ICS 65.020.30 CCS B40 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2154—2021 瘤胃保护性氨基酸稳定性检验 Test method for the stability of rumen-protected amino acid 2021-04-15 发布 2021-05-15 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2154—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、伊金霍洛旗文兵农业机械服务企业。 本文件主要起草人：孙海洲、桑丹、金鹿、李胜利、张春华、张崇志、刘和平、王泽平、王永荣、 韩文兵、刘要仙、赵晓华、王东兵。 I DB15/T 2154—2021 瘤胃保护性氨基酸稳定性检验 1 范围 本文件规定了瘤胃保护性氨基酸稳定性检验方法。 本文件适用于瘤胃保护性氨基酸测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 5009.124 食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 RPAA释放率 rumen protected amino acid release rate RPAA经消化，被降解的氨基酸含量占RPAA中氨基酸含量的百分比。 4 试剂和材料 4.1 试剂 4.1.1 磷酸氢二钠（Na2HPO4）：优级纯。 4.1.2 碳酸氢钙（NaHCO3）：优级纯。 4.1.3 氯化钠（NaCl）：优级纯。 4.1.4 氯化钾（KCl）：优级纯。 4.1.5 氯化钙（CaCl2）：优级纯。 4.1.6 硫酸镁（MgSO4）：优级纯。 4.1.7 人工唾液：将 9.30 g 磷酸氢二钠、9.80 g 碳酸氢钙、0.47 g 氯化钠、0.57 g 氯化钾、0.04 g 氯化钙及 0.12 g 硫酸镁先溶于少量蒸馏水中，再定容至 1000 mL 水中。 4.1.8 过瘤胃保护性氨基酸（RPAA）：购买产品。 4.2 材料 尼龙袋：选用孔径为50 µm的尼龙布，制成长×宽为 6 cm×10 cm 的尼龙袋，用细涤纶线双线缝 合，袋底部两角呈钝圆形，散边用烙铁烫平或用酒精灯烤焦。 5 仪器和设备 1 DB15/T 2154—2021 5.1 分析天平：感量 0.0001 g。 5.2 烘箱：25 ℃～300 ℃。 5.3 恒温水浴摇床：25 ℃～99.9 ℃。 6 测定步骤 6.1 RPAA 在人工唾液中稳定性检验 准确称取0.5 g RPAA，于50 mL具塞试管底部，加入20 mL人工唾液（4.1.7），盖紧试管塞，在39 ℃、 100转/分的恒温水浴摇床内消化2 h，4 h，8 h，12 h，16 h和24 h后分别取出，定性滤纸过滤，蒸馏 水冲洗3遍，将滤渣置于65 ℃烘箱中烘干，按照GB 5009.124规定的方法测定不同时间点残渣中的氨基 酸含量，计算氨基酸释放率。 6.2 RPAA 在瘤胃液中稳定性检验 选择孔径为50 μm的尼龙布，用细涤纶线双线缝合，制成长×宽为6 cm×10 cm的尼龙袋，尼龙袋 边缘用烙铁熨烫使其无散边，用油性笔标号，放入瘤胃内72 h，取出、洗净、65 ℃烘干，备用。准确 称取5 g RPAA放入尼龙袋内，将有待测样品的样袋交叉夹于一根半软塑料管底端的夹缝中，用橡皮筋缠 绕固定,于晨饲后2 h投入瘘管羊瘤胃内，用塑料管上端的尼龙线与瘘管盖固定。将待测样品在瘘管羊瘤 胃中消化2 h，4 h，8 h，12 h，16 h和24 h后分别取出，用中等流速自来水冲洗1 min，将滤渣置于65 ℃ 烘箱中烘干，按照GB 5009.124规定的方法测定不同时间点内尼龙袋中残留的氨基酸含量，计算氨基酸 释放率。 6.3 RPAA 在十二指肠中稳定性检验 采集绵羊十二指肠液200 mL，经四层纱布过滤后取滤液装入250 mL三角瓶内，准确称取0.5 gRPAA， 放入50 mL具塞试管底部，盖紧试管塞，在39 ℃、100转/分恒温水浴摇床内消化2 h，4 h，8 h，12 h， 16 h和24 h后分别取出，定性滤纸过滤，蒸馏水冲洗3遍，按照GB 5009.124规定的方法测定残渣中的氨 基酸含量，计算氨基酸释放率。 6.4 平行试验 每试样称取两个平行样进行测定，取平均值为分析结果。 7 结果计算 RPAA在人工唾液、瘤胃液及十二指肠液中的释放率按公式（1）计算。 …………………………………（1） 式中： R——RPAA的释放率，单位为百分比（%）； w1——RPAA中氨基酸含量，单位为纳摩尔每毫升（nmol/ml）； w2——消化后残留物中氨基酸的含量，单位为纳摩尔每毫升（nmol/ml）。 取两次测定的算数平均值作为结果，保留到小数点后一位。 2 DB15/T 2154—2021 在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10 %。 3