ICS 67.080.20 B 31 江 DB36 西 省 地 方 标 准 DB36/T 1397-2021 畜禽羽（毛）中利巴韦林及其代谢物残留量 的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of residues of ribavirin and its metabolite in animal feather (hair)——HPLC-MS/MS method 2021 - 04 - 23 发布 江西省市场监督管理局 2021 - 11 - 01 实施 发 布 DB36/T 1397-2021 目 次 前言 .................................................................................................................................................................... II 1 范围 .............................................................................................................................................................. 1 2 规范性引用文件 .......................................................................................................................................... 1 3 原理 .............................................................................................................................................................. 1 4 试剂和材料 .................................................................................................................................................. 1 5 仪器和设备 .................................................................................................................................................. 2 6 试样制备与保存 .......................................................................................................................................... 3 7 测定步骤 ...................................................................................................................................................... 3 8 结果与计算 .................................................................................................................................................. 5 9 方法灵敏度、准确度和精密度....................................................................................................................5 附录 A（资料性）利巴韦林、1H-1,2,4-三氮唑-3-甲酰胺和 13C5-利巴韦林定量离子色谱图 ................. 6 I DB36/T 1397-2021 前 言 本文件是按照GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江西省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所，南昌市农业科学院。 本文件主要起草人：周瑶敏，徐俊，赖博文，许晶晶，周军，罗林广，胡丽芳，费丹，邬磊，谢敏， 闵佳玲，侯玉洁，肖勇，万伟杰，姚瑶，余云云。 II DB36/T 1397-2021 畜禽羽（毛）中利巴韦林及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联 质谱法 1 范围 本文件规定了畜禽羽（毛）中利巴韦林及其代谢物液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于猪、牛、羊、鸡羽（毛）中利巴韦林及其代谢物1H-1,2,4-三氮唑-3-甲酰胺残留量的 测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样经2 %甲酸-甲醇溶液提取，乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷（C18）分散净化，液 相色谱-串联质谱测定，同位素内标法定量。 4 试剂和材料 4.1 试剂 水符合GB/T 6682规定的一级水。 4.1.1 甲醇：色谱纯。 4.1.2 甲酸：色谱纯。 4.1.3 乙酸铵：色谱纯。 4.2 溶液配制 4.2.1 1 %SDS：称取 1 g 十二烷基磺酸钠，加水溶解，转移至 100 mL 容量瓶中，定容至刻度，混匀。 4.2.2 2 %甲酸-甲醇：量取 2 mL 甲酸（4.1.2），加甲醇（4.1.1）稀释，转移至 100 mL 容量瓶中， 用甲醇（4.1.1）定容至刻度，混匀。 4.2.3 2 mmol/L 乙酸铵溶液：称取约 154 mg 乙酸铵（4.1.3），加水溶解，转移至 1000 mL 容量瓶中， 定容至刻度，混匀。 4.3 标准品 1 DB36/T 1397-2021 4.3.1 利巴韦林（Ribavirin，CAS 号：36791-04-5），纯度 ≥ 98.0%。 4.3.2 1H-1,2,4-三氮唑-3-甲酰胺（TCONH2，CAS 号：3641-08-5），纯度 ≥98.0%。 4.3.3 13C5-利巴韦林（13C5-Ribavirin，CAS 号：1646818-35-0），纯度≥ 99.0%。 4.4 标准溶液的配制 4.4.1 100 mg/L 标准储备液：分别准确称取利巴韦林和 TCONH2 标准品各 1 mg（精确至 0.1 mg）， 分别于 10 mL 容量瓶中，用甲醇配制成 100 mg/L 的标准储备液，于-18 ℃下保存，有效期 6 个月。 4.4.2 1 mg/L 混合标准中间液：用移液管吸取 1 mL 利巴韦林和 TCONH2 标准储备液（4.4.1）于 100 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀得到 1 mg/L 的混合标准中间液，于 4 ℃下保存，有效期 3 个月。 4.4.3 100 mg/L 内标储备液：准确称取 13C5-利巴韦林标准物质约 1 mg，精密称定，于 10 mL 容量瓶 中，用甲醇配制成 100 mg/L 的内标储备液，于-18 ℃下保存，有效期 6 个月。 4.4.4 1 mg/L 内标中间液：用移液管吸取内标储备液（4.4.3）1 mL 于 100 mL 容量瓶中，用甲醇稀释 至刻度，摇匀得到 1mg/L 的内标中间液，于 4 ℃下保存，有效期 3 个月。 4.4.5 混合标准工作溶液：根据每种标准的灵敏度和线性范围，移取适量的混合标准中间液（4.4.2） 和内标中间液（4.4.4），用水稀释至合适浓度，临用现配。 4.5 材料 4.5.1 4.5.2 4.5.3 4.5.4 乙二胺-N-丙基硅烷（PSA），粒径 40 μm-60 μm。 十八烷基硅烷（C18），粒径 40 μm-60 μm。 十二烷基磺酸钠（SDS）。 微孔滤膜：有机相：0.22 μm。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 液相色谱-串联质谱：配电喷雾离子源。 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。 高速离心机：转速 ≥ 5000 r/min。 涡旋仪。 恒温烘箱。 氮吹仪。 水浴恒温振荡器。 6 试样制备与保存 6.1 试样制备 从动物毛发根部剪取羽（毛），用1 % SDS（4.2.1）清洗羽（毛）30 min，然后用水冲洗干净，再 用试纸吸干水，于45 ℃烘箱中烘1 h，剪碎成1 mm-2 mm。 6.2 试样保存 常温下放干燥器中保存。 7 测定步骤 2 DB36/T 1397-2021 7.1 提取 准确称取 0.2 g（精确至 0.1 mg）上述处理的羽（毛）样品于 50 mL 具塞离心管中，分别加入 10 μL C5-利巴韦林内标中间液（4.4.4）和 10 mL 2 %甲酸-甲醇（4.2.2）溶液，置于 65 ℃水浴 2 h，取出，涡 旋 1 min，超声 15 min，在 5000 r/min 下离心 5 min，取上清液于另一 50 mL 具塞离心管中。离心后的 残渣加入 10 mL 2 %甲酸-甲醇（4.2.2）溶液，重复提取一次，合并上清液，混匀。 13 7.2 净化 将 7.1 上清液中加入 150 mg PSA 和 150 mg C18 吸附剂，涡旋 30 s，然后在 5000 r/min 下离心 5 min， 收集上清液至离心管中并在 45 ℃条件下氮气吹至近干，残渣用 1 mL 0.1 %甲酸水溶液溶解，过 0.22 μm 的滤膜，供测定。 7.3 色谱质谱参考条件 7.3.1 液相色谱参考条件如下： a）色谱柱：ZORBAX SB-Aq（100 mm×3.0 mm，1.8 μm），或性能相当者； b）流动相：流动相