ICS 65.100.01 CCS B 17 13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5423—2021 水果和蔬菜中氯虫苯甲酰胺农药残留量分 析技术指南 2021 - 07 - 28 发布 2021 - 08 - 28 实施 河北省市场监督管理局 发 布 DB 13/T 5423—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本文件由河北省农业农村厅提出。 本文件起草单位：河北省农药检定监测总站、河北农业大学植保学院、河北翔致检测技术有限 公司。 本文件主要起草人：杨殿贤、武丽芬、刘云肖、周静、田建芳、李思涵、刘颖超、张晓光、范朋 微。 I DB 13/T 5423—2021 水果和蔬菜中氯虫苯甲酰胺农药残留量分析技术指南 1 范围 本文件规定了水果和蔬菜中氯虫苯甲酰胺残留量分析的原理、试剂与材料、仪器和设备、试样 制备、测定步骤、结果计算、精密度、定量限和回收率等。 本文件适用于利用液相色谱-质谱联用法分析水果和蔬菜中氯虫苯甲酰胺残留量。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第1部分：总则与定义 GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样用乙腈提取，经分散固相萃取净化，液相色谱-质谱联用仪测定，外标法定量。 5 试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为色谱纯试剂，水为GB/T 6682规定的一级水。 试剂 5.1.1 乙腈（C2H3N，CAS 号：75-05-8）。 5.1.2 甲酸（HCO2H，CAS 号：64-18-6）。 5.1.3 硫酸镁（MgSO4，CAS 号：7487-88-9），分析纯。 5.1.4 氯化钠（NaCl，CAS 号：7647-14-5），分析纯。 5.1.5 柠檬酸钠（Na3C6H5O7，CAS 号：6132-04-3），分析纯。 5.1.6 柠檬酸氢二钠（C6H6Na2O7，CAS 号：6132-05-4），分析纯。 5.1.7 丙酮（CH3COCH3，CAS 号：67-64-1)。 5.1.8 甲酸水溶液(0.05%)：取 0.5 mL 甲酸加水定容至 1000 mL，摇匀。 5.1.9 氯虫苯甲酰胺标准品（C18H14BrCl2N5O2，CAS 号：500008-45-7）：1000 mg/L。 5.1.10 标准储备溶液（100 mg/L）：将 1000 mg/L 的标准品用丙酮(5.1.7)稀释成 100 mg/L 的标准 储备溶液，摇匀。避光 0 ℃～4 ℃保存。 5.1.11 标准工作溶液：用乙腈(5.1.1)逐级稀释成 0.01 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L 和 0.5 mg/L 系列标准工作溶液。避光 0 ℃～4 ℃保存。 材料 5.2.1 乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：40 μm～60 μm。 5.2.2 微孔滤膜（有机相）：0.22 μm。 1 DB 13/T 5423—2021 5.2.3 陶瓷均质子：2 cm(长)×1 cm（外径）。 6 仪器和设备 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配电喷雾离子源（ESI）。 食品粉碎机。 分析天平：感量 0.01 g。 氮吹仪：温度范围 0～100 ℃。 离心机：转速不低于 4000 r/min。 漩涡混合器。 移液器：100μL～1000μL。 7 试样制备 水果、蔬菜样品取样部位按GB 2763相关要求执行，将样品切碎缩分后制成匀浆，装入洁净的容 器内待测。 8 测定步骤 前处理步骤 8.1.1 提取 准确称取10 g试样（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加10 mL乙腈(5.1.1)后涡旋提取4 min，加 入4 g硫酸镁(5.1.3)，1 g氯化钠(5.1.4)，1 g柠檬酸钠(5.1.5)，0.5 g柠檬酸氢二钠(5.1.6)以及2颗 陶瓷均质子，涡旋4 min后，以4000 r/min 离心5 min。 8.1.2 净化 吸取6 mL上清液加到内含0.9g硫酸镁(5.1.3)、0.15gPSA(5.2.1)的15 mL离心管中，涡旋4 min， 以4000 r/min离心5 min，准确吸取2 mL上清液于10 mL试管中，在80 ℃氮吹仪上吹至近干，先加入1 mL 乙腈(5.1.1)，再用水定容至2.0 mL，漩涡混合器混匀后，过微孔滤膜，待上机测定。 仪器参考条件 8.2.1 色谱参考条件 色谱柱：C18（3.0 mm I.D.×75 mm，3 μm）或性能相当者； 流动相A：0.05%甲酸水溶液(5.1.8)，流动相B：乙腈(5.1.1)，梯度洗脱程序见表1； 流速：0.5 mL/min； 柱温: 40 ℃； 进样量: 5 μL。 表1 流动相洗脱程序 时间（min） 流动相 B/(%) 流动相 A/(%) 0 10 90 5.0 95 5 8.0 95 5 8.1 10 90 11.5 10 90 8.2.2 质谱参考条件 离子源：电喷雾离子源（ESI）； 扫描方式：正离子扫描； 2 DB 13/T 5423—2021 检测方式：MRM，多重反应监测（MRM）条件参数见表2； 离子源温度：550℃； 离子化电压：5500V； 辅助加热气：50psi； 气帘气：20psi； 碰撞气：4 psi； 雾化气：50psi。 