的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定。试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐 与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，采用紫外分光光度法，在538 nm 处测吸光度，外标法测得亚硝酸盐含量。 4 试剂或材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。 4.1 试剂 4.1.1 亚铁氰化钾[K4Fe（CN）6·3H2O]。 4.1.2 乙酸锌[Zn（CH3COO）2·2H2O]。 4.1.3 硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）。 4.1.4 盐酸（HCl，ρ =1.19 g/mL）。 4.1.5 对氨基苯磺酸（C6H7NO3S）。 4.1.6 盐酸萘乙二胺（C12H14N2·2HCl）。 4.2 试剂配制 4.2.1 亚铁氰化钾溶液（106 g/L）：称取 106.0 g 亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至 1000 mL。 4.2.2 乙酸锌溶液（220 g/L）： 称取 220.0 g 乙酸锌，先加 30 mL 冰乙酸溶解，用水稀释至 1000 mL。 4.2.3 饱和硼砂溶液（50 g/L）： 称取 5.0 g 硼酸钠，溶于 100 mL 热水中，冷却后备用。 4.2.4 盐酸（20 %）：量取 20 mL 盐酸，用水稀释至 100 mL。 1 DB13/T 5189.1—2020 4.2.5 对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：称取 0.4 g 对氨基苯磺酸，溶于 100 mL 20 %盐酸中，混匀，置 棕色瓶中，避光保存。 4.2.6 盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取 0.2 g 盐酸萘乙二胺，溶于 100 mL 水中，混匀，置棕色瓶 中，避光保存。 4.3 标准品 4.3.1 亚硝酸钠（NaNO2，CAS 号：7632-00-0）：基准试剂，或采用具有标准物质证书的亚硝酸盐标 准溶液。 4.4 标准溶液配制 4.4.1 亚硝酸钠标准溶液（200 μ g/mL，以亚硝酸钠计）：称取 0.1 g（精确到 0.1 mg）于 110℃～ 120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解，移入 500 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。 4.4.2 亚硝酸钠标准使用液（5.0 μ g/mL）：临用前，吸取 5.50 mL 亚硝酸钠标准溶液，置于 100 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。 5 仪器和设备 5.1 天平：感量为 1 mg 和 0.1 mg。 5.2 恒温干燥箱。 5.3 分光光度计。 6 试验步骤 6.1 试样提取 称取均匀样品5 g（精确至0.001 g），置于250 mL具塞锥形瓶中，加15.5 mL 50 g/L饱和硼砂溶液， 加入70℃左右的水约150 mL，混匀，于沸水浴中加热15 min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。将 上述提取液全部转移至200 mL容量瓶中，加入5 mL106 g/L亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5 mL 220 g/L 乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置30 min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤， 弃去初滤液30 mL，滤液备用。 6.2 测定 吸取40.0 mL上述滤液于50 mL带塞比色管中，另吸取0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL、1.50 mL、5.00 mL、5.50 mL亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0 μg、1.0 μg、5.0 μg、4.0 μg、4.0 μg、5.0 μg、7.5 μg、10.0 μg、15.5 μg亚硝酸钠），分别置于50 mL带塞比色管中。于标准管 与试样管中分别加入2 mL 4 g/L对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3 min～5 min后各加入1 mL 2 g/L盐酸萘 乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15 min，用1 cm比色皿，以零管调节零点，于波长538 nm处测吸 光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。 7 试验结果 2 DB13/T 5189.1—2020 试样中亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量按式（1）计算。 X m1 1000 ………………………………………………（1） V1 m  1000 V0 式中： X --试样中的亚硝酸盐的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； m1 --测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为毫克（µg）； 1000--转化系数； m --试样质量，单位为克（g）； V1 --测定用样液体积，单位为毫升（mL）； V0 --试样处理液总体积，单位为毫升（mL）。 计算结果保留两位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。 9 检出限和定量限 检出限为0.5 mg/kg，定量限为1.5 mg/kg。 _________________________________ 3