ICS 67.080.20 B 31 江 DB36 西 省 地 方 标 准 DB36/T 1399-2021 畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物残留量的 测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of residues of fipronil and its metabolites in animal feather (hair)— HPLC-MS/MS method 2021 - 04 - 23 发布 1 管理局 江西省市场监督 2021 - 11 - 01 实施 发 布 DB36/T 1399-2021 目 次 前言 .................................................................................................................................................................... II 1 范围 .............................................................................................................................................................. 1 2 规范性引用文件 .......................................................................................................................................... 1 3 原理 .............................................................................................................................................................. 1 4 试剂和材料 .................................................................................................................................................. 1 5 仪器和设备 .................................................................................................................................................. 2 6 试样制备与保存 .......................................................................................................................................... 3 7 测定步骤 ...................................................................................................................................................... 3 8 结果与计算 .................................................................................................................................................. 5 9 方法灵敏度、准确度和精密度....................................................................................................................5 附录 A（资料性）氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准溶液定量离子色谱图......................... 6 I DB36/T 1399-2021 前 言 本文件是按照GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江西省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所，南昌市农业科学院。 本文件主要起草人：徐俊，费丹，赖博文，胡丽芳，周瑶敏，谢敏，张金艳，周军，侯玉洁，张标 金，姚瑶，郑小明，闵佳玲。 II DB36/T 1399-2021 畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质 谱法 1 范围 本文件规定了畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物残留量的液相色谱-串联质谱检测方法。 本文件适用于猪、牛、羊、鸡畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样经乙腈和水混合震荡提取，乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷（C18）分散净化，液 相色谱-串联质谱测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 4.1.2 4.1.3 4.1.4 4.1.5 乙腈：色谱纯。 甲醇：色谱纯。 甲酸：色谱纯。 乙酸铵：色谱纯。 氯化钠：分析纯，140 ℃烘烤 4 h。 4.2 溶液配制 4.2.1 5 mmol/L 乙酸铵溶液：称取 0.38 g 乙酸铵（4.1.4），加水溶解，转移至 1000 mL 容量瓶中，定 容至刻度，混匀。 4.2.2 5 mmol/L 乙酸铵甲醇溶液：称取 0.38 g 乙酸铵（4.1.4），加甲醇溶解，转移至 1000 mL 容量瓶 中，用甲醇定容至刻度，混匀。 4.2.3 5 %吐温 80：取 5 mL 吐温 80，加水溶解，转移至 100 mL 容量瓶中，定容至刻度，混匀。 4.2.4 1 %SDS：称取1 g十二烷基磺酸钠，加水溶解，转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，混匀。 1 DB36/T 1399-2021 4.3 标准品 氟虫腈（CAS：205650-69-7）、氟甲腈（CAS：205650-65-3）、氟虫腈砜（CAS：120068-36-2）、 氟虫腈亚砜（CAS：120067-83-6），纯度均 ≥ 98.0%。 4.4 标准溶液的配制 4.4.1 标准储备液（1.0 mg/mL）：分别准确称取氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准品各 10 mg（精确至 0.1 mg），分别于 10 mL 容量瓶中，用甲醇分别配制成 1.0 mg/mL 的标准储备液，于-18 ℃ 下保存，有效期 6 个月。 4.4.2 标准中间液（10.0 mg/L）：用移液管吸取 1.0 mL 标准储备液（4.4.1）于 100 mL 容量瓶中，用 甲醇分别稀释成质量浓度为 10.0 mg/L 的标准中间液，于 4 ℃下保存，有效期 3 个月。 4.4.3 标准工作液（1.0 mg/L）：用移液管吸取上述标准中间液（4.4.2）各 1.0 mL 于 10 mL 容量瓶中， 用甲醇分别稀释成质量浓度为 1.0 mg/L 的标准工作液，临用现配。 4.5 材料 4.5.1 4.5.2 4.5.3 4.5.4 4.5.5 乙二胺-N-丙基硅烷（PSA），粒径 40 μm-60 μm。 十八烷基硅烷（C18），粒径 40 μm-60 μm。 十二烷基磺酸钠（SDS）。 微孔滤膜：有机相，0.22 μm。 吐温 80。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 液相色谱-串联质谱仪（配有电喷雾离子源）。 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。 高速离心机：转速≥5000 r/min。 涡旋仪。 恒温烘箱。 水浴恒温振荡器。 氮吹仪。 超声波清洗器。 6 试样制备与保存 6.1 试样制备 取适量代表性试样，用 5 %吐温 80（4.2.3）或 1 % SDS（4.2.4）清洗羽（毛）30 min，然后用水冲 洗干净，再用试纸吸干水，于 45 ℃烘箱中烘 1 h 取出，剪碎成 1 mm-2 mm。 6.2 试样保存 常温下放干燥器中保存。 7 测定步骤 2 DB36/T 1399-2021 7.1 提取 准确称取 0.2 g（精确至 0.1 mg）上述处理的羽（毛）样品于 15 mL 具塞离心管中，加入 3 mL 乙 腈（4.1.1）和 3 mL 水混合，涡旋 1 min，45 ℃水浴震荡 4 h，超声 10 min，加入 4 g 氯化钠，涡旋 1 min， 在 5000 r/min 下离心 5 min，转移上清液于另一离心管中，离心后的残渣加入 3 mL 乙腈和 3 mL 水重复 提取一次，合并上清液，混匀。 7.2 净化 将7.1所得合并上清液加入50 mg PSA和50 mg C18吸附剂，涡旋1 min，然后在5000 r/min下离心5 min，收集上清液至离心管中并在45℃条件下氮气吹至近干，残渣用1 mL水溶解，过0.22 μm滤膜，供测 定。 7.3 色谱质谱参考条件 7.3.1 液相色谱参考条件如下： a）色谱柱：C18（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），或性能相当者。 b）流动相：5 mmol/L乙酸铵溶液（A相），5 mmol/L乙酸铵甲醇溶液（B相）。 c）流速：0.3 mL/min。 d）柱温：35 ℃。 e）进样量：5.0 μL。 f）流动相和梯度洗脱条件见表1。 表 1 梯度洗脱程序 时间，min 流动相A，% 流动相B，% 0.0 30 70 1.5 30 70 3.0 0 100 4.0 0 100 4.5 30 70 7.0 30