(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210630595.3 (22)申请日 2022.06.06 (71)申请人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 夏李群　李恭会　丁理峰　薛丁玮　 (74)专利代理 机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 专利代理师 万尾甜　韩介梅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) A61K 31/7088(2006.01)A61K 45/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) (54)发明名称 环状RNA cir cTFDP2及其siRNA在诊断、 治疗 前列腺癌中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种环 状RNA circTFDP2及其 siRNA在诊断、 治疗前列腺癌中的应用， 通过荧光 定量PCR法发现circTFDP2在前列腺癌组织中表 达显著升高， 且表 达水平与Gleason评分正相关， 且circTFDP2在前列腺癌患者前列腺按摩后尿 液 中检测到其表达水平与前列腺癌组织表达水平 正相关； circTFDP2在前列腺癌细胞中的表达水 平显著高于前列腺正常上皮细胞， circTFDP2过 表达后能够显著促进前列腺癌的增殖、 迁移、 侵 袭， 以及体内异种移植小鼠肿瘤模 型的肿瘤生长 及肿瘤远端 转移； 采用siRNA靶向敲低cir cTFDP2 会显著抑制前列腺癌细胞的增殖、 迁移、 侵袭和 体内肿瘤生长及远端转移。 circTFDP2在前列腺 癌诊断和/或预后评估以及 治疗方面具有重要的 作用， 可以作为前列腺癌诊断生物标志物及治疗 靶点。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图4页 CN 115074438 A 2022.09.20 CN 115074438 A 1.circTFDP2作 为诊断标志物在制备用于诊断和/或评估前列腺癌试剂中的应用， 所述 circTFDP2的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 通过检测circTFDP2在前列腺或前列腺按 摩后尿液外泌体中的表达水平以诊断和/或评估前列腺癌。 3.用于诊断和/或评估前列腺癌的试剂盒， 其特征在于， 含有特异性扩增circTFDP2的 引物。 4.根据权利要求3所述的用于诊断和/或评估前列腺癌的试剂盒， 其特征在于， 所述特 异性扩展circTFDP2的引物为： 上游引物序列为SEQ  ID No.2， 下游引物序列为SEQ  ID  No.3。 5.根据权利要求3所述的用于诊断和/或评估前列腺癌的试剂盒， 其特征在于， 所述试 剂盒中检测样本为前列腺按摩后尿液。 6.circTFD P2作为治疗 靶点在制备用于治疗前列腺癌药物中的应用。 7.circTFDP2  siRNA在制备用于治疗前列腺癌药物中 的应用， 所述药物以circTFDP2为 治疗靶点， 所述circTFDP2  siRNA包括如SEQ  ID No.4、 如SEQ  ID No.5所示核苷酸序列中的 至少一种。 8.一种前列腺癌的治疗药物， 其特征在于， 所述药物含有具有如SEQ  ID No.4、 如SEQ   ID No.5所示序列中至少一种的核酸、 生物活性功能片段或变 体。 9.根据权利要求8所述的药物， 其特征在于， 所述药物包括药学上可接受的载体或辅 料。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115074438 A 2环状RNA circTFDP2及其 siRNA在诊断、 治疗前列腺癌中的 应用 技术领域 [0001]本发明属于肿瘤诊断及生物医药工程领域， 涉及一种内源性环状RNA及其反义核 酸的新用途， 具体涉及环状RNA  circTFDP2及其反义核酸在诊断和治疗前列腺癌中的应用。 背景技术 [0002]前列腺癌是男性中最常见的实体器官恶性肿瘤。 近年来， 中国前列腺癌的发病率 呈逐年上升趋势， 已成为影响中 国中老年男性健康的重要疾病。 前列腺血清 抗原(PSA)的测 定是目前早期 筛查前列腺癌的最主要方法。 然而， PSA筛查往往导致患者过度诊断和过度治 疗。 前列腺癌患者的临床治疗需要考虑 多种因素， 包括分期、 组织病理学、 分子特征、 患者背 景。 对于早期局限性前列腺癌行前列腺癌根治术达到良好的治疗效果， 甚至得以治愈。 但中 国近30％的前列腺癌患者初诊时已发生转移， 内分泌治疗转移 性前列腺癌能延 长患者生存 期， 改善生活质量， 但最终前列腺癌会进展为激素抵抗性前列腺癌  (CRPC)。 CRPC最主要的 治疗药物包括多西他赛化疗以及恩杂鲁胺、 阿比特龙等新型内分泌治疗， 但临床治疗 费用 高昂且患者受益有限。 因此迫切需要发现新的前列腺癌生物 标志物用于早期 检测以及前列 腺癌的靶向治疗， 降低前列腺癌 患者的死 亡率， 提高患者 生活质量。 [0003]环状RNA是一类新的非编码RNA， 由前体RNA的反向剪接形成。 大量环状RNA已被发 现并在各种生理和病理过程中发挥重要作用。 以往研 究表明环状 RNA通过吸附microRNAs (miRNAs)或与蛋白结合 发挥其功能。 最近的研究表明， 环状RNA可以通过帽子结构非依赖性 翻译或m6A依赖性翻译编码独特的多肽。 在肿瘤的发生发展中， circRNA被发现参与干细胞 多能性维持、 细胞分化、 细胞周期和凋亡、 血 管生成等过程影响肿瘤的进 展及转移。 [0004]外泌体是由脂质双层膜包围的纳米级(30 ‑150nm)细胞外囊泡。 外泌体是由内泌体 途径产生的， 可以被大多数类型 的细胞释放到体液中。 外泌体携带大量特异性的蛋白质以 及功能性的DNA、 mRNA、 miRNA和环状RNA等， 在体内参与细胞通讯、 细胞迁移、 促血管新生等 生理过程， 与包括肿瘤在内多种疾病的发生与进程密切相关。 外泌体分布在外周血、 尿液、 唾液、 乳汁、 腹水、 羊水等体液中， 外泌体的各个组分既可以成为疾病诊断的标志物， 又可作 为疾病治疗的特异性靶点。 [0005]本发明通过RT ‑PCR技术在50对配对的前列腺癌及癌旁组织中进行筛选， 发现环状 RNA circTFDP2(circbase  ID:hsa_circ_0008304)在前列腺癌组织显著高表达， 且其表达 水平与前列腺癌Gleason评分正相关。 首次揭示了circTFDP2  与前列腺癌的关系。 且本发 明 通过功能实验， 证实了过表达circTFDP2促进前列 腺癌增殖转移， 干扰circTFDP2表达可以 抑制前列腺癌增殖转移。 而且circTFDP2  存在于前列腺癌细胞培养液及前列腺癌患者前列 腺按摩后尿液外泌体中。 本发明提供了一种 前列腺癌的诊治靶点， 具有重要的临床应用价 值。说　明　书 1/6 页 3 CN 115074438 A 3