(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211063953.3 (22)申请日 2022.09.01 (71)申请人 北京格致博雅 生物科技有限公司 地址 102629 北京市大兴区中关村科技园 区大兴生物医药产业基地华佗路50号 院17号楼1层 (72)发明人 陈志强　李尚桐　梁齐齐　 (74)专利代理 机构 北京中南长风知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11674 专利代理师 陈自科 (51)Int.Cl. C12M 1/00(2006.01) C12M 1/26(2006.01) C12N 5/00(2006.01) C12N 11/089(2020.01)C12N 11/14(2006.01) (54)发明名称 一种单细胞分选固定装置及分选固定方法 (57)摘要 本发明公开了一种单细胞分选固定装置及 分选固定方法， 涉及生物基因技术领域， 主要目 的在于提供一种能够显著提高试验速度， 能够显 著提升单细胞捕获率， 降低多胞率， 且有效去除 破碎细胞和游离RNA/DNA的单细胞分选固定装置 及分选固定方法。 主要采用的技术方案为:单细 胞分选固定体， 其为圆柱型结构并采用矩阵孔板 制成； 矩阵孔板上设置有若干个矩阵孔， 矩阵孔 位于所述单细胞分选固定体内表面处的孔径大 于矩阵孔位于单细胞分选固定体外表面处的孔 径； 矩阵孔内的内表面采用阶梯两段式内表面设 计， 矩阵孔内的内表面包括第一段内表面和位于 第一段内表 面下方的第二段内表 面， 第一段内表 面与矩阵孔板底面的夹角 小于第二段内表面与 矩阵孔板底面的夹角。 权利要求书2页 说明书4页 附图2页 CN 115386453 A 2022.11.25 CN 115386453 A 1.一种单细胞分选固定装置， 其特 征在于： 其包括: 单细胞分选固定体， 其 为圆柱型 结构并采用矩阵孔板制成； 所述矩阵孔板上设置有若干个矩阵孔， 所述矩阵孔位于所述单细胞分选固定体 内表面 处的孔径大于所述矩阵孔位于所述单细胞分选固定体外表面处的孔径； 所述矩阵孔内的内 表面采用阶梯两段式内表面设计， 所述矩阵孔内的内表面包括第一段内表面和位于所述第 一段内表面下方的第二段内表面， 所述第一段内表面与所述矩阵孔板底面的夹角小于第二 段内表面与所述矩阵孔板底面的夹角； 所述矩阵孔板内外表面均通过硅氢加成反应在其表 面接枝生物素化牛血清白蛋白， 通过激光销蚀将通过硅氢加成反应在其表面接枝生物素化 牛血清白蛋白的所述矩阵孔板内外表面除第二段内表面外进行光刻制备出化学成分异质 的细胞非粘附面， 通过所述硅氢加成反应在其表 面接枝生物素化牛血清白蛋白的第二段内 表面未进行激光销蚀光刻形成细胞粘附面。 2.根据权利要求1所述的单细胞分选固定装置， 其特 征在于， 所述矩阵孔板以聚二 甲基硅氧烷和 Fe3O4纳米颗粒混合形成的复合材料为基材注形并 打孔形成。 3.根据权利要求1所述的单细胞分选固定装置， 其特 征在于， 所述矩阵孔板以聚二甲基硅氧烷和含有Fe、 Co、 Ni的顺磁材料混合形成的复合材料为 基材注形并打孔形成。 4.根据权利要求1所述的单细胞分选固定装置， 其特 征在于， 所述矩阵孔的尺寸 为200*200微米大小。 5.根据权利要求1所述的单细胞分选固定装置， 其特 征在于， 每个矩阵孔采用圆台 式造型结构。 6.根据权利要求1所述的单细胞分选固定装置， 其特 征在于， 所述第一段内表面与所述矩阵孔板底面夹角为15 ° ‑30°； 所述第二段内表面与所述矩阵孔板底面夹角为 45° ‑60°。 7.根据权利要求1所述的单细胞分选固定装置， 其特 征在于， 所述矩阵孔 位于所述单细胞分选固定体外表面处的端面采用镂空设计。 8.根据权利要求1所述的单细胞分选固定装置， 其特 征在于， 采用172nm准分子紫外激光， 以铜网为光掩模， 通过激光销蚀将通过硅氢加成反应在其 表面接枝生物素化牛血清白蛋白的所述矩阵孔板内外表面除第二段内表面外进行光刻制 备出化学成分异质的细胞非粘附面。 9.一种单细胞分选固定方法， 其特 征在于， 其包括以下步骤： S1、 在细胞悬液中加入磺基琥珀酰 亚胺‑6‑(生物素)己酸； S2、 将单细胞分选固定体的一个端面用密封膜密封住， 然后将制备好的细胞悬液倒入 单细胞分选固定体中， 最后将单细胞分选固定体的另一个端面用密封膜密封住， 确保没有 液体从两个端面漏出； S3、 将装有细胞悬液的密封单细胞分选固定体固定到离心机转子上， 确保单细胞分选 固定体的轴心与转子的轴心处于同一条直线上， 以100～ 400转/分钟的速度进 行离心， 单细 胞分选固定体内的细胞固定 到矩阵孔中， 缓冲液、 破碎细胞以及游离RNA/DNA被排出； S4、 缓冲液排出后， 对单细胞分选固定体内壁进行清洗， 将未固定到矩阵孔内或者未完权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115386453 A 2全粘附到矩阵孔内表面的细胞清洗掉。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115386453 A 3