表2 多重反应监测（MRM）条件 名称 保留时间 定性离子对 定量离子对 去簇电压 射入电压 碰撞电压 碰撞池入口电 射出电压 (min) (m/z) (m/z) （DP） （EP） （CE） 压（CEP） （CXP） 42 5.1 21 19 2 37 5.1 27 19 4 氯虫苯甲酰胺 5.1 484.1/285.9 484.1/453.0 484.1/285.9 标准曲线 将空白基质溶液80 ℃氮气吹干，分别加入2 mL不同浓度的标准工作溶液（5.1.11）复溶，过微 孔滤膜配制成系列基质标准工作溶液，按参考仪器条件测定。以氯虫苯甲酰胺的质量浓度为横坐标， 以定量离子的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，基质标准工作溶液应现用现配。 注： 空白基质溶液取样量应与相应的试样处理取样量一致。 定性测定 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且在扣 除背景后的样品质谱图中，所选离子均出现，样品中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度 比与浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过表3规定的范围，则可判定样品中存在氯虫苯 甲酰胺。定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差详见表3。 表 3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50% ＞20%至 50% ＞10%至 20% ≤10% 允许相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 定量测定 本文件采用外标法定量。样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。待测样品溶液中的氯虫 苯甲酰胺的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超出线性范围应根据测定浓度与基质标 准溶液同步稀释后再进行分析。氯虫苯甲酰胺总离子流色谱图和选择离子色谱图参考附录A。 平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验。 空白试验 除不加试料外，采用完全相同的试剂、设备和测定步骤进行操作。 9 结果计算 氯虫苯甲酰胺残留量以质量分数ω计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算。 式中： 3 DB 13/T 5423—2021 ω——试样中氯虫苯甲酰胺的残留量，单位为毫克每千克(mg/kg)； V1——提取溶剂总体积，单位为毫升(mL)； A——试样溶液中氯虫苯甲酰胺的色谱峰面积； V3——试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)； ρ——标准溶液中氯虫苯甲酰胺的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)； V2——吸取出用于检测用的提取溶液的体积，单位为毫升(mL)； AS——标准溶液中氯虫苯甲酰胺的色谱峰面积； m——试样的质量，单位为克(g)。 注： 计算结果应扣除空白样品，测定结果用平行测定的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。 10 精密度 本文件精密度数据是按照GB/T 6379.1和GB/T 6379.2 的规定确定的，获得重复性限和再现性限 的值以95%的可信度来计算的。本标准方法的精密度数据参考附录B。 11 定量限和回收率 本方法的定量限为 0.01 mg/kg。 当添加水平为 0.01 mg/kg，0.5 mg/kg，2.0 mg/kg 时，添加回收率参考附录 C。 4 DB 13/T 5423—2021 A A 附 录 A （资料性） 氯虫苯甲酰胺标准物质总离子流色谱图和多反应监测（MRM）色谱图 A.1 氯虫苯甲酰胺标准物质总离子流色谱图和多反应监测（MRM）色谱图 TIC of +MRM (2 pairs): from Sample 5 (0.1by-001) of bzqx.wiff (Turbo Spray) Max. 6.2e4 cps. 5.12 6.2e4 6.0e4 5.5e4 5.0e4 4.5e4 In te n s ity , c p s 4.0e4 3.5e4 3.0e4 2.5e4 2.0e4 1.5e4 1.0e4 5000.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 Time, min 图A.1 氯虫苯甲酰胺标准物质总离子流色谱图 XIC of +MRM (2 pairs): 484.100/285.900 amu Expected RT: 5.1 ID: LCBJXA 1 from Sample 5 (0.1by-001) of bzqx.wiff (Turbo Spray) Max. 2.7e4 cps. 5.13 2.7e4 2.6e4 2.4e4 2.2e4 2.0e4 In te n s ity , c p s 1.8e4 1.6e4