ICS 65.120 B 20 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 294—2020 代替 DB 22/T 294-2001 玉米蛋白粉中粗蛋白的掺伪鉴别方法 Adulteration identification method for crude protein content in corn protein powder 2020 - 10 - 14 发布 吉林省市场监督管理厅 2020 - 10 - 30 实施 发 布 DB22/T 294—2020 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 和 GB/T 20001.4-2015 给出的规则起草。 本标准代替 DB22/T 294-2001《玉米蛋白粉中粗蛋白的掺伪鉴别与快速测定方法》。与 DB22/T 294-2001 相比，除编辑性修改外主要技术变化如下： ——标准名称修改为《玉米蛋白粉中粗蛋白的掺伪鉴别方法》； ——删除规范性引用文件中引用标准年代号（见 2001 年版的 2）； ——删除方法提要，改为原理（见 3，2001 年版的 3）； ——仪器设备中增加凯氏蒸馏装置（见 5.3）； ——删除仪器中基尔特克 1030 自动分析仪，改为自动凯氏定氮仪（见 5.6，2001 年版的 4）； ——增加实验步骤中的计算公式（见 7.1.1）； ——删除掺假率的测定（见 2001 年版的 7.6）； ——对本标准中试验步骤进行修改并规范表述。 本标准由长春海关技术中心提出。 本标准由长春海关归口。 本标准起草单位：长春海关技术中心、吉林大学。 本标准主要起草人：王岸英、李爱军、刘洋、刘博阳、李嘉慧。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——DB22/T 294-2001 I DB22/T 294—2020 玉米蛋白粉中粗蛋白的掺伪鉴别方法 1 范围 本标准规定了饲料用玉米蛋白粉中粗蛋白的掺伪鉴别方法。 本标准适用于疑似掺入玉米粉、尿素、三聚氰胺的饲料用玉米蛋白粉的掺伪鉴别。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 6432-2018 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 3 原理 玉米蛋白粉中总氮主要以两种形式存在，即氨基酸和酰胺。玉米蛋白粉标准样在催化加热条件下被 分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以盐酸标准溶液滴定，根据 酸的消耗量计算总氮含量。玉米蛋白粉标准样中酰胺直接碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以盐酸标准 溶液滴定，得到直接蒸馏法滴定体积。利用总氮含量与酰胺滴定体积的固定比例关系，建立总氮含量与 直接蒸馏法消耗体积的回归方程。待测样品通过以上两种方法蒸馏，得到样品总氮含量与直接蒸馏法消 耗体积，通过对样品的总氮含量及直接蒸馏法消耗体积与回归方程的比较进行掺伪鉴别。 4 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。试剂若无特别说明按 照GB/T 603标准要求配制。 4.1 硼酸：化学纯。 4.2 氢氧化钠：化学纯。 4.3 硫酸：化学纯。 4.4 混合催化剂：称取 0.4 g 五水硫酸铜、6.0 g 硫酸钾或硫酸钠，研磨混匀；或购买商品化的凯氏 定氮催化剂片。 4.5 玉米蛋白粉标准样：8 组蛋白质含量不同（40%～70%）的玉米蛋白粉标准样。 4.6 硼酸吸收液：称取 20 g 硼酸，用水溶解并稀释至 1 000 mL。 4.7 氢氧化钠溶液：称取 40 g 氢氧化钠，用水溶解，待冷却至室温后，用水稀释至 100 mL。 4.8 盐酸标准滴定溶液:c（HCl）= 0.1 mol/L，按 GB/T 601 配制和标定。 4.9 甲基红乙醇溶液：称取 0.1 g 甲基红，用乙醇溶解并稀释至 100 mL。 1 DB22/T 294—2020 4.10 溴甲酚绿乙醇溶液：称取 0.5 g 溴甲酚绿，用乙醇溶解并稀释至 100 mL。 4.11 混合指示剂溶液： 将甲基红乙醇溶液和溴甲酚绿乙醇溶液等体积混合。该溶液室温避光保存， 有效期 3 个月。 5 仪器设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 6 分析天平：感量 0.0001 g. 消煮炉或电炉。 凯氏烧瓶：250 mL。 消煮管：250 mL。 凯氏蒸馏装置。 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动定氮仪。 样品 按照GB/T 6432-2018 中 6 方法进行样品制备。 7 试验步骤 7.1 掺假鉴别回归方程的建立 7.1.1 总氮含量的测定 称取充分混匀的玉米蛋白粉标准样 0.1 ~ 0.4 g (约相当于 30 mg ~ 40 mg 氮,精确至 0.001 g), 至消化管中,再加入 6.4 g 混合催化剂及 15 mL 硫酸进行消化。当消化管中的液体呈绿色透明状停止 加热。总氮含量按照 GB/T 6432-2018 中 7.2.2 方法测定。同时做试剂空白,通过公式（1）计算得到 总氮含量Yi。 Yi  14  6.25 1000  100 ............................ (1) V' m V (V2  V1 )  c  式中： V2 ——滴定试样所消耗盐酸标准滴定溶液体积，单位为毫升（mL）； V1 ——滴定空白所消耗盐酸标准滴定溶液体积，单位为毫升（mL）； c ——盐酸标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）； m ——试样质量，单位为克（g）； V ——试样消煮液总体积，单位为毫升（mL）； V’ ——蒸馏用消煮液体积，单位为毫升（mL）； 14 ——氮的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol）； 6.25——氮换算成粗蛋白的平均系数。 每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，计算结果表示至小数点后三位。 7.1.2 2 直接蒸馏法消耗标准溶液滴定体积的测定 DB22/T 294—2020 称取 1.0 g(精确至 0.001 g)试样于蒸馏管内，加入 30 mL 硫酸钠溶液，充分混合后置于蒸馏管， 按照 GB/T 6432-2018中7.2.2方法测定。同时做试剂空白，得到直接蒸馏法消耗标准溶液滴定体积 Xi。 7.1.3 回归方程 将所测得的 Yi 与 Xi 列表，利用 Yi 与 Xi 的相关性建立回归方程，见公式（2），计算出系数a，b： Y  aX  b ....................................... (2) 式中： Y ——总氮含量，单位为百分比（%）； X ——直接蒸馏法滴定体积，单位为毫升（mL）。 7.1.4 计算剩余标准差 将上面得到的8组 Yi 与 Xi 代入回归方程得到的 Y 值按下式计算，得到剩余标准差 S，见公式（3）： 8 S  (Y  Y ) i 1 2 i 6 .................................... (3) 式中： Yi ——7.1.1中得到的总氮含量 Y ——7.1.2中得到的直接蒸馏法消耗标准溶液滴定体积 Xi 代入公式（2）得到的 Y 值 7.2 样品测定 将待测试样按7.1.1、7.1.2方法测定,得到总氮含量 Y样 与直接蒸馏法消耗标准溶液滴定体积 X样 8 试验数据处理 将试样测得总氮含量 Y样值带入到鉴别公式（4）中，若 Y样 值落在下面的控制区间内（一般置信 水平为95%），则说明试样正常；若超出控制区间说明试样异常。 鉴别结果计算见公式（4）： ‘ a ( X 样  1.96 S )  b  Y样  ( X 样  1.96 S )  b ........................ (4) 式中： a，b——式（2）中得到的系数； X样 ——试样得到的直接蒸馏法消耗标准溶液滴定体积； S ——式（3）中得到的剩余标准差。 3 DB22/T 294—2020 AA 附 录 A （资料性附录） 建立掺假鉴别回归方程的参考样例 按照7.1.1中方法称取8组玉米蛋白粉标准样，按照7.1建立回归方程，得到表A.1列出的回归方程。 表A.1 1 2 玉米蛋白粉标准样建立的回归方程及相关系数 3 4 5 6 7 8 回归 方程 相关系 数 R 直接蒸 馏 法体积 2.282 2.318 2.617 2.707 3.204 3.509 3.705 4.240 y = （mL） 17.69x 凯氏定 + 氮法 总氮含 40.975 41.598 47.633 48.695 57.132 62.986 66.507 75.649 0.9995 0.7901 量（%） 根据回归方程按照式（3）计算剩余标准差S：S=0.304，按照7.2中方法测定样品，得到直接滴定体 积X样=2.496mL和总氮含量Y样=45.963%，根据鉴别公式（4）Y样=45.963%落在置信区间内，则认为有95% 的置信度证明该玉米蛋白粉没有掺伪。 该样例为实验室检测数据。仅供参考。 _________________________________ 